![]() Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
На тему «Определение пигментов хлорофиллов a и b и сумма каротиноидов».
Лабораторная работа №1
Цели и задачи: 1. Приготовить экстракт пигментов в ацетоне; 2. Определить оптическую плотность 3-х длинных волн: · 662нм-для хлорофилла а; · 644нм-для хлорофилла b; · 478нм-для лютеина(общего содержания каротиноидов). Для приготовления экстракта существует специальная методика определения пробоотбора: из чистого листа листовой пластинки с помощью пробочного сверла(диаметр может быть любым) вырезают диски, набирающие примерную массу от 0, 2 гр до 0, 3 гр. Диски берутся для того, чтобы знать распределение хлорофилла и площадь образца. Если лист грязный, его необходимо промыть водой и просушить фильтровальной бумагой(в нашем опыте мы использовали готовую пробу лишайника). Далее пробу заворачивают в фольгу и погружают в жидкий азот. После того, как проба замерзнет, ее отправляют в морозильную камеру с t= -80о, где она хранится до анализов (при этом условии не происходит разрушение пигментов). Затем пробу переносят в фарфоровую ступку. Для повышения степени диспергирования к пробе добавляют кварцевый песок-одну шпатель-ложку. В целях предотвращения феофитинизации во время извлечения пигментов к пробе добавляют по одной шпатель-ложке карбоната Са для нейтрализации кислот клеточного сока, и безводного сульфата Na для обезвоживания образца. Для нейтрализации лишайниковых кислот добавляют порциями растворитель ДМСО+Ацетон(2: 1) с помощью дозатора, объем которого равен 2, 0 мм. Далее растираем лишайник до однородного состояния в холодной ступке на льду, чтобы не было разрушения пигментов. После получения смеси, сливаем ее в пробирку, смазывая носик фарфоровой ступки вазилином, чтобы предотвратить потерю полученной смеси. Следует предотвратить потери пигментов, тщательно обмывая стенки фарфоровой ступки растворителем ДМСО+Ацетон(2: 1) при повторном его добавлении к смеси 2-3 раза до полного обесцвечивания. Объем смеси в пробирке должен составлять 8 мм. Готовая смесь в пробирке, перед отправлением ее в центрифугу, хранится в темном прохладном месте, так как при свете разрушаются пигменты. Спустя 5-10 минут, пробирку поместили в центрифугу также на 10 минут при t=+5о и при 10000 оборотах в минуту. После центрифуги произвели декантацию, то есть процесс слива осадочной жидкости, в новую пробирку. Осадок остается в старой пробирке. Новую пробирку поместили в темное место. После этого раствор переливают в кюветы, в которых происходит измерение оптической плотности, длина поглощающего слоя равна 1 см. Необходимо 2 кювета: 1) чистый растворитель ДСМА+Ацетон(2: 1); 2)самоионизирующий раствор. Далее кюветы вставляются в спектрофотометр, он пропускает длину волны от 400нм до 700нм. Если значение оптической плотности раствора при какой-либо длине волны более 0, 9, раствор разбавляют растворителем ДСМА+Ацетон(2: 1) так, чтобы оптические плотности при длинах волн λ 1=662 нм; λ 2=644 нм; λ 3=478 нм соответствовали диапазону оптических плотностей 0, 2≤ А≥ 0, 9.
Рассчитываем массовую концентрацию пигментов в растворах(ρ i, мг/см3) по формулам: ρ а=0, 0117Асмλ 1-0, 00216А смλ 2; ρ b=0, 0218A смλ 2-0, 0038A смλ 1; ρ k=0, 00426А смλ 3-0, 103ρ b. 1) Проба № 25: ρ а=0, 0117*0, 77-0, 00216*0, 24=0, 0084906мг/см3; ρ b=0, 0218*0, 24 -0, 0038*0, 77=0, 002306мг/см3; ρ k=0, 00426*0, 79 -0, 103*0, 002306=0, 000237518мг/см3. 2) Проба № 29: ρ а=0, 0117*0, 65-0, 00216*0, 19=0, 0071946мг/см3; ρ b=0, 0218*0, 19 -0, 0038*0, 65=0, 001672мг/см3; ρ k=0, 00426*0, 58 -0, 103*0, 001672=0, 002298584мг/см3. 3) Проба № 31: ρ а=0, 0117*0, 72-0, 00216*0, 22=0, 0079488мг/см3; ρ b=0, 0218*0, 22 -0, 0038*0, 72=0, 00206мг/см3; ρ k=0, 00426*0, 67 -0, 103*0, 00206=0, 00264202мг/см3. Массы проб: № 25=0, 2 гр; №29=0, 205 гр; №31=0, 201 гр. Рассчитываем массовую долю пигментов в растительных материалах(ω i, %) по формуле: ω i =ρ i*V/m(мг/г), где V=24 мг3 . 1) Проба №25: ω а =0, 0084906*24/0, 2=1, 018872=1, 02%; ω b =0, 002306 *24/0, 2=0, 27672=0, 28%; ω к =0, 000237518*24/0, 2=0, 02850216=0, 029%. 2) Проба №29: ω а =0, 0071946*24/0, 205=0, 84229463=0, 84%; ω b =0, 001672*24/0, 2=0, 19574634=0, 20%; ω k =0, 002298548*24/0, 2=0, 26910252=0, 27%. 3) Проба №31: ω а =0, 0079488*24/0, 2=0, 94911045=0, 95%; ω b =0, 00206*24/0, 2=0, 24597015=0, 25%; ω k =0, 00264202*24/0, 2=0, 31546507=0, 32%. Вывод: в данной работе был использован метод определения и количественного подсчета пигментов-спектрофотометрический. При этом значения содержания хлорофилла а, хлорофилла b и лютеина получилось больше в пробе №25(Usnea hirta). В пробах №29 (Evernia mesomorpha) и №31 (Evernia mesomorpha) мы получили почти одинаковое количество пигментов.
|