Тема: Микробиологическая диагностика бактериальных кишечных инфекций.

Цель: На основе знаний свойств возбудителей бактериальных кишечных инфекций, их морфофизиологических, биохимических и серологических свойств, эпидемиологии и особенностей патогенеза вызываемых ими заболеваний уметь обосновать тактику микробиологической диагностики и профилактику вызываемых ими заболеваний.

Знать:

1. Особенности возбудителей бактериальных кишечных инфекций, определяющие их роль в инфекционной патологии человека.

2. Морфофизиологические и биохимические свойства, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета, вызываемых ими заболеваний.

3. Материал и методы микробиологической диагностики бактериальных кишечных инфекций.

4. Неспецифическую профилактику бактериальных кишечных инфекций.

Уметь:

1. Отобрать на средах первичного посева характерные для бактериальных кишечных инфекций колонии.

2. Изучить морфо-тинкториальные свойства и проверить чистоту выделенных культур.

3. Учесть и оценить результаты изучения биохимических (среда Ресселя, «пестрый ряд») и антигенных свойств культур с целью их идентификации.

4. Учесть и оценить результаты РА с целью серологической идентификации культуры.

5. Заполнить бланки-направления и бланки-ответы из бак. лаборатории.

Контрольные вопросы:

1. Классификация и морфофизиологические свойства возбудителей бактериальных кишечных инфекций.

2. Факторы вирулентности возбудителей бактериальных кишечных инфекций.

3. Особенности эпидемиологии и патогенеза заболеваний, вызываемых возбудителями бактериальных кишечных инфекций.

4. Материалы и методы микробиологической диагностики.

5. Оценка чувствительности выделенных штаммов к антибиотикам.

Задания, выполняемые в ходе занятия:

Задание 1. Провести микроскопию Грам отрицательных бактериальных культур. Окраска по методу Грама.

Escherichia coli Shigella sonnei Salmonella enterica

subsp. Enteritidis

Salmonella enterica

subsp.Typhimurium Proteus vulgaris Klebsiella pneumoniae

Задание 2. Задача. Бактериологическая диагностика колиэнтеритов.

В бактериологическую лабораторию поступил материал (испражнения) от больного с подозрением на острый колит. В анамнезе: учащенный стул с примесью слизи и, часто, тенезмами, схваткообразными болями в животе. Были проведены следующие лабораторные тесты:

1). Посев исследуемого материала на среду Эндо (питательная основа, сульфит натрия и фуксин основной - подавляют рост грамположительных микроорганизмов, a-D-лактоза):

Оцените результат. Опишите, выявленные колонии: _________________________

Объясните причину окраски колоний на среде Эндо: _________________________

2). Провели тест на каталазу

Вывод: ______________________________________________

3). Определяли биохимические свойства выделенной культуры:

Сравните полученные данные с таблицей и определите род микроорганизма-возбудителя заболевания.

_____________________________________________________________________________

Биохимические свойства грамотрицательных бактерий

4). Провели серологическую идентификацию чистой культуры. Оцените результат РА на стекле с агглютинирующими сыворотками:

Вывод: _____________________________________________________________

Возбудители Esherichia coli четырех подгрупп:

- энтеропатогенные (ЭПЭ), серотипы 026: В6, 055: В5, 086: В7, 0111: В4, 0124—0128;

- энтеротоксигенные (ЭТЭ), серотипы 06-09, 015, 020;

- энтероинвазивные (ЭИЭ), серотипы 028, 032, 0112, 0115, 0124

- энтерогеморрагические (ЭГЭ), серотипы 0155 Н7 и др., выделяющие цитотоксины.

5). Определили чувствительность к антибиотикам:

ампициллин гентамицин

имипенем ципрофлоксацин цефотенам

Вывод: __________________________________________________________

Задание 3. Задача. Бактериологическая диагностика дизентерии.

В бактериологическую лабораторию поступил материал от больного с подозрением на дизентерию. В анамнезе: повышение температуры тела до 38-39°С, озноб, головная боль, тошнота, рвота. Больного беспокоят режущие схваткообразные боли в левой подвздошной области. Частый жидкий стул, без патологических примесей, с течением заболевания с большим количеством слизи с прожилками крови, а иногда и примеси гноя.

