Заведующий кафедрой, д.м.н. Кафедра клинической лабораторной диагностики

Кафедра клинической лабораторной диагностики

Утверждено на заседании кафедры

Протокол №…. от…. 2005 года

Заведующий кафедрой, д.м.н.

---------------------Новикова И.А.

Микробиологическая диагностика
пищевых токсикоинфекций и интоксикаций.

Учебно-методическое пособие для студентов

Автор: доцент кафедры, Ильинская Т.Н.

Гомель, 2005 год

Введение.

Острые кишечные инфекции (ОКЗ) разделяют на специфические, вызванные облигатно-патогенными микробами, и неспецифические (оппортунистические), возбудители которых относятся к группе условно-патогенных микробов.

К специфическим инфекциям относят брюшной тиф, паратиф А и В, другие сальмонеллезы, дизентерии, бруцеллез, лептоспироз, вирусные гепатиты, полиомиелит и другие вирусные инфекции, амебиаз, балантидиаз, гельминтозы. К этой группе ОКЗ, вероятно, следует также отнести кишечный иерсиниоз и колиэнтерит, вызванный энтеропатогенными кишечными палочками.

Оппортунистнческие ОКЗ вызываются Еscherichia coli, Citrobacter freundii, Klesiella pneumoniae, Serratia marcesens, Hafnia alvei, Arizona, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Campilobacter jejuni, Staphylocoocus aiureus. Streptococcus faecalis, Bacillus cereus.

Цель: Получение знаний и практических навыков по вопросам микробиологической диагностики основных возбудителей заболеваний органов желудочно-кишечного тракта.

Задачи:

· Знать основных возбудителей заболеваний органов желудочно-кишечного тракта.

· Знать этапы выделения и идентификации возбудителей заболеваний органов желудочно-кишечного тракта.

· Уметь собирать и доставлять патологический материал

· Иметь навыки в постановке диагностических реакций.

· Уметь оценить полученные результаты и выдать заключение по проведенному исследованию.

Практические навыки:

· Сбор и доставка патологического материала.

· Посев материала на селективные и неселективные среды.

· Отбор подозрительных колоний и выделение чистых культур.

· Идентификация по биохимическим свойствам

· Постановка реакции антибиотикочувствительности.

· Оценка полученных результатов.

· Выдача заключения по проведенному исследованию.

Основные учебные вопросы:

1. Основные возбудители оппортунистических ОКЗ.

2. Эшерихиозы. Патогенез. Клиническое течение.

3. Особенности микробиологической диагностики эшерихиозов. Значение серологических методов. Определение вирулентности эшерихий. Исследование инвазивности. Исследование адгезивных свойств. Определение токсигенности. Идентификация патогенных эшерихий методом гибридизации ДНК.

4. Микробиологическая диагностика кампилобактерной инфекции.

5. Микробиологическая диагностика токсикоинфекций, вызванных стафилококком золотистым и B.cereus.

6. Иерсинии. Классификация. Иерсиниозы. Кишечный иерсиниоз. Псевдотуберкулез

7. Микробиологическая диагностика иерсиниозной инфекции. Методы экспресс-диагностики иерсиниозов.

8. Сальмонеллезные гастроэнтериты. Лабораторная диагностика.

9. Другие представители энтеробактерий: Род Klebsiella. Род Proteus. Значение в патогенезе заболеваний органов ЖКТ.

10. Род Morganella. Значение в патогенезе заболеваний органов ЖКТ.

11. Род Enterobacter. Значение в патогенезе заболеваний органов ЖКТ. Лабораторная диагностика ОКЗ, вызванных энтеробактерами.

Основная литература:

1. Клиническая лабораторная аналитика. Том IV./ Под ред. В.В. Меньшикова. –М.: Агат-Мед, 2003.-816 с.

2. Медицинская микробиология. Часть первая./ Под. ред. А.М. Королюка и В.Б. Сбойчакова. –СПб., 1999. – 272с.

3. А.Н. Маянский Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии). Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 1999.

4. Медицинская микробиология./ Под. ред. В.И. Покровского. –М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. –

5. Конспект лекций.

Дополнительная литература:

1. Приказ №535 то 22апреля 1985 года.

2. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для мед. вузов./ Под. ред. А.И. Коротяева, С.А. Бабичева –СПб.: СпецЛит, 2000,

Вспомогательные материалы по теме:

ОКЗ чаще протекают по типу пищевой токсикоинфекции, реже - микробной интоксикации (стафилококковая, клостридиальная) и инфекционного заболевания (эшерихиозы, кампилобактериозы). Холецистит, панкреатит, аппендицит, перитонит, парапроктит относят к другой группе оппортунистических инфекций - гнойно-воспалительной.

Заражение ОКЗ происходит в результате приема контаминированной микробами пищи, в которую они попадают от людей - больных и носителей, реже от животных. В пищевых продуктах указанные виды бактерий способны к размножению в условиях комнатной температуры, а псевдомонады и клебсиеллы - при температуре бытового холодильника. При размножении стафилококка и клостридий в пищевых продуктах накапливается экзотоксин. Кроме алиментарного, возможна передача возбудителей контактно-бытовым путем и через воду, хотя эти пути в большинстве случаев не могут обеспечить попадание в организм достаточной инфицирующей дозы.

