Недостатки метода

Бактериологический метод диагностики, его задачи и возможнос

Бактериологический метод диагностики используется для выявления чистых культур

Достоинства.-высокая чувствительность

-высокая точность

Недостатки:

1.длительность метода

2.подходит не для всех культур

3.трудоемкий

Бактериоскопический метод - метод диагностики инфекционных заболеваний, основанный на выявлении в исследуемом материале возбудителя и его идентификации по морфологическим и тинкториальным свойствам.

Условия применения метода

1. Наличие у возбудителя характерных (уникальных) морфологических и (или) тинкториальных свойств
2. Характерная локализация в организме
3. Выделение возбудителя во внешнюю среду в больших количествах

Достоинства метода

• Быстрое получение результата
• Низкая стоимость исследования
• Возможно проведение исследования вне лаборатории (диагностика в кабинете врача)

Недостатки метода

• Малая информативность
• Морфологических и тинкториальных свойств недостаточно для идентификации подавляющего большинства возбудителей
• Нет возможности определить чувствительность возбудиПтеля к антимикробным препаратам
• Нет возможности выявить источник инфекции, пути и факторы передачи возбудителя
• Низкая чувствительность, низкая достоверность отрицательного результата
• Возбудителя в исследуемом материале должно быть много. Если возбудитель не обнаружен - это не значит, что его нет
• Субъективность
• Результат зависит от уровня подготовки врача-микроскописта.

Применение: туберкулез легких, гонорея, сифилис, возвратный тиф

4 Бактериофаги. Взаимодействие с бакт клеткой

Инфекционные фаги разделятся на покоящиеся(вне клетки), вирулентные (способные вызвать продуктивную инфекцию) и умеренные (не только продуктивную но и редуктивную инфекцию)

ЖЦ вирулентного фага.

1.Адсорбция при помощи белков –лоцманов

2.Проникновение генома через клеточную стенку и цитоплазматическую мембрану

3 Установление фагового генома для реализации информации

4 Репликация фаговой ДНК или РНК

5 Сборка вновь синтезируемых вирионов

6 Выход вновь синтезируемых фагов из клетки (лизоцимом)

ЖЦ умеренного фага-

1) Адсорбция

2) Проникновение фаговой Днк в бакт. Клетку

3) Сайт-с

4) пецифическая интеграция фаговой ДНК в хромосому клетки хозяина и превращение фага в профаг

Лизогения –внедрение профага в хромосому клетки –хозяина.

Трансдукция –общая и специфическая (обмен ген материалом между бактериями)

Общая: механизм в том, что в результате внутриклеточного размножения фага в его головку вместо фаговой ДНК будет включен бактериальная ДНК.

Специфическая – перенос только определенных генов.

Вопрос 5. Бактериофаги. Получение, титрование, использовани

Для получения больших количеств фага для химического или физического исследования заражают фагом экспоненциально растущую в жидкой среде культуру бактерий. В результате ряда циклов развития фага большинство, а иногда и все клетки культуры, лизируются. Затем оставшиеся в культуре клетки и их обломки удаляют с помощью низкоскоростного центрифугирования, а получившуюся жидкость стерилизуют либо фильтрованием, либо обрабатывая ее хлороформом. В результате получается стерильный лизат, который содержит обычно от 10⁹ до 10¹² фаговых частиц на 1 мл, а также растворимый материал и фракцию частиц, которые освобождаются из клеток при лизисе.

Для окончательной очистки бактериофагов обычно используют ультрацентрифугирование. Даже самые мелкие фаговые частицы осаждаются при ускорениях порядка 100 000 g (в 10⁵ раз превышающих ускорение под действием земного притяжения). Часто предварительно вирусные частницы осаждают сульфатом аммония или некоторыми другими веществами.

Выделение.Фильтрация исследуемого материала через бактериальные фильтры или обработка хлороформом для уничтожения бактериальной и грибковой флоры.

Титр р бактериофага – наибольшее разведение исследуемого материала, в котором содержится хотя бы 1 бактериофаг.

А) титрирование в жидкой среде по Аппельману.В ряд пробирок с мпб вносят индикаторную культуру и по1 мл соответствущего разведения фагосодержащего материала.После инкубации учитывают результат. + -лизис индикаторной культуры(просветление среды)- --рост среды, помутнение.

Б)метод агаровых слоев по грацияа.в пробирки с растопленным полужидким агаром вносят индикаторную культуру и 1 мл соответствующего разведения фагосодержащего материала, тщательно перемешивают и выливают в чашки с МПА. После инкубации подсчитывают число негативны х колоний на чашках и делат пересчет на 1 мл неразведенного материала.

Вопрос 6 Внутривидовое типирование бактерий. Методы. Использование в практик

е

1.Фаготипирование(стафилоккоки, шигеллы.сальмонелы.к.палочки

2 Серотипирование (сальмонелл)

4. бактериоцинотипирование

5. фенотипирование (кишечная палочка

6. биотипирование(по спектру антибактериальной резистентности)

7. Малдитоф

8. Генотипирование

9. ПЦР

10. секвенировние

Вопр 7 Геном бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды наследуемой изменчивос

Геном – сово-ть нуклеотидов содержащихся в хромосоме или в наборе хромосом данного индивидуума.

Геноти́ п — совокупность генов данного организма, которая, в отличие от понятия генофонд, характеризует особь, а не вид

Фенотип — совокупность внешних и внутренних признаков организма, приобретённых в результате онтогенеза

Изменчивость бактерий – мутации и генетические рекомбинации, с участием транспонируемых элементов.:

1. вставочные последовательности

2. транспозоны, более крупные сегменты ДНК. (могут содержать гены лекарств. Устойчивости)

3. Эписомы –лизогенные фаги, вирусы.

Вопр 8 Влияние физических факторов.
Влияние температуры. Различные группы микроорга­низмов развиваются при определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой температуре, называют психрофилами, при средней (около 37 °С) — мезофилами, при вы­сокой — термофилами.
К психрофильным микроорганизмам относится боль­шая группа сапрофитов — обитателей почвы, морей, пресных водоемов и сточных вод (железобактерии, псевдомонады, све­тящиеся бактерии, бациллы). Некоторые из них могут вызывать порчу продуктов питания на холоде. Способностью расти при низких температурах обладают и некоторые патогенные бакте­рии (возбудитель псевдотуберкулеза размножается при темпера­туре 4 °С). В зависимости от температуры культивирования свой­ства бактерий меняются. Интервал температур, при кото­ром возможен рост психрофильных бактерий, колеблется от -10 до 40 °С, а температурный оптимум — от 15 до 40 °С, прибли­жаясь к температурному оптимуму мезофильных бактерий.
Мезофилы включают основную группу патогенных и услов­но-патогенных бактерий. Они растут в диапазоне температур 10— 47 °С; оптимум роста для большинства из них 37 °С.
При более высоких температурах (от 40 до 90 °С) развива­ются термофильные бактерии. На дне океана в горячих сульфидных водах живут бактерии, развивающиеся при темпе­ратуре 250—300 °С и давлении 262 атм.
Термофилы обитают в горячих источниках, участвуют в процессах самонагревания на­воза, зерна, сена. Наличие большого количества термофилов в почве свидетельствует о ее загрязненности навозом и компос­том. Поскольку навоз наиболее богат термофилами, их рассмат­ривают как показатель загрязненности почвы.
Хорошо выдерживают микроорганизмы действие низких тем­ператур. Поэтому их можно долго хранить в замороженном со­стоянии, в том числе при температуре жидкого газа (—173 °С).
Высушивание. Обезвоживание вызывает нарушение функ­ций большинства микроорганизмов. Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы (возбудители гоно­реи, менингита, холеры, брюшного тифа, дизентерии и др.). Более устойчивыми являются микроорганизмы, защищенные слизью мокроты.
Высушивание под вакуумом из замороженного состояния — лиофилизацию — используют для продления жизнеспособнос­ти, консервирования микроорганизмов. Лиофилизированные культуры микроорганизмов и иммунобиологические препараты дли­тельно (в течение нескольких лет) сохраняются, не изменяя своих первоначальных свойств.
Действие излучения. Неионизирующее излучение — уль­трафиолетовые и инфракрасные лучи солнечного света, а также ионизирующее излучение — гамма-излучение радиоактивных ве­ществ и электроны высоких энергий губительно действуют на микроорганизмы через короткий промежуток времени. УФ-лучи применяют для обеззараживания воздуха и различных предме­тов в больницах, родильных домах, микробиологических лабо­раториях. С этой целью используют бактерицидные лампы УФ-излучения с длиной волны 200—450 нм.
Ионизирующее излучение применяют для стерилизации од­норазовой пластиковой микробиологической посуды, питатель­ных сред, перевязочных материалов, лекарственных препаратов и др. Однако имеются бактерии, устойчивые к действию иони­зирующих излучений, например Micrococcusradiodurans была вы­делена из ядерного реактора.
Действие химических веществ. Химические вещества могут ока­зывать различное действие на микроорганизмы: служить источ­никами питания; не оказывать какого-либо влияния; стимулировать или подавлять рост. Химические вещества, уничтожающие микроорганизмы в окружающей среде, называются дезинфи­цирующими. Антимикробные хи­мические вещества могут обладать бактерицидным, вирулицидным, фунгицидным действием и т.д.
Химические вещества, используемые для дезинфекции, отно­сятся к различным группам, среди которых наиболее широко представлены вещества, относящиеся к хлор-, йод- и бромсодержащим соединениям и окислителям.
Антимикробным действием обладают также кислоты и их соли (оксолиновая, салициловая, борная); щелочи (аммиак и его соли).
Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся обработке.
Дезинфекция — процедура, пре­дусматривающая обработку загрязненного микробами предмета с целью их уничтоже­ния до такой степени, чтобы они не смогли вызвать инфекцию при использовании дан­ного предмета. Как правило, при дезинфек­ции погибает большая часть микробов (в том числе все патогенные), однако споры и некоторые резистентные вирусы могут остаться в жизнеспособном состоянии.
Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания возбудителя инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических процедурах. Методы асептики применяют для борьбы с экзогенной инфекцией, источниками которой являются больные и бактерионосители.
Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в ране, патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или ликвидацию воспалительного процесса.

