Световая микроскопия, особенности. Способы подготовки препаратов для световой микроскопии

Цитология как наука. Предмет цитологии. Задачи цитологии.

1)Цитология(гр.cytos - клетка + logos – учение) – наука о строении, развитии и функциях клеток животных и растительных клеток. Теоретическим основанием цитологии является клеточная теория.

2)Предмет цитологии.Клетки про- и эукариот, клетки животных и растительных одноклеточных и многоклеточных организмов.

3)Установить как построена клетка и как она выполняет свои нормальные функции. Изучением клеток занимаются, также патоморфологические. В 1839г началось развитие современной цитологии.

Цитология как наука. Методы цитологии.

1)Цитология(гр.cytos - клетка + logos – учение) – наука о строении, развитии и функциях клеток животных и растительных клеток. Теоретическим основанием цитологии является клеточная теория.

2)Методы исследования: микроскопия с применением гистологической техники, гистохимические методы, цитохимические методы

Световая микроскопия, особенности. Способы подготовки препаратов для световой микроскопии

Обычная световая микроскопия, Фазово-контрастная, Интерференционная, Темнопольная, Люминесцентная (флюоресцентная), поляризационная

Метод светлого поля в проходящем свете: применяется при исследовании прозрачных препаратов с включенными в них абсорбирующими (поглощающими свет) частицами и деталями. Таковы, например, тонкие окрашенные срезы животных и растительных тканей, В отсутствие препарата пучок света из конденсора, проходя через объектив, даёт вблизи фокальной плоскости окуляра равномерно освещенное поле. Если в препарате имеется абсорбирующий элемент, то он отчасти поглощает и отчасти рассеивает падающий на него свет, что и обусловливает появление изображения.

Метод темного поля: Применяется для получения изображений прозрачных неабсорбирующих объектов. В темнопольном микроскопе лучи от осветителя и зеркала направляются сбоку на препарат конденсором специальной конструкции По выходе из конденсора основная часть лучей света, не изменившая своего направления при прохождении через прозрачный препарат, образует пучок в виде полого конуса и не попадает в объектив. Изображение в М. создаётся лишь небольшой частью лучей, рассеянных микрочастицами находящегося на предметном стекле препарата внутрь конуса и прошедшими через объектив. Клетка выглядит как освещенный объект на темном поле.

Метод ФК основан на том, что даже при очень малых различиях в показателях преломления разных элементов препарата световая волна, проходящая через них, претерпевает разные изменения по фазе (приобретает т. н. фазовый рельеф). Эти фазовые изменения, не воспринимаемые непосредственно ни глазом, ни фотопластинкой, с помощью специального оптического устройства преобразуются в изменения амплитуды световой волны, т. е. в изменения яркости («амплитудный рельеф»), которые уже различимы глазом. Т.е. в получаемом видимом изображении распределение яркостей (амплитуд) воспроизводит фазовый рельеф.

Метод интерференционного контраста состоит в том, что каждый луч, входящий в М., раздваивается; один из полученных лучей направляется сквозь наблюдаемую частицу, а второй — мимо неё по той же или дополнительной оптической ветви М. В окулярной части М. оба луча вновь соединяются и интерферируют между собой. Результат интерференции определяется разностью хода лучей

Люминесцентная микроскопия, или флуоресцентная микроскопия: Метод исследования в свете люминесценции заключается в наблюдении под М. зелено-оранжевого свечения микрообъектов, которое возникает при их освещении сине-фиолетовым светом или не видимыми глазом ультрафиолетовыми лучами. При этом методе в оптическую схему микроскопа вводятся два Светофильтра. Первый из них пропускает от источника-осветителя излучение только тех длин волн, которые возбуждают люминесценцию либо самого объекта (собственная люминесценция), либо специальных красителей, введённых в препарат и поглощённых его частицами (вторичная люминесценция). Второй светофильтр, пропускает к глазу наблюдателя только свет люминесценции