Определение концентрации серогликоидов в крови.

Принцип метода. Под названием серогликоиды (или серомукоиды) объединяется группа гликопротеидов, которые не осаждаются серной кислотой, трихлоруксусной и сульфосалициловой кислотами. Метод основан на осаждении всех белков, кроме серогликоидов, хлорной кислотой. Серогликоиды выделяют осаждением фосфорновольфрамовой кислотой и по степени помутнения раствора судят о содержании серогликоидов.

Ход работы. К 0, 5 мл сыворотки приливают 4, 5 мл 0, 85% раствора хлористого натрия и добавляют по каплям 2, 5 мл 1, 8 H раствора хлорной кислоты. Хорошо перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Затем центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. 5 мл центрифугата смешивают с 1 мл 5% раствора фосфорновольфрамовой кислоты и через 15 мин измеряют мутность на ФЭКе в кювете толщиной 1 см при красном светофильтре против контроля. Контроль готовят, смешивая 3, 3 мл физиологического раствора с 1, 7 мл хлорной кислоты и 1 мл фосфорновольфрамовой кислоты.

Результат выражают в условных единицах – значении оптической плотности.

Норма содержания серогликоидов в крови – 0, 13-0, 2 условных единиц.

Диагностическое значение определения серогликоидов в крови:

Увеличение серогликоидов наблюдается при всех воспалительных и некробиотических процессах: у больных с инфарктом миокарда, желтушным синдромом (особенно на почве новообразования), злокачественной опухолью, обострением хронического холецистита, с деструктивной формой туберкулеза легких, ревматизмом, мозговым инсультом и другими патологическими состояниями.

Снижение серогликоидов наблюдается при инфекционном гепатите, гематоцеллюлярной дистрофии, рассеянном склерозе.

Вопросы к защите лабораторной работы:

1. Что такое серогликоиды?

2. Принцип метода определения концентрации серогликоидов в крови.

3. Зачем к сыворотке крови приливают раствор хлорной кислоты?

4. Каким образом рассчитывается концентрация серогликоидов?

5. Для чего проводится центрифугирование?

6. Какая существует связь между концентрацией серогликоидов и состоянием больного?

7. В каких случаях содержание серогликоидов в крови может быть высоким?

8. Можно ли на основании повышения концентрации серогликоидов диагности­ровать определенное заболевание?

5.4. Итоговый контроль знаний:

- вопросы по теме занятия:

1. Что такое гликопротеины и протеогликаны?

2. Каковы отличия в строении гликопротеинов и протеогликанов?

3. Принцип построения протеогликанов.

4. Строение и функции хондроитинсульфатов.

5. Строение и функции гиалуроновой кислоты.

6. Строение и функции гепарина.

7. Перечислите функции гликопротеинов.

8. Назовите основные группы гликопротеинов крови.

9. В чем медицинская ценность определения гликопротеинов крови?

- вопросы рубежного контроля:

1. Определение и классификация углеводов.

2. Функции углеводов.

3. Переваривание углеводов.

4. Обмен гликогена: синтез и распад гликогена, ключевые ферменты, регуляция, тка­невые особенности.

5. Гликолиз: ход реакций, характеристика двух этапов, аэробный и анаэробный гликолиз, ключевые ферменты, регуляция, значение, преимущества и недостатки ана­эробного гликолиза.

6. Гликогенолиз: ход реакций, конечные продукты, регуляция, значение.

7. Глюконеогенез: определение, субстраты, локализация, ключевые ферменты, регуляция, значение, энергозатраты.

8. Унификация углеводов: определение, локализация, значение.

9. Глюкозо-лактатный цикл. Значение.

10. Пентозофосфатный путь. Ход реакций в окислительной части. Представление о неокислительной части пентозофосфатного пути. Ключевые ферменты, регуляция. Значение ПФП. Пентозный цикл.

11. Пути образования и использования глюкозо-6-фосфата.

12. Регуляция глюкозы крови. Сахарные кривые.

13. Болезни нарушения углеводного обмена: дисахаридозы, гипо- и гипергликемия, галактоземия, гликогенозы, агликогенозы.

14. Гетерополисахариды: гликозаминогликаны (гепарин, гиалуроновая кислота, хондроитинсульфаты), протеогликаны и гликопротеины. Строение, функции.

