![]() Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Визначення глюкози у плазмі крові глюкозо-оксидазним методом
Принцип методу. Глюкоза в присутності глюкозо-оксидази окиснюється киснем повітря до глюконової кислоти та перекису водню. Останній у присутності пероксидази вступає в реакцію з фенолом і 4-амінофеназоном з утворенням хіноніміну червоно-фіолетового кольору, інтенсивність якого визначається фотометрично. Обладнання та реактиви: фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; розчин ферментів (пероксидаза); фосфатний буферний розчин (рН 7, 4), антикоагулянт (суха суміш 0, 536 г натрію щавлевокислого і 3, 4 г натрію хлориду); калібрувальний розчин (вміст глюкози – 10, 0 ммоль/л). Приготування робочого розчину. У колбу ємністю 200 мл перенести вміст флакона з буферним розчином, додати 100–120 мл дистильованої води, розчин ферментів і довести до мітки дистильованою водою. Приготування розчину антикоагулянту. У колбу ємністю 500 мл внести суміш антикоагулянта і додати 400 мл дистильованої води, перемішати до повного розчинення кристалів солей. За необхідності розчин фільтрують. Хід визначення. Для отримання плазми 0, 1 мл крові змішують з 0, 9 мл розчину антикоагулянта і центрифугують 10 хв при 2000 об/хв. Визначення глюкози проводять на фотоелектроколориметрі (довжина хвилі 500–546 нм) або на спектрофотометрі (500 нм) у кюветі з товщиною оптичного шару 10 або 5 мм згідно схеми, поданої у таблиці 18. Якщо вміст глюкози у плазмі крові більше 27, 7 ммоль/л, її
Таблиця 18 – Схема визначення глюкози у плазмі крові
Розрахунок вмісту глюкози у плазмі крові проводять за формулою: де: С – концентрація глюкози, ммоль/л; 10 – стабільна величина; А – поглинання дослідної проби; В – поглинання калібрувального розчину; К – коефіцієнт розведення плазми крові. Підвищення вмісту глюкози (табл. 19) у крові – гіперглікемія – виникає після прийому великої кількості цукрів з кормами, при стресових станах, недостатній секреції інсуліну (цукровий діабет), гіперфункції надниркових залоз.
Таблиця 19 – Вміст глюкози у крові тварин
Зменшення рівня глюкози у крові – гіпоглікемія – спостерігається при кетозі, гепатиті, гепатодистрофії, шлунково-кишкових та респіраторних захворюваннях молодняку, гіпоглікемії поросят, гіперінсулінемії.
|