Идентификация подлинности эстрогенов

Для установления подлинности используют цветную реакцию с концентрированной серной кислотой. В присутствии этинилэстрадиола раствор приобретает оранжево-красную окраску с желтовато-зеленой флуоресценцией. После добавления полученного раствора к 10 мл воды окраска изменяется до фиолетовой и выпадает фиолетовый осадок. Эстрадиола дипропионат под действием концентрированной серной кислоты гидролизуется с образованием эстрадиола и пропионовой кислоты. Последующее нагревание в присутствии этанола ведет к образованию этилового эфира пропионовой кислоты, имеющего характерный запах:

Эстрадиола дипропионат идентифицируют по образованию эстрадиола (т. пл. 173-179°С) после щелочного гидролиза с последующей очисткой его от примесей.

Наличие фенольного гидроксила в молекуле этинилэстрадиола подтверждают реакцией образования бензоата этинилэстрадиола, имеющего т. пл. 199-202°С (4):

Ароматическое кольцо А в стероидном цикле имеет фенольный гидроксил, и его можно идентифицировать по реакциям электрофильного замещения (бромирование, нитрование, образование азокрасителя, аурииового красителя). Например, азокраситель получают путем сочетания фенола с солью диазония (из сульфаниловой кислоты) в щелочной среде. Образуется раствор темно-красного цвета. Эта реакция применяется для количественного определения этинилэстрадиола в таблетках:

С реактивом Марки (формальдегид в концентрированной H2SO4) образуется ауриновый краситель, окрашенный в малиновый или фиолетовый цвет;

Также возможны реакции соле- и комплексообразования с солями тяжелых металлов (например, с FeCl,). (5)

УФ-спектр поглощения раствора этинилэстрадиола в смеси этанола и гидроксида натрия в области 220-330 нм имеет максимумы поглощения при 241 и 299 нм и минимумы поглощения при 226 и 271 нм, а раствор в этаноле - максимум поглощения при 280 нм. Этинилэстрадиол можно отличить по удельному показателю поглощения 0, 005%-ного спиртового раствора при длине волны 280 нм. Он должен быть равен 65-69. Эстрадиола дипропионат идентифицируют по УФ-спектру 0, 01%-ного раствора в этаноле, который в области 220-350 нм должен иметь два максимума поглощения (при 269 и 276 нм).

Подлинность этинилэстрадиола и эстрадиола дипропионата подтверждают по ИК-спектрам, снятым в вазелиновом масле в области от 4000 до 200 см-1. Они не должны отличаться от рисунков спектров, прилагаемых к ФС.

В результате проведенных систематических исследований разработана унифицированная методика идентификации стероидных эстрогенов методом ВЭЖХ.