15. Неферментативное гликозилирование белков. Значение.

- ситуационные задачи:

1. Базальные мембраны – специализированная форма межклеточного матрикса. В легочных альвеолах и почечных клубочках они выполняют функцию фильтрационного барьера с высокой избирательностью. Объясните, почему в моче в норме отсутствуют белки и форменные элементы крови. Для ответа на вопрос:

а) назовите структурные компоненты базальных мембран;

б) объясните, какие физико-химические свойства этих компонентов препятствуют появлению в моче белков и эритроцитов.

2. Одно из клинических проявлений цинги – кровоизлияния под кожу и слизистые оболочки. Недостаток какого витамина приводит к этому заболеванию? Для ответа на вопрос:

а) назовите этот витамин и его функцию в формировании межклеточного матрикса;

б) напишите реакцию гидроксилирования пролина и лизина;

в) укажите вещества, необходимые для протекания этой реакции.

3. У больного резко уменьшено время ретракции сгустка (протромбиновое время - тест для оценки количества фибриногена). Введение какого протеогликана будет целесообразным и почему?

6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (см. контрольные вопросы, тестовые задания и ситуационные задачи занятия №10).

7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой:

1. Биохимия внеклеточного матрикса.

2. Гликопротеины плазмы крови.

Рекомендуемая литература:

1. М.А. Пальцев, А.А. Иванов «Межклеточные взаимодействия», М., «Медицина», 1995.

2. Б. Албертс и др. «Молекулярная биология клетки». Пер. с англ., в 3 томах, М., «Мир», 1994.

3. М.Г. Шубич и др. «Адгезивные межклеточные взаимодействия»// «Архив патологии», 1997, т.59, №6, С. 741-753.

1. Занятие №10

Тема: « Переваривание липидов. Липолиз и липогенез. Обмен жирных кислот».

2. Форма организации занятия: лабораторное занятие.

3. Значение изучения темы: Жиры являются источником энергии в состояниях напряженной работы, а также при тяжелых стрессах и жизненно опасных ситуациях. Поэтому студенты должны знать, как происходит 1-ый этап катаболизма жира. При патологиях, приводящих к нарушению поступления желчи в тонкий кишечник, переваривание жира снижается или вообще останавливается, что может вызвать гипоэнергетическое состояние.

4. Цели обучения:

- общая:

Обучающийся должен обладать следующими общекультурными компетенциями (ОК): (ОК-1); (ОК-5).

Обучающийся должен обладать следующими профессиональными компетенциями (ПК): (ПК-2); (ПК-3); (ПК-4); (ПК-5); (ПК-9); (ПК-17);

(ПК-31).

- учебная:

зЗнать:

- Функции липидов.

- Переваривание жира.

- Липолиз. Липогенез.

уметь:

- Определять общие липиды и активность липазы в сыворотке крови.

- Делать выводы по результатам проведенных биохимических анализов.

владеть:

- Навыками лабораторного дела.

5. План изучения темы:

5.1. Контроль исходного уровня знаний:

ТЕСТЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ

1. ГЛАВНОЙ ФУНКЦИЕЙ ЛИПОИДОВ ЯВЛЯЕТСЯ

1) энергетическая

2) регуляторная

3) мембранная

4) механическая

2. ЛИПИДЫ НЕ МОГУТ НАХОДИТЬСЯ В КРОВИ В СВОБОДНОМ СОСТОЯНИИ, ТАК КАК

1) не растворимы в воде

2) токсичны

3) связывают биологически активные вещества крови

4) препятствуют свертыванию крови

3. ГИДРОЛИЗ - ЭТО

1) превращение одних изомеров в другие

2) расщепление связей с помощью воды, когда она присоединяется по месту разрыва этой связи

3) расщепление связей с помощью фосфорной кислоты

4) перенос электронов от одного вещества к другому

4. ГИДРОЛАЗЫ - ЭТО ФЕРМЕНТЫ, КАТАЛИЗИРУЮЩИЕ

1) перенос химических групп

2) синтез сложных веществ из простых с затратой АТФ

3) расщепление связей с помощью воды

4) расщепление связей без помощи воды

5. ЛИПОГЕНЕЗ

1) имеет регуляторное значение

2) имеет структурообразовательное значение

3) является резервом эндогенной воды

4) позволяет запасти энергетический материал впрок

Основные понятия и положения темы

Переваривание жира (ТГ) происходит под действием ферментов липаз (класса гидролаз), которые расщепляют сложноэфирные связи.

