![]() Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Количественное определение в крови метгемоглобина
(метод Л.Э.Горна). Цель работы: ознакомиться с методом количественного определения метгемоглобина в крови. Мотивация: метгемоглобин образуется в результате реакции окисления железа в геме гемоглобина
причем, НАДФН+Н+ образуется в ключевых реакциях ПФЦ причем, НАДН+Н+ образуется в ключевых реакциях гликолиза.
Приобретенные метгемоглобинемии делятся в зависимости от причины на эндогенные и экзогенные. Эндогенная метгемоглобинемия может возникать при различных патологических состояниях или заболеваниях, которые сопровождаются недостаточностью АОС (например: хронический энтерит, хронический гепатит, сахарный диабет и другие). Экзогенная метгемоглобинемия возникает в случае избыточного поступления в организм человека окислителей, в том числе и лекарственных препаратов со свойствами окислителей. Так как MetHb теряет способность транспортировать О2, метгемоглобинемия сопровождается признаками гемической гипоксии, которые обусловлены различными нарушениями в обмене веществ. Для профилактики и лечения осложнений необходимо контролировать уровень MetHb в крови. Быстрым, нетрудоемким методом определения % содержания MetHb в крови является фотоколориметрический метод Л.Э.Горна. Этот метод удобен как для профилактического обследования людей, контактирующих с MetHb образователями, так и в гигиенических исследованиях при производственных и пищевых отравлениях некоторыми химическими соединениями (нитриты, оксиды азота, пары нитробензола, нитроанилин, гексацианоферрат калия, хлорат калия и др.), при проведении токсикологических исследований на животных. Принцип метода: метод основан на определении оптической плотности раствора, содержащего метгемоглобин. Метгемоглобин избирательно погло-щает свет с длиной волны 619 нм. Содержание метгемоглобина рассчитывают в процентах, принимая за 100% оптическую плотность раствора полностью окисленного (гексацианоферратом) гемоглобина. Эритроциты разрушают в аммиачной среде. Ход работы: В три пробирки отмеривают по 7, 3 мл 0, 25% раствора аммиака. В две пробирки вносят по 0, 2 мл крови, взятой у крысы до затравки. Первая пробирка содержит HbO2 (100%). Во вторую пробирку добавляют 1 каплю насыщенного раствора K3[Fe(CN)6], принимая ее за эталон со 100% содержанием MetHb. В третью пробирку отмеривают 0, 2 мл крови крысы, отравленной нитритом натрия или другими метгемоглобинообразователями, и определяют в этой крови MetHb. Пробы оставляют стоять в течение одного часа при комнатной температу-ре, затем растворы фотометрируют, определяя их оптическую плотность. Условия колориметрии: светофильтр красный (длина волны 610 нм), кювета - 10 мм, сравнение против воды. Для расчета процентного содержания метгемоглобина в исследуемой пробе используют формулу:
Х% MetHb = (D MetHb оп – D HbO2) · 100 D MetHb 100% – D HbO2
DHbO2 – оптическая плотность раствора, не содержащего метгемоглобин (кровь, взятая до затравки крысы); DMetHb100%. – оптическая плотность раствора, содержащего метгемо-глобин в максимальной концентрации; DMetHbоп – оптическая плотность раствора, содержащего метгемоглобин в неизвестной концентрации (кровь крысы, затравленной нитритом).
Лабораторная работа № 14
|