Инкубационный период короткий. Прием пищи, содержащей стафилококковый энтеротоксин и клостридиальные экзотоксины, приводит к развитию заболевания уже через 2-3 часа и даже через полчаса. При заражении протеем, клебсиеллами, энтерококком, цереусом инкубационный период составляет 5-24 часа. При попадании малой дозы возбудителя инкубационный период может удлиняться до 2-3 дней. При кампилобактериозе и эшерихиозе он может затягиваться до 5-7 дней. В развитии заболевания, кроме попадания высокой инфицирующей дозы, патогенности возбудителя, большое значение имеют условия, способствующие быстрому и массовому размножению возбудителя в тонком кишечнике или желудке. У стафилококка и клостридий главным фактором патогенности является экзотоксин, у остальных микробов - эндотоксин, который выделяется в больших количествах при массовом распаде попавших в кишечник бактерий и оказывает местное цитотоксическое действие, действие на интрамуральный нервный аппарат кишечника, периферические сосуды и клетки других органов. Некоторые варианты эшерихий, клебсиелл, псевдомонад дополнительно продуцируют экзотоксин, капсульную субстанцию, ферменты-токсины, которые также оказывают прямое или косвенное повреждающее действие.

Начало болезни, как правило, острое, а нередко и бурное. В клиническом течении выделяют три синдрома: общетоксичеокий, энтеральный и более редкий - септический. В одних случаях заболевание начинается с общетоксического синдрома (озноб, лихорадка, головная и мышечная боли, слабость, головокружение и др.), в других - с энтерального (тошнота, рвота, понос, боли в животе). Оба эти синдрома могут проявляться и одновременно. Клиника заболевания проявляется в виде гастрита, энтерита, гастроэнтерита, колита, энтероколита и гастроэнтероколита. Любой из названных видов микробов может вызвать любую форму заболеваний, но при обобщенном анализе выявляется некоторая специфика. ОКЗ стафилококковой этиология чаще протекает как гастритили гастроэнтерит. Также по типу гастрита и гастроэнтерита протекают ОКЗ, вызванные цитробактером, цереусом, протеем, клебсиеллами. Кишечная палочка вызывает колит, энтерит или энтероколит. Большинство возбудителей вызывает легкие или средней тяжести заболевания. Кишечная палочка может вызывать тяжелые формы, сопровождающиеся обезвоживаниемилиосложняющиеся сепсисом. Кампилобактериоз также может осложняться сепсисом. Инфекция, вызванная клостридией перфрингенс, может протекать по типу выраженной интоксикации, сепсиса, некротического энтерита, обезвоживающего организм энтерита.

Оппортунистические ОКЗ обычно заканчивается клиническим выздоровлением через 5-6 дней или даже раньше, воспалительные явления в кишечнике могут наблюдаться до 7-10 дней, период освобождения организма от возбудителя может затягиваться на длительное время. Переход в затяжное и хроническое течение наблюдается при клостридиальной и псевдомонадной этиологии. Септические формы болезни могут дать летальный исход.

Микробиологическая диагностика. Для постановки этиологического диагноза оппортунистических ОКЗ используют, главным образом, бактериологический метод. При хронических и затяжных формах в сыворотке больного нередко выявляют нарастание антител к доминирующей аутокультуре.

Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты и сырье, с которыми связывают развитие болезни. Материал должен быть исследован в первые часы после забора, при отсутствии такой возможности, его помещают в консервант (фосфатно-глицериновую смесь или другие).

Исследование на условно-патогенные микробы часто производят после того, как из материала не удается выделять облигатно-патогенных возбудителей. Однако целесообразно, а при остром токсико-энтеральном начале обязательно надо вести параллельное исследование на условно-патогенные бактерии.

Материал засевают на дифференциально-диагностические среды, позволяющие наряду с облигатно-патогенными выделить условно-патогенные микробы. Испражнения, рвотные массы, продукты в количестве около I г суспензируют в 10 мл 0, 5% раствора хлорида натрия, встряхивают, отстаивают 15 минут и надосадочную жидкость засевают на дифференциально-диагностические среды для облигатно-патогенных возбудителей ОКЗ. Для выделения условно-патогенных бактерий разведения материала, как указано в обобщенной схеме, засевают на чашки со средами Левина (Эндо) - для выделения энтеробактерий, ЖСА (для стафилококков), МПА с фурагином (для псевдомонад), щелочной агар (для вибрионов). МПА (для бацилл), среду Китта-Тароцци (для клостридий).

Выделяют чистые культуры, проводят их идентификацию, определяют чувствительность к антибиотикам, определяют факторы патогенности.

Оценка этиологической роли выделенных культур проводится на основании соответствия перечисленным выше критериям. Главным из них является количественный. Этиологически значимой для отсутствующих или присутствующих в небольшом количестве в кишечнике здоровых людей видов является величина 10⁶ КОЕ в г(мл) материала и больше. При выделении кишечной палочки, которая в кишечнике у здоровых людей находится в очень больших количествах, нужны дополнительные критерии. При заболеваниях, протекающих по типу пищевого отравления, диагноз становится более достоверным при обнаружении такой же культуры в пищевом продукте и у группы лиц, его принимавших. В случаях выделения условно-патогенного микроба в этиологически значимых количествах наряду с облигатно-патогенным следует думать о сопутствующем дисбактериозе или вторичной оппортунистической инфекции, осложнившей течение основного заболевания.