лингвальная липаза, желудочная липаза – имеют значение у детей.

Главным местом переваривания ТГ у взрослых является тонкий кишечник.На ТГ действует липаза поджелудочного сока. Которая вырабатывается в неактивном состоянии в виде пролипазы. Активация происходит при участии желчных кислот и колипазы. Липаза расщепляет ТГ, находящиеся в эмульгированном состоянии. Продуктами переваривания жира в кишечнике являются: глицерин, жирные кислоты, а также моноглицерины.

Роль желчных кислот в переваривании жира:

1. Активируют панкреатическую липазу.

2. Эмульгируют жир.

3. Необходимы для всасывания продуктов переваривания жира.

Внутри эпителиальных клеток кишечника происходит ресинтез жира

– это синтез жира, свойственного данному организму. Часть жирных кислот (НЭЖК) поступает в кровь и транспортируется альбуминами. Образованные в эпителиальных клетках ТГ покрываются оболочкой из белка и фосфолипидов и холестерина с образованием хиломикронов (ХМ).

ХМ транспортируют экзогенные липиды.

ХМ расщепляются липопротеинлипазой (ЛПЛ-за), которая действует на триглицеридную часть. Остаточный ХМ переносится в печень, где метаболизируется. Образовавшиеся в этом процессе НЭЖК в тканях сердца и мышц поглощаются и окисляются.

Возрастные особенности:

Потребность ребенка в жирах превышает потребность в белке, однако она ниже, чем потребность в углеводах.

У детей первых дней жизни потребность в энергии покрывается за счет жиров на 80-90%, у детей первых месяцев жизни – на 50%, в более старшем возрасте – на 30-35%.

Большое значение имеют полиненасыщенные жирные кислоты: линолевая, линоленовая арахидоновая. Недостаточность этих кислот ведет к задержке роста, физического развития, анемии и др. Линолевая кислота необходима для построения клеточных мембран, миелина. Потребности новорожденного в жирах полностью покрываются молоком матери.

Липолиз – это расщепление жира до глицерина и жирных кислот. Катализируется триглицеринлипазой, диглицеринлипазой и моноглицеринлипазой, которые действую соответственно на ТГ, ДГ и МГ. Триглицеринлипаза является лимитирующим ферментом липолиза. Активируют липолиз: катехоламины, глюкагон, СТГ, АКТГ, тироксин, липотропин гипофиза, цАМФ. Ингибирует липолизинсулин.

Липогенез – это синтез жира. Для синтеза жира необходимы глицерин и жирные кислоты в активных формах. Активной формой глицерина является 3-фосфоглицерол (α -глиицерофосфат). Активной формой жирной кислоты является ацил-КоА.

В жировой ткани 3-фосфоглицерол образуется из ДОАФ. Таким образом, синтез жира в жировой ткани происходит из углеводов. В печени и почках 3-фосфоглицерол образуется путем фосфорилирования глицерина под действием глицеролкиназы с затратой АТФ.

Ацил-КоА образуется при взаимодействии жирной кислоты с НSКоА с затратой АТФ под влиянием ацил-КоА-синтетазы.

Сборка триглицерида происходит из 3-фосфоглицерола и ацилов-КоА под действием ацилтрансферазы, (ход реакций смотрите в учебнике или лекции).

Ингибируют липогенез КА, СТГ, ЙТ, АКТГ, АДФ. Активируют – инсулин, эстрогены и АДФ.

Возрастные особенности:

Каждому периоду онтогенеза человека свойственны особенности обмена липидов. Во внутриутробном периоде липиды используются в основном как пластический материал, включаясь в растущие ткани, и мало расходуются на энергетические нужды. Этот период характеризуется значительным отложением жира в тканях – как резерв энергии для постнатального периода. В печени и жировой ткани в это время усилен липогенез. Основным источником энергии во внутриутробном периоде являются углеводы, а с первых часов постнатального периода – жиры. Глюкоза стимулирует липогенез, особенно в грудном возрасте.

5.3. Самостоятельная работа по теме: