По составу питательные среды для культивирования микроорганизмов делятся на

- натуральные (естественные) среды состоят из продуктов растительного и животного происхождения и имеют неопределенный химический состав. К таким средам относят овощные и фруктовые соки, животные ткани, молоко, яйца, желчь, сыворотка крови, отвары экстракты.

Недостаток: непостоянный химический состав, что не позволяет учитывать потребление

Используют для накопления и хранения микроорганизмов.

МПБ, МПА, Желточная или молочная среда, кровяной агар.

- полусинтетические среды ( вещество с известной хим. природ. + в-во неопред. состава.)

МПБ+ глюкоза, ЭНДО, Сабуро, среда химич.прир + органическое в-во.

-синтетические содержат чистые хим. в-ва в указанных пропорциях. Для экспериментального изучения метаболизма.

По назначению среды подразделяются: на среды общего назначения (универсальные) и специальные.

К средам общего назначения отно­сятся мясо-пептонные: агар, бульон, питательный желатин. Среды общего назначения используют для выращивания мно­гих патогенных микробов и применяют в качестве основы для приготовления обогащенных сред, добавляя к ним кровь, сахар, молоко, сыворотку и другие ингредиенты, необходи­мые для размножения того или иного вида микроба.

К специальным питательным средам относятся (предлож. Виноградским):

Элективные (избирательные) среды. Эти среды обеспечивают преимущество развития одного вида или группы микроорганизмов. Избирательность достигается путем создания оптимальных условий (РН, Еh, состава солей и пит. веществ)-положит. селекция. Либо добавлением в среду веществ ( ингибиторов ) угнетающих рост других микроорг. (желчь, азид, теллурит, антибиотики)-отриц.селекция. При посеве на них материала, содержащего смесь раз­личных микроорганизмов, раньше всего будет проявлять­ся рост того вида, для которого данная среда будет электив­ной.

Молочно-солевой агар-стафилококки, Среда Шустовой, Мюллера, Кауфмана- для сальманелл, Казеино угольный агар-бордетелл

Дифференциально-диагностические (индикаторные) питательные среды применяются для изучения биохимических свойств и дифференцировки одного вида (рода) от другого по характеру их ферментативной активности (особенностях его обмена веществ). По своему назначению дифференциально-диагности­ческие питательные среды подразделяются следующим об­разом:

· Среды для выявления протеолитической и гемолитической способности микробов, содержащие в своем составе бел­ковые вещества: кровь, молоко, желатин, свернутую кровя­ную сыворотку и т. д.

· Среды с индифферентными химическими веществами, которые служат источником питания для одних видов микро­бов и не усваиваются другими видами.

· Среды с углеводами и многоатомными спиртами для обнаружения соответствующих ферментов.

· Среды для определения редуцирующей способности микробов.

В состав дифференциально-диагностических сред, пред­назначенных для выявления сахаролитических и окислитель­но-восстановительных ферментов, помимо ингибиторов, вводят индикаторы: ней­тральную красную, метиленовый синий, лакмусовую настой­ку, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой краситель и розоловую кислоту. Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на нали­чие или отсутствие расщепления, окисления или восстанов­ления введенного в среду ингредиента. Однако индикатор не является обязательной составной частью сред, предназначен­ных для выявления ферментов. Так, наличие желатиназы и других протеолитических ферментов в культуре определяют по разжижению желатина, свернутого яичного или сыворо­точного белка. Среды Гиса, Среда Эндо, Левина, Плоскирева

Среды накопления (обогащения) – применяются для подращивания микроорганизмов находящихся в продукте в незначительном количестве. Селенитовая среда Лейфсона, среда Мюллера для сальмонелл, бульон Фрейзера для выделения листерий.

Стерилизация питательных сред. Стерилизацию питательных сред осуществляют различными способами в зависимо­сти от тех ингредиентов, которые входят в их состав. 1. Синтетические среды и все агаровые среды, не содер­жащие в своем составе нативного белка и углеводов, стери­лизуют 15—20 мин в автоклаве при температуре 115—120°С. 2. Среды с углеводами и молоком (в состав которого вхо­дит лактоза), питательный желатин стерилизуют текучим паром при температуре 100°С дробно или в автоклаве при 112° С. 3. Среды, в состав которых входят белковые вещества (сыворотка крови, асцитическая жидкость), обеспложивают­ся тиндализацией или фильтрованием. 4. Для стерилизации питательных сред, содержащих в своем составе нативные белки, пользуются фильтрацией че­рез мембранные фильтры Зейтца. Подготовленные питательные среды про­веряют на стерильность. Для этого их ставят в термостат при температуре 37° С. Среды, простерилизованные в автоклаве, выдерживают в термостате 1 сут, простерилизованные теку­чим паром -3 сут.

ЗАНЯТИЕ 6. Методы и техника культивирования микроорганизмов на питательных средах. Методы выделения чистых культур микроорганизмов. Изучение культуральных свойств микроорганизмов.

Цель занятия. Изучить способы посевов и пересевов микроорганизмов на питательные среды. Изучить методы выделения чистых культур микроорганизмов. Ознакомиться с формами колоний. Произвести посев культур микробов на МПБ и МПА (в пробирки), а также посев смеси микробных культур (для выделения чистых) методом рассева на чашки Петри с МПА.

Оборудование и материалы. Штативы, пробирки со средами, микробиологические петли, шпатели, пипетки, чашки Петри с МПА. Культуры микроорганизмов.