Главная страница
Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Шаг 3. Разведите 50-кратные растворы
Подготовьте по 50 мл бутылке или пробирке для растворов антигена, первичных и вторичных антител. Подготовьте по 15 мл пробирке для образцов учеников «А» и «Б». Используйте чистую пипетку, чтобы добавить нужное количество концентрированного стокового раствора в соответствующую бутылку или пробирку.
Раствор
| Объем
| Реагент
| Используется для
| 1х антиген
| 24.5 мл
| 1х PBS
| Положительный контроль
Концентрат для приготовления образцов «А» и «Б»
Образец известной концентрации
| 0.5 мл
| 50x антиген
| Внимание: не добавляйте раствор, содержащий Твин 20 в раствор антигена, иначе эксперимент не будет работать
| 1х раствор первичных антител
| 24.5 мл
| Промывочный буфер
| Первичные антитела
| 0.5 мл
| 50х кратный раствор первичных антител
| С помощью пипетки промойте флакон с 50х раствором антител приготовленным однократным раствором, чтобы смыть остатки стокового раствора со стенок
Закройте бутыль или пробирку с приготовленным раствором крышкой и хорошо перемешайте
| 1х раствор вторичных антител
| 24.5 мл
| Промывочный буфер
| Вторичные антитела
| 0.5 мл
| 50х раствор вторичных антител
| Разводите вторичные антитела не ранее чем за сутки до начала работы
С помощью пипетки промойте флакон с 50х раствором антител приготовленным однократным раствором, чтобы смыть остатки стокового раствора со стенок
Закройте бутыль или пробирку с приготовленным раствором крышкой и хорошо перемешайте
| Антиген, 125 нг/мл (раствор «А») в 15 мл пробирке
| 8.75 мл
| 1х PBS
| Образец А
| 1.25 мл
| 1х антиген
| Антиген, 25 нг/мл (раствор «Б») в 15 мл пробирке
| 9.75 мл
| 1х PBS
| Образец Б
| 0.25 мл
| 1х антиген
| | Закройте 15 мл пробирки и хорошо перемешайте
|
|
Шаг 4. Приготовьте аликвоты растворов для обеспечения всех рабочих мест
Пробирки
| Описание
| Подписать
| Содержимое
| Фиолетовые пробирки, 12 шт
| Положительный контроль
| «+»
| 0.5 мл раствора антигена (положительный контроль)
| Синие пробирки, 12 шт
| Отрицательный контроль
| «-»
| 0.5 мл 1х PBS
| Зеленые пробирки, 12 шт
| Первичные антитела
| «П.А.»
| 1.5 мл 1х раствора первичных антител
| Оранжевые пробирки, 12 шт
| Вторичные антитела
| «В.А.»
| 1.5 мл 1х раствора вторичных антител
| Коричневые пробирки, 12 шт
| Субстрат пероксидазы (ТМБ)
| «Субстрат»
| 1.5. мл раствора ТМБ
| Внимание: ТМБ чувствителен к свету, поэтому важно хранить его именно в темных пробирках.
| Желтые пробирки, 12 шт
| Образец известной концентрации
| «Антиген, 1000 нг/мл»
| 0.25 мл 1х раствора антигена
| Желтые пробирки, 12 шт
| 1х PBS
| «PBS»
| 1 мл 1х PBS
| Желтые пробирки, 12 шт
| Антиген, 125 нг/мл
| «А»
| 0.25 мл раствора «А»
| Желтые пробирки, 12 шт
| Антиген, 25 нг/мл
| «Б»
| 0.25 мл раствора «Б»
|
Шаг 5. Подготовьте рабочие места учеников
|