Вопр 9 Заслуги И.И. Мечникова в развитии микробиологии и иммунологи

1 основоположник иммунологии

2 открыл явление фагоцитоза

3 к числу важнейших работ в области микробиологии относятся его исследования патогенеза холеры человека, сифилиса, туберкулеза, возвратного тифа.

4 Он является основоположником учения о микробном антагонизме, ставшем основой для развития науки об антибиотикотерапии. На принципе антагонизма ученый обосновал теорию долголетия и предложил для продления человеческой жизни использовать простоквашу, которая впоследствии была названа мечниковской

5 В 1886 г. он организовал первую в России бактериологическую станцию

Вопр 10.

Иммерсия (иммерсионный метод микроскопического наблюдения) в оптической микроскопии — это введение между объективом микроскопа и рассматриваемым предметом жидкости для усиления яркости и расширения пределов увеличения изображения.

Иммерсионный жидкости - · Кедровое или минеральное масло (показатель преломления 1, 515)

· Водный раствор глицерина (1, 434)

· Физиологический раствор (1, 3346)

· Вода (1, 3329)

· Монобромнафталин (1, 656)

· Вазелиновое масло (1, 50

предел разрешения определяется длиной волны λ и числовой апертурой объектива А. Так как не всегда возможно изменить длину волны (особенно если исследование производится в белом свете), то для достижения лучшего разрешения стремятся применять объектив, имеющий бо́ льшую числовую апертуру.

Однако для «сухого» объектива, с показателем преломления среды перед его передней линзой n=1, максимальное значение числовой апертуры объектива не может превысить значение около 0, 95.

Для решения этой проблемы берут иммерсионную жидкость, показатель преломления которой n₂ и показатель преломления фронтальной линзы n₃ выбраны определённым образом. Исходящие от одной точки объекта OP лучи проходят без преломления через иммерсионную пленку и могут «приниматься» фронтальной линзой объектива.

В этом случае числовая апертура увеличивается, а предел разрешения уменьшается в n₂ раз.

Введение в микроскопию иммерсионных объективов (водная иммерсия, 1850, масляная, 1878) имело большое значение для цитологии, позволило решительно увеличить контраст изображения отдельных частей клетки

Вопр 11. История микробиологии. Этапы развития. Современные задачи

Задачи мо

- изучение свойств биологический свойств болезнетворных мо

- разработка методов диагностики

-разработка методов борьбы с болезнетворными мо.