1). Какой материал можно взять для исследования:

Были проведены следующие лабораторные тесты:

2). Посев на среду Плоскирева (предназначена для выделения бактерий родов Shigella и Salmonella в состав среды входит лактоза).

Определите какие колонии являются подозрительными._______________________________

2). Посев на среду Эндо и среду с глюкозой: ________________________________

Вывод: ______________________________________________________________________

3). Определяли биохимические свойства выделенной культуры:

Сравните полученные данные с таблицей (см. задача 1) и определите род микроорганизма-возбудителя заболевания.

___________________________________________________________________________

4). Провели серию серологических реакций для идентификацию чистой культуры. Оцените результат РА на стекле с агглютинирующими сыворотками:

Этап №1

Этап №2

Вывод: ______________________________________________________________

Задание 4. Задача. Бактериологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

В бактериологическую лабораторию поступил материал от больного с подозрением на дизентерию. В анамнезе: повышение температуры до 38-39°С, выраженная слабость, анорексия, головная боль, диарея. Язык утолщен, обложен серо-коричневатым налетом, с отпечатками зубов по краям. Увеличены печень и селезенка. На коже верхних отделов живота и нижних отделов грудной клетки обнаружена сыпь, число ее элементов 5-6, по характеру розеолезная.

1). Укажите какой материал можно взять на исследование:

___________________________________________________________________________

2). Оцените результат посева на Среду Эндо, среду с глюкозой и среду Вильсона-Блера:

Среда Эндо

Среда с глюкозой и 10% желчи________________________________________

Среда Вильсона- Блера__________________________________

3). Определяли биохимические свойства выделенной культуры:

Сравните полученные данные с таблицей (см. задача 1) и определите род микроорганизма-возбудителя заболевания.

________________________________________________________________________

4).С целью серодиагностики поставлена реакция Видаля. Реакция Видаля — реакция агглютинации, применяемая для диагностики брюшного тифа и некоторых тифо-паратифозных заболеваний. К различным разведениям сыворотки крови больного добавляют смыв культур возбудителя (брюшного тифа, паратифов) или диагностикумы — стандартные растворы антигенов. После выдерживания в термостате наступает агглютинация в виде зерен, хлопьев, выпадающих в осадок.

Вывод: _____________________________________________________________________________________________________________________________________________

5).Тест на фаготипирование по методу Фишера

Испытуемую суточную бульонную культуру засевают на МПА, затем условно делят чашку на квадраты. В каждый квадрат наносят по одной капле различных фагов. После суточной инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых отмечается лизис бактерий. Фаготип бактериальной культуры определяется типом лизирующего ее фага.   В квадрат №8 внесен фаг к Salmonella enterica subsp.Typhi

Вывод___________________________________________________

Какой тест нужно провести, чтобы назначит лечение пациента? ___________________________

6). Через месяц после перенесенного заболевания у пациента взяли кровь для выявления Vi-антигена. (Наряду с другими антигенами возбудитель брюшного тифа содержит Vi-антиген, который обеспечивает устойчивость возбудителя к фагоцитозу (способности специализированных клеток организма, фагоцитов, поглощать и переваривать чужеродные частицы, в том числе и микроорганизмы), способствует хронизации инфекции и брюшнотифозному бактерионосительству.)

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Вывод________________________________________________________________

Вопросы для самоконтроля:

1. Обоснуйте выбор сред для первичного посева испражнений с целью диагностики бактериальной дизентерии.

2. Назовите виды шигелл, имеющие наибольшее эпидемиологическое значение на современном этапе.

3. Почему бактериальную дизентерию называют болезнью «грязных рук»? Обоснуйте.

4. Обоснуйте выбор методов микробиологической диагностики острой и хронической бактериальной дизентерии.

5. Назовите время выдачи положительного ответа из бак. лаборатории при подозрении на бактериальную дизентерию.

6. Какие свойства лежат в основе дифференциации и идентификации шигелл.

7. Меры неспецифической профилактики бактериальной дизентерии.

Литература:

Учебники:

1. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. – М.: ООО «МИА», 2005. – С. 385-389.

2. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 357-360, 365, 369-371.