Поживні середовища

Заняття

ТЕМА. КОРИНЕБАКТЕРІЇ. ЗБУДНИК ДИФТЕРІЇ. ГЕМОГЛОБІНОФІЛЬНІ БАКТЕРІЇ. ЗБУДНИКИ КАШЛЮКУ ТА ПАРАКАШЛЮКУ

Теоретичні питання:

1.Біологічні властивості збудника дифтерії. Мікробіологічна діагностика дифтерії. Специфічна профілактика і терапія.

2.Біологічні властивості збудників кашлюку та паракашлюку. Мікробіологічна діагностика і специфічна профілактика.

При підготовці до заняття користуйтеся літературою:

1. К.Д.П'яткін, Ю.С. Кривошеїн. Мікробіологія. - К.: Вища школа, 1992.- С.240-243, 286-292.

3. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. - М.: Медицина, 1981.- С.301-305, 334-341.

и иммунологии. Л.Б.Борисов и др..- М.: Медицина, 1993.- С.173-180.

9. Поздеева О.К. Медицинская микробиология Под ред. акад. Покровского В.И., М.: ГЕОТАР, 1998.- с.230-243, 329-336.

10. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. СПб, СпецЛит, 1998.- с.406-414

11. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М.: МИА, 2004. - с.440-450, 387-391

ДЕМОНСТРАЦІЯ

МІКРОСКОПІЧНІ ПРЕПАРАТИ

1. C.diphtheriae, фарбування за Грамом, Лефлером, Нейссером

Збудник має вигляд палички з потовщеннями на кожному кінці. Бактерії розміщуються поодиноко або невеликими скупченнями, в котрих одні кінці паличок зближені, а інші віддалені одна від одної (порівнюють з розсипаними шпильками, розставленими пальцями і т.д.).При фарбуванні за Грамом бактерії фарбуються в фіолетовий колір, за Лефлером – в синій. В обох випадках зерна волютину, розміщені на полюсах, фарбуються більш інтенсивно, ніж інша частина клітини (явище метахромазії). При фарбуванні за Нейссером характерно фарбування центральної частини клітини в жовтий колір з синьо-чорними зернами волютину. Представля певну важкість диференціація за морфологічними і тинкторіальними властивостями збудників дифтерії від дифтероїдів та удаванодифтерійних бактерій (непатогенних мешканців слизової оболонки верхніх дихальних шляхів). Для останніх характерна відсутність зерен волютину та паралельне розміщення відносно одне одного в скупченнях.

2.B.pertussis, фарбування за Грамом. Дрібні грамнегативні коккобактерії.

ПОЖИВНІ СЕРЕДОВИЩА

3.Кров’яний телуритовий агар

До 100 мл розплавленого і охолодженого до 45-50°С поживного агара добавляють 10 мл дефібринованої або гемолізованої кінської або бичої крові і 2 мл 2% розчину телуриту калію (К2ТеО3). Перед використанням чашки підсушують 15-20 хвилин в термостаті.На цьому середовищі колонії дифтерійних бактерій мають чорний колір або чорний центр (відновлення металічного теллура). Колонії дифтероїдів більш випуклі, вологі, сірого кольору з коричневим центром. Колонії удавано дифтерійних паличок непрозорі, дрібні, сірі з коричневим центром.

4.Середовище Клауберга ІІ (елективне)

100 мл 3% поживного агару розплавляють, добавляють 3 мл 2% розчину телуриту калію (затримує розвиток супутньої флори), 10 мл гліцеринової суміші і 50 мл лакової крові. Середовище розливають в чашки Петрі. Лакова кров: до 35мл стерильної дистильованої води добавляють 15мл дефібринованої крові будь якої тварини. Гліцеринова суміш: до 40 мл дефібринованої крові додають 20 мл хімічно чистого стерильного гліцерину. Штами типу gravis утворюють сірувато-чорні колонії з дещо порізаними краями, типу mitis – ростуть в вигляді дрібних блискучих чорних колоній з рівними краями.

5.Казеїново-вугільний агар (КУА) – напівситетичне поживне середовище на казеїновому гідролізаті, використовується для культивування збудників кашлюку.

Казеїновий кислотний гідролізат вноситься в 1000 мл дистильованої води (150-170 мг амінного азоту). Крім того, вноситься NaCl (0, 75-0, 9%), КН2РО4 – 0, 5г, MgCl2 – 0, 4 г, СаСl2 – 0, 01 г, FeSO4 – 0, 01 г, CuSO4 – 0, 005 г, крохмал розчинний – 1, 5г, цистеїн або цистин –- 0, 03 г, дріжжевий гідролізат – 100 мл, агар-агар – 25 г, активоване вугілля – 2 г. Перед розлиттям поживне середовище сумлінно струшують для рівномірного розподілення вугілля.

6.Середовище Борде-Жангу – також використовується для культивування бордетелл. 1 кг високоякісно очищеної картоплі нарізають скибочками, заливають 2 літрами дистильованої води і варять до пом’якшення. До картоплі, що розварилася додають 4% гліцерину, кип’ятять 5 хвилин, потім рідину фільтрують через марлю. Додають до попереднього об’єму гарячу дистильовану воду, пропускаючи її через марлю з картоплею. Осад (крохмаль) повинен складати в бульйоні приблизно 1/3 об’єму. Окремо готують 3% водний агар. До 1 частини картопляного бульйону додають 3 частини водного агару і NaCl в концентрації 0, 6%. Стерилізують. Перед використанням в розтоплене і охолоджене до 50°С середовище додають 20-30% стерильної овечої, кінської або людської крові. Ретельно перемішують і розливають в чашки Петрі.