-создание методов стимуляции микроорганизмов полезных для человека.

Этапы развития.

1 зарождение (морфологический)

Ливенгук основоположник

2 физиологический период

Луи Пастер открыл природу брожения, доказал невозможность самозарождения жизни

Создал вакцины против бешенства и сиб.языф

Роберт Кох

-сформулировал критерии доказательства инфекционной природы заболевания

-открыл возбудителей туберкулеза, описал возбудителей холер

-основатель научной школы

Мечников см выше

Ивановский – основатель вирусологии

3 зарождение осознанной антибактериальной терапии

Флеминг –пеницилин

Домагк – стрептоцид

Эрлих – сальварсан (против сифилиса)

Ермольская – отечественный вариант пенициллина.

Вопр 12.

Грамм +

-клет. Стенка значительно толще.Основную массу состовляет пептидогликан. Представлен 5-6 слоями.

-содержит много тейхоевых кислот – главные поверхностные АГ многих грамм + бактерий

- не содержит липидов (у большинства)

-в пептидогликане отсутствие диаминопимелиновой кислоты

- отсутствуют липополисахариды

- белки определяют АГ специфичность

Грамм

1. Выделяют 2 слоя – пластичный и ригидный. Ригидный слой тонкий – 1 или 2 слоя пептидогликана

2. В пептидогликане почти всегда имеется диаминопимелиновая кислота

3. Сод много липопротеинов

4. Отсутствуют тейховые кислоты

5. Есть липополисахариды, много белков

6. Пластичный слой состоит из липополисахаридов, липопротеинов и наружной мембраны

Липопротеины связываю нар. Мембрану и пептидогликаном.

Липополисахарид – определяет АГ специфичность, фактор патогенности.-эндотоксин, обладает пирогенным действием

Нар. Мембрана состоит из 2х слоев липидов, но в ней значительная часть фосфолипидов наружного слоя замещена молекулами липополисахаридов и набором белков.Эти белки –порины образуют поры, через которые в клетку попадают мелкие гидрофильные молекулы. Второстепенные белки учавствуют в облегченной диффузии, в активном транспорте и выступают в качестве специфических рецепторов для фагов. Некоторые из этих белков учавст. В конъюгации.

Вопр 14

Методы культивирования вирусов.
Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах.
Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей живот­ных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.
Приготовление первичной культуры клеток складывает­ся из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания получен­ной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.
Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование invitro, и сохра­няются на протяжении нескольких десятков пассажей.
Перевиваемые однослойные культуры клеток приготов­ляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладаю­щих способностью длительно размножаться invitro в определен­ных условиях. К ним относятся злокачественные клетки С ил, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки ам­ниона человека, почек обезьяны и др.
К полуперевиваемым культурам относятся диплоид­ные клетки человека. Они представляют собой клеточную систе­му, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток использу­емой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают зло­качественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.
О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), кото­рое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.
Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорби­ровать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее по­становки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На по­верхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид­кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.
Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инку­бации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса при­нимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.
Более точным количественным методом учета отдельных ви­русных частиц является метод бляшек.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.
Куриныеэмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздей­ствиям.
Для получения чистых культур риккетсий, хламидий и ря­да вирусов в диагностических целях, а также для приготов­ления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим из­менениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его обо­лочках.
О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.
К недостаткам данного метода относятся невозможность об­наружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очист­ку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препа­ратов.
Лабораторные животные. Видовая чувствительность живот­ных к определенному вирусу и их возраст определяют репродук­тивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки).
Преимущество данного метода перед другими состоит в воз­можности выделения тех вирусов, которые плохо репродуциру­ются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними ви­русами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данно­го вируса, что удлиняет сроки исследования.

Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом чувствительной биологической модели (лабораторные животные, куриные эмбрионы или культуры клеток), индикации вируса и его последующей идентификации. При заражении лабораторных животных индикация вирусов производится, как правило, по клинической картине болезни, патолого-анатомическим изменениям ориентировочно и окончательно, например, с помощью реакции гемагглютинации. Эта же реакция позволяет выявить вирусы в курином эмбрионе, видимых изменений при вскрытии которого, как правило, не наблюдается. В культуре клеток наличие вируса определяют по цитопатическому действию (в том числе образованию внутриклеточных включений), гемадсорбции, феномену бляшкообразования, реакции гемагглютинации, отсутствию изменения окраски индикатора. Идентификация вируса осуществляется с помощью серологических реакций (РПГА, РТГА, РН, РСК, ИФА и др.). Вирусологический метод позволяет точно определить природу возбудителя, но он требует достаточного времени (5-7 дней и более), значительных материальных затрат и небезопасен.

Вопр 15

Люминесцентная микроскопия — оптическое исследование микрообъектов, окрашенных специальными красителями (флюорохромами), испускающими свечение при воздействии ультрафиолетовыми лучами. Для люминесцентной микроскопии применяются специальные оптические устройства и микроскопы, основной частью которых является источник ультрафиолетовых лучей и система фильтров к нему.
Флюорохромы, как правило, флюоресцируют по-разному в зависимости от химического состава структур, с которыми они взаимодействуют. Некоторые из них обладают сродством к определенным клеточным структурам. Например, акридиновый оранжевый краситель окрашивает нуклеопротеиды клетки, аурамин — воскоподобное вещество, содержащееся в микобактериях. Некоторые микрообъекты не требуют предварительной окраски флюорохромами и изучаются с помощью люминесцентной микроскопии без окраски

При работе по методу темного поля, препарат освещается полым световым конусом, апертура которого больше, чем апертура объектива, таким образом, входной зрачок микрообъектива оказывается в области геометрической тени и прошедший без преломления свет не попадает в объектив. В оптической микроскопии тёмного поля неоднородности образца рассеивают свет, и этот рассеянный свет формирует изображение исследуемого образца.

Особенностью микроскопа темного поля является способ освещения образца, который осуществляется «сбоку» (зеленая полоса на рисунке). При таком освещении неоднородности, имеющиеся в образце, рассеивают падающий свет и в микроскопе изображение образца наблюдают в рассеянном свете, а «освещающий» световой пучок не попадает в объектив. Такое освещение называется эпи-подсветкой (E

Основным ограничивающим фактором метода является то, что только малая часть падающего света в итоге формирует изображение, поэтому необходимо применять достаточно мощные источники света, что иногда приводит к повреждениям образца (сейчас иногда используют лазеры). Значительное ограничение метод накладывает на разрешающую способность системы — апертура объективов, работающих по методу темного поля существенно ниже светлопольных, так как она не должна перекрывать затемненную часть апертуры конденсора.

Фазово-контрастная микроскопия. Предназначена для изучения живых, не окрашенных объектов. Метод фазового контраста основан на том, что фазовая скорость света обратно пропорциональна показателю преломления. Фаза луча, проходящего через объект с более высоким показателем преломления, чем у окружающей среды, будет запаздывать по сравнению с фазой того луча, который проходит только через среду. Глаз не способен воспринимать фазовые изменения света. Поэтому прозрачные, неконтрастные объекты при обычном микроскопическом исследовании остаются невидимыми. В фазово-контрастном микроскопе специальный конденсор и особо устроенный объектив регулируют изменения фазы световых волн и превращают разность фаз в разность интенсивностей света, благодаря чему детали строения объекта становятся доступными для глаза. Система колец в конденсоре и объективе отделяет те лучи, которые диафрагмировали (отклонились) на объекте от тех, которые не диафрагмировали. После того как диафрагмировавшие лучи проходят через фазовую пластинку объектива, вносящую дополнительный сдвиг по фазе, они рекомбинируются с недифрагировавшими лучами. Именно таким образом удается резко повысить контраст клеток или внутриклеточных структур.

Электронная микроскопия — это метод исследования структур, находящихся вне пределов видимости светового микроскопа и имеющих размеры менее одного микрона (от 1 мк до 1—5 Å).
Действие электронного микроскопа (рис.) основано на использовании направленного потока электронов, который выполняет роль светового луча в световом микроскопе, а роль линз играют магниты (магнитные линзы).
Вследствие того, что различные участки исследуемого объекта по-разному задерживают электроны, на экране электронного микроскопа получается черно-белое изображение изучаемого объекта, увеличенное в десятки и сотни тысяч раз. В биологии и медицине в основном используются электронные микроскопы просвечивающего типа.

Вопр 16 Методы определения чувствите

льности бактерий к антибиотика

1.Метод стандартных дисков

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0, 5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35^о-37^оС в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах

2. Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис. 2). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

3.Метод серийных разведений. Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0, 5 мкг/мл, 0, 25 мкг/мл и 0, 125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0, 5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35^о-37^оС проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК).

Вопр 17 Механизмы передачи генетического материала у бактери

1 Трансформация.Перенос генетического материала, бактерия-реципиент поглощает из внешней среды фрагменты чужеродной ДНК. Транс может быть спонтанной или индуцированной. Спонтанная протекает за счет ДНК выделившейся клетками в окружающую среду вследствие их лизиса или в результате активного выделения ДНК жизнеспособными клетками. Может происходить взаимный обмен ДНК.Эффективость трансформации во многом зависит от состояния клетки реципиента.Они должны находится в состоянии компетентности для этого процесса.Аутолитические ферменты растворяют клеточную стенку, мезосомы через образовавшееся отверстие соприкасаются с внешней средой, адсорбируют и втягиают внутрь ДНК, где она вступает в рекомбиацию с ДНК клетки реципиента.В результате образуется мерозигота, клетка делится и ее потомки наследуют признаки ии от донора и от реципиента.Однако в других случаях поглощенные фрагменты ДНК разрушаются нуклеазами.Высокомолякулярная ДНК сложнее трансформируется. Роль трансфармации у бактерий в естеств.условиях не велика, т.к у многих есть системы рестрикации и модификации. Рестрикационные эндонуклеазы разрушают чужую ДНК.

2.Трансфекция –вариант трансформации бактериальных клеток, лишенных клеточной стенки, осуществляемый фаговой нуклеиновой к-ой. С помощью трансфекции у таких бактерий можно вызвать вирусную инфекцию.

3 Трансдукция –перенос генетического материала от клетки к клетке с помощью сбактериофага.Различают специфическую и неспецифическую.

Неспецифическая – случайный перенос.

Специфическая осуществляется только умеренными фагами, обладающими способностью включаться в строго определенные участки хромосом и трансдуцировать определенные гены.

4.КонЪюгация.

Процесс обмена генетическим материалом(хромосомным и плазмидным), осуществляемый при непосредственном контакте клеток.Процесс контролируется конЪгативными плазмидами, имеющами совокупность генов называемые Tra-опероном.Аппаратом переноса являютсяспециальные донорные ворсинки с помощью которых устанавливается контакт между конъюгирующими клетками. Стадии

1. Установление контакта между донором и реципиентом

2. Протаскивание нити ДНК от донора к реципиенту

3. Достройка перенесенной ДНК комплементарной ей нитью и рекомбинации

4. Размножение мерозиготы и образование клеток несущих признаки и донора и реципиента

5.Сексдукция-перенос генетического материала между бактериальными клетками осуществляемый Fштрих плазмидой с помощью механизма, аналогичного специфической трансдукции.

Вопрос 18.

Механизмы формирования лек. Устойчивости.:

1. Ферментативная инактивация лекарственных средств (лс) реализуется внеклеточно и внутриклеточно. Изменения активности ферментов связаны с мутациями генов, кодирующих их структуру, либо с увеличением образования числа копий генов, кодирующих его (амплификация). В-Лактамазы. Механизм действия обусловлен разрушением b-лактамного кольца в молекулах антибиотиков. Стафилококки секретируют ферменты после попадания препарата в окружающую их среду, что приводит к снижению его концентрации. Для них характерна популяционная резистентность — большая доза инфекционного агента вызывает более интенсивное развитие устойчивости. Синтез ферментов кодируют индуцибельные гены, то есть b-лактамазы более интенсивно образуются в присутствии препарата. Более тонкая клеточная стенка грамотрицательных бактерий позволяет антибиотикам проникать внутрь клетки, где они взаимодействуют с b-лактамазами в периплазматическом пространстве. Грамотрицательные бактерии (эшерихии, синегнойная палочка) проявляют более выраженную резистентность (по сравнению с грамположительными бактериями), не зависящую от дозы инфекционного агента. По специфичности действия b-лактамазы, продуцируемые грамотрицательными бактериями, разделяют на несколько групп (взаимодействующие только с пенициллинами, или цефалоспоринами, или и с обеими группами антибиотиков). У грамотрицательных бактерий синтез b-лактамаз происходит перманентно, вне зависимости от наличия JIC. Ацетилтрансферазы, фосфорилазы и нуклеотидазы стрептококков, стафилококков, энтеробактерий и синегнойной палочки модифицируют аминогликозиды, препятствуя их связыванию с рибосомами (механизм действия хлорамфеникол ацетилтрансферазы, продуцируемой стафилококками и энтеробактериями аналогичен действию ацетилтрансфераз аминогликозидов). Ферменты расположены на поверхности ЦПМ и инактивируют лишь часть препарата, проникшего в клетку, так что концентрация препарата в биологических жидкостях снижается незначительно (не более чем на 0, 5%).

Природная устойчивость. Некоторые виды микробов природно ус­тойчивы к определенным семействам антиби­отиков или в результате отсутствия соответс­твующей мишени (например, микоплазмы не имеют клеточной стенки, поэтому не чувстви­тельны ко всем препаратам, действующим на этом уровне), или в результате бактериальной непроницаемости для данного препарата (на­пример, грамотрицательные микробы менее проницаемы для крупномолекулярных соеди­нений, чем грамположительные бактерии, так как их наружная мембрана имеет «маленькие» поры).

Приобретенная устойчивость. Приобретение резистентности — это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды. Она, хотя и в разной степени, справедлива для всех бактерий и всех анти­биотиков. К химиопрепаратам адаптируются не только бактерии, но и остальные микро­бы — от эукариотических форм (простейшие, грибы) до вирусов. Проблема формирования и распространения лекарственной резистен­тности микробов особенно значима для внутрибольничных инфекций, вызываемых так называемыми «госпитальными штаммами», у которых, как правило, наблюдается множес­твенная устойчивость к антибиотикам (так называемая полирезистентность).

Генетические основы приобретенной резис­тентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях. Приобретенная лекарственная устойчивость может возникать и распространяться в попу­ляции бактерий в результате:
• мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т. е. отбором) му­тантов. Особенно легко селекция происходит в присутствии антибиотиков, так как в этих условиях мутанты получают преимущество перед остальными клетками популяции, ко­торые чувствительны к препарату. Мутации возникают независимо от применения анти­биотика, т. е. сам препарат не влияет на час­тоту мутаций и не является их причиной, но служит фактором отбора. Далее резистентные клетки дают потомство и могут передаваться в организм следующего хозяина (человека или животного), формируя и распространяя ре­зистентные штаммы. Мутации могут быть: 1) единичные (если мутация произошла в одной клетке, в результате чего в ней синтезируются измененные белки) и 2) множественные (се­рия мутаций, в результате чего изменяется не один, а целый набор белков, например пенициллинсвязывающих белков у пенициллин-резистентного пневмококка);
• переноса трансмиссивных плазмид резис­тентности (R-плазмид). Плазмиды резистен­тности (трансмиссивные) обычно кодируют перекрестную устойчивость к нескольким семействам антибиотиков. Впервые такая множественная резистентность была описа­на японскими исследователями в отношении кишечных бактерий. Сейчас показано, что она встречается и у других групп бактерий. Некоторые плазмиды могут передаваться меж­ду бактериями разных видов, поэтому один и тот же ген резистентности можно встретить у бактерий, таксономически далеких друг от друга. Например, бета-лактамаза, кодируемая плазмидой ТЕМ-1, широко распространена уграмотрицательных бактерий и встречается укишечной палочки и других кишечных бактерий, а также у гонококка, резистентного кпенициллину, и гемофильной палочки, резис­тентной к ампициллину;
• переноса транспозонов, несущихr-гены (или мигрирующих генетических последова­тельностей). Транспозоны могут мигрировать с хромосомы на плазмиду и обратно, а также с плазмиды на другую плазмиду. Таким образом, гены резистентности могут передаваться да­лее дочерним клеткам или при рекомбинации другим бактериям-реципиентам.
Реализация приобретенной устойчивости. Изменения в геноме бактерий приводят к тому, что меняются и некоторые свойства бактериальной клетки, в результате чего она становится устойчивой к антибактериальным препаратам. Обычно антимикробный эффект препарата осуществляется таким образом: агент должен связаться с бактерией и прой­ти сквозь ее оболочку, затем он должен быть доставлен к месту действия, после чего пре­парат взаимодействует с внутриклеточными мишенями. Реализация приобретенной ле­карственной устойчивости возможна на каж­дом из следующих этапов:
• модификация мишени. Фермент-мишень может быть так изменен, что его функции не нарушаются, но способность связываться с химиопрепаратом (аффинность) резко сни­жается или может быть включен «обходной путь» метаболизма, т. е. в клетке активируется другой фермент, который не подвержен дейс­твию данного препарата.
• «недоступность» мишени за счет сниже­ния проницаемости клеточной стенки и кле­точных мембран или «эффлюко»- механизма, когда клетка как бы «выталкивает» из себя антибиотик.
• инактивация препарата бактериальными ферментами. Некоторые бактерии способны продуцировать особые ферменты, которые де­лают препараты неактивными (например, бета-лактамазы, аминогликозид-модифицирующие ферменты, хлорамфениколацетилтрансфераза). Бета-лактамазы — это ферменты, разруша­ющие бета-лактамное кольцо с образованием неактивных соединений. Гены, кодирующие эти ферменты, широко распространены среди бактерий и могут быть как в составе хромосо­мы, так и в составе плазмиды.
Для борьбы с инактивирующим действием бета-лактамаз используют вещества — ин­гибиторы (например, клавулановую кисло­ту, сульбактам, тазобактам). Эти вещества содержат в своем составе бета-лактамное кольцо и способны связываться с бета-лактамазами, предотвращая их разрушитель­ное действие на бета-лактамы. При этом собственная антибактериальная активность таких ингибиторов низкая. Клавулановая кислота ингибирует большинство известных бета-лактамаз. Ее комбинируют с пенициллинами: амоксициллином, тикарциллином, пиперациллином.
Предупредить развитие антибиотикорезистентности у бактерий практически не­возможно, но необходимо использовать антимикробные препараты таким образом, чтобы не способствовать развитию и рас­пространению устойчивости (в частности, применять антибиотики строго по показа­ниям, избегать их использования с профи­лактической целью, через 10—15 дней антибиотикотерапии менять препарат, по воз­можности использовать препараты узкого спектра действия, ограниченно применять антибиотики в ветеринарии и не использо­вать их как фактор роста).

Вопр 19.

Микрофлора жкт.ст

Полость рта: стафилококки.стрептококки, грибы кандида, лактобактерии, нейссерии, спирохеты, вибрионы. Анаэробы –вейлонеллы, бактероиды, пептострептококки.Простейшие –аспергиллы, дрожжи.

Пищевод: обычно нет или мало

Желудок: дрожжи, сарцины, грибы, лактобактерии, стафилококки, стрептококки, кампилобактерии, но не гнилостные бактерии!!!!!

Тонкий кишечник: микрофлора не обильна и достаточно однообразна –лактобактерии, энтерококки, бифидумбактерии, кишечная палочка

Размножениию бактерий препятствует желчь

Толстый кишечник: 4 группы

1. Бифидумбактерии и бактериоиды – строгие анаэробы

2. Факультативные анаэробы –киш.палочка, энтерококки и лактобактерии

3. Стафилококки, протеи, кандида, клостридии, псевдомонады

4. Сальмонеллы, шигеллы, энтеробактерии..и др

Вопрос 20.

Микрофлора кожи: Стафилококкус эпидермидис, сапрофитикус., грибы Кандида, реже встречаются дифтероиды, микрококки.

Микрофлора ВДП: стрептококки, дифтероиды, моракселлы, псевдомонады. Зеленящий стрептококк – 99%. В меньшем количестве встречаются нейссерии, коринобактерии, стафилококки.Гортань трахея бронхи и альвеолы – стерильны.

Вопрос 21. Особенности биологии вирусов. Принципы классификации вирусо

Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци­топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дизъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке от­дельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.
Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью элек­тронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть раз­личной: палочковидной (вирус табачной мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиели­та, ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кисло­ты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены липопротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболоч­ка является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые ши­пы, или шипики (пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов нахо­дится матриксный М-белок.
Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спираль­ный, икосаэдрический (кубический) или слож­ный тип симметрии. Икосаэдрический тип сим­метрии обусловлен образованием изометричес­ки полого тела из капсида, содержащего вирус­ную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль­ный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).
Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выяв­ляемые