Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Визначення глюкози у плазмі крові глюкозо-оксидазним методом
|
|
Принцип методу. Глюкоза в присутності глюкозо-оксидази окиснюється киснем повітря до глюконової кислоти та перекису водню. Останній у присутності пероксидази вступає в реакцію з фенолом і 4-амінофеназоном з утворенням хіноніміну червоно-фіолетового кольору, інтенсивність якого визначається фотометрично.
Обладнання та реактиви: фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; розчин ферментів (пероксидаза); фосфатний буферний розчин (рН 7, 4), антикоагулянт (суха суміш 0, 536 г натрію щавлевокислого і 3, 4 г натрію хлориду); калібрувальний розчин (вміст глюкози – 10, 0 ммоль/л).
Приготування робочого розчину. У колбу ємністю 200 мл перенести вміст флакона з буферним розчином, додати 100–120 мл дистильованої води, розчин ферментів і довести до мітки дистильованою водою.
Приготування розчину антикоагулянту. У колбу ємністю 500 мл внести суміш антикоагулянта і додати 400 мл дистильованої води, перемішати до повного розчинення кристалів солей. За необхідності розчин фільтрують.
Хід визначення. Для отримання плазми 0, 1 мл крові змішують з 0, 9 мл розчину антикоагулянта і центрифугують 10 хв при 2000 об/хв.
Визначення глюкози проводять на фотоелектроколориметрі (довжина хвилі 500–546 нм) або на спектрофотометрі (500 нм) у кюветі з товщиною оптичного шару 10 або 5 мм згідно схеми, поданої у таблиці 18. Якщо вміст глюкози у плазмі крові більше 27, 7 ммоль/л, її
потрібно розвести ізотонічним розчином у 5 разів і повторити визначення.
Таблиця 18 – Схема визначення глюкози у плазмі крові
| Речовина | Калібрувальна проба | Дослідна проба | Контрольна проба |
| Калібрувальний розчин | 0, 04 | – | – |
| Плазма крові | – | 0, 4 | – |
| 0, 85 %-ний розчин NaCl | 0, 4 | – | 0, 4 |
| Робочий розчин | 4, 0 | 4, 0 | 4, 0 |
| Усе змішати, витримати 20 хв при кімнатній температурі (18–25°С) або 12 хв у термостаті (37°С). Виміряти поглинання дослідної проби (А), калібрувального розчину (В) проти контрольної проби. |
Розрахунок вмісту глюкози у плазмі крові проводять за формулою:
де: С – концентрація глюкози, ммоль/л; 10 – стабільна величина; А – поглинання дослідної проби; В – поглинання калібрувального розчину; К – коефіцієнт розведення плазми крові.
Підвищення вмісту глюкози (табл. 19) у крові – гіперглікемія – виникає після прийому великої кількості цукрів з кормами, при стресових станах, недостатній секреції інсуліну (цукровий діабет), гіперфункції надниркових залоз.
Таблиця 19 – Вміст глюкози у крові тварин
| Вид тварин | мг/100 мл | ммоль/л | Вид тварин | мг/100 мл | ммоль/л |
| Телята до 3-місячного віку Доросла велика рогата худоба Вівці Свині | 40–75 40–60 35–60 45–75 | 2, 22–4, 16 2, 22–3, 33 1, 94–3, 33 2, 5–4, 16 | Коні Собаки Кролі Кури | 55–95 60–80 75–95 80–140 | 3, 05–5, 27 3, 33–4, 44 4, 16–5, 27 4, 44–7, 77 |
Зменшення рівня глюкози у крові – гіпоглікемія – спостерігається при кетозі, гепатиті, гепатодистрофії, шлунково-кишкових та респіраторних захворюваннях молодняку, гіпоглікемії поросят, гіперінсулінемії.