Доказательные методы установления наличия спермы

Микроскопический метод. При микроскопическом исследовании нормальной спермы обычно обнаруживают сперматозоиды, мелкозернистые клетки яичек, клетки плоского и цилиндрического эпителия, то или иное количество лейкоцитов и иногда эритроциты, сильно преломляющие свет лецитиновые зерна, простатические зерна, амилоидные тельца. В свежей сперме большое количество сперматозоидов неподвижно. Со временем сперма разжижается, и все большее количество сперматозоидов приобретает мобильность. Достоверный вывод о наличии следов спермы основывается на обнаружении целых сперматозоидов.

Морфологические методики выявления сперматозоидов подразделяются на две группы:

1. Методы избирательной окраски сперматозоидов непосредственно на предмете-носителе.

2. Методы окраски сперматозоидов после извлечения из пятна.

Для окраски сперматозоидов непосредственно на предмете-носителе в настоящее время преимущественно используются проба Корен-Стокиса и проба Баэкки.

Проба Корен-Стокиса. Для избирательной окраски сперматозоидов в исследуемом пятне применяется 0, 5 % раствор эритрозина в 25 % растворе аммиака. Полученные препараты исследуют при помощи светового микроскопа. Доказательством наличия спермы является обнаружение целых сперматозоидов (хотя бы одного), в которых четко различимы головка, окрашенная в красный цвет, шейка, хвост или его фрагмент.

Проба Баэкки. Подразумевает использование для окраски смеси двух растворов, один из которых содержит метиленовый синий, другой – кислый фуксин. При этом головки спермиев окрашиваются в красно-розовый цвет, а хвосты приобретают синюю окраску.

Вторая группа методов предполагает предварительное извлечение сперматозоидов из пятна.

Экстракцию производят 10 % раствором аммиака с длительностью экспозиции 24-48 часов. Полученную вытяжку центрифугируют и в дальнейшем готовят мазки на предметных стеклах из надосадочной жидкости и центрифугата с последующей их окраской 0, 5 % раствором эритрозина.

Нередко при исследовании тампонов и мазков с содержимым влагалища сперматозоиды не обнаруживаются. Это объясняется агрессивным влиянием влагалищной микрофлоры, которая способна частично или полностью лизировать сперматозоиды.

Для установления наличия спермы в пятнах в судебно-медицинской практике широкое применение получил метод микрофлюоресценции. Сущность его основывается на способности сперматозоидов, обработанных различными флюорохромами, давать характерное свечение. Исследование производится с помощью люминесцентной микроскопии. В зависимости от используемого флюорохрома сперматозоиды будут иметь соответствующую окраску. При обработке акридином – розовую, берберин сульфатом – желтую, при использовании родамина – головки спермиев окрашиваются в зеленый цвет, хвосты – в красновато-коричневый.

Кроме того, существуют методы определения сперменного происхождения пятен при отсутствии сперматозоидов или их невыявлении с помощью стандартных методик.

Так электрофоретическим путем было установлено наличие в следах спермы специфичного изофермента ЛДГ-Х, обладающего половой и возрастной специфичностью. Этот фермент содержится в основном в сперматозоидах и в семенную плазму попадает либо путем диффузии, или вследствие их физиологической деструкции. Он не встречается в выделениях женского организма, у мужчин, страдающих азооспермией, а также в сперме подростков и пожилых мужчин. Как показали исследования, достоверная диагностика наличия спермы по изоферменту ЛДГ-Х возможна лишь в течение месяца с момента образования следа в комнатных условиях. В пятнах спермы, содержащих примесь влагалищного содержимого, отмечается более выраженный спектр изофермента ЛДГ-5.

Реакция преципитации с применением антиспермальных сывороток выявляет специфические для спермы белки: простатический в-геобулин и γ -семинопротеин, вырабатываемые предстательной железой. Этот метод позволяет диагностировать сперму в пятнах давностью до 12 лет.

Используется также хроматографический метод обнаружения белков спермы – холина и спермина.

Применение вышеуказанных методик становится наиболее актуальным в случаях азооспермии, олиго- или некроспермии, когда обнаружение сперматозоидов с помощью светового микроскопа очень затруднено.

Следует отметить, что положительный результат любого из достоверных методов дает право на вывод о присутствии спермы. Отрицательный результат позволяет утверждать лишь факт необнаружения спермы, а не её отсутствия.