Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Подготовка к анализу. Перед выполнением анализа должны быть проведены следующие работы:
|
|
Перед выполнением анализа должны быть проведены следующие работы:
1. Приготовление питательных сред.
| Среда № 1: | Среда № 2: |
| пептон ферментативный сухой - 10 г, ГОСТ 13805-76; натрия хлорид - 5 г, ТУ 6-09-5222-85; глюкоза - 1 г, ГОСТ 6038-79; агар микробиологический - 13 г, ГОСТ 17206-71; мясная вода (1: 2) - 1000 см3, ГОСТ 20729-75; рН после стерилизации 7, 3 ± 0, 2. | Пептон ферментативный сухой - 10 г; Глюкоза - 40 г; агар микробиологический - 13 г; вода дистиллированная - 1000 см3; рН после стерилизации (5, 6±0, 2). |
| Среда № 3: | Среда № 6: |
| пептон ферментативный сухой - 10 г, ГОСТ 13805-76; натрий фосфат двузамещенный - 7, 5 г, ГОСТ 11773-76; калий фосфат однозамещенный - 2, 5 г, ГОСТ 4198-75; глюкоза – 10 г; феноловый красный - 0, 08 г; малахитовый зеленый - 0, 015 г; мясная вода (1: 2) - 1000 см3; рН после стерилизации (7, 3±0, 2). | Пептон ферментативный сухой - 10 г; Натрия хлорид - 5 г; Глюкоза - 40 г; Феноловый красный - 0, 08 г; Мясная вода (1: 2) - 1000 см3; рН после стерилизации (7, 2±0, 2). |
| Среда № 7: | Среда № 8: |
| пептон ферментативный сухой - 5 г; натрия хлорид - 5 г; калия нитрат - 1, 5 г, ГОСТ 4144-79; вода дистиллированная - 1000 см3; рН после стерилизации (7, 3±0, 2). | Пептон ферментативный сухой - 10 г; Натрия хлорид - 5 г; Калия фосфат двузамещенный -2, 5г, ТУ 6-09-4689-78; Глюкоза - 2, 5 г; вода дистиллированная - 1000 см3; рН после стерилизации (7, 3±0, 2). |
| Среда № 9: | Среда № 10: |
| пептон ферментативный сухой 20 г; магния хлорида безводного 1, 4 г; калия сульфата безводного 10 г ГОСТ 4145-74; глицерин 10 г ГОСТ 6829-77; агар микробиологический 15 г; вода дистиллированная 1000 см3; рН (7, 2±0, 2). | Пептон ферментативный сухой - 10 г; Натрия хлорид - 75 г; Маннит - 10 г, ГОСТ 8321-74; Феноловый красный - 0, 025 г; агар микробиологический - 15 г; вода дистиллированная - 1000 см3; рН после стерилизации (7, 4±0, 2). |
Среды №№ 4 и 5 готовят согласно прописи на этикетке.
Среды стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре 121 оС в течение 15 минут.
2. Приготовление растворов и реактивов.
1/15 мол Фосфатный буферный раствор с хлоридом натрия и пептоном:
калия фосфат однозамещенный - 3, 56 г;
натрия фосфат двузамещенный - 7, 23 г, ГОСТ 11773-76;
натрия хлорид - 4, 3 г;
пептон ферментативный сухой - 1 г;
вода дистиллированная - 1000 см3.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре – 121 оС в течение 15 минут. Раствор хранят при температуре от 4 до 10 оС.
Малахитовый зеленый, 0, 5 % раствор:
малахитовый зеленый - 0, 5 г;
вода дистиллированная - 1000 см3.
Навеску красителя переносят в стеклянный флакон, прибавляют стерильную горячую воду, помещают на сутки в термостат при температуре 37 0С, периодически встряхивая.
Феноловый красный, 1 % раствор:
феноловый красный - 1 г;
раствор едкого натра (0, 1 моль/л) - 28, 2 см3;
вода дистиллированная - 100 см3.
Навеску индикатора растирают в ступке, прибавляя небольшими порциями раствор едкого натра. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора водой до метки. Хранят во флаконе из нейтрального светозащитного стекла при температуре от 4 до 10 оС.
Реактив Грисса:
раствор № 1 - 0, 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 30 см3 ледяной уксусной кислоты. К полученному раствору добавляют 100 см3 воды, фильтруют. Раствор годен 1 месяц;
раствор № 2 - 0, 1 г 1-нафтиламина, ГОСТ 8827-74, растворяют в 100 см3 кипящей воды. Охлаждают. К полученному раствору добавляют 30 см3 ледяной уксусной кислоты, ГОСТ 61-75, фильтруют. Раствор годен в течение 7 суток.
Перед употреблением растворы № 1 и № 2 смешивают в соотношении 1: 1.
Реактив на цитохромоксидазу:
раствор № 1 – 1 % спиртовый раствор нафтола–1, ГОСТ 5838-79.
раствор № 2 – 1 % раствор N, N–диметил–р-фенилендиамина дигидрохлорида, ТУ 6-09-1903-77.
Растворы № 1 и № 2 смешивают в соотношении 2: 3. Раствор годен в течение 14 суток при хранении во флаконах из нейтрального светозащитного стекла при температуре (4-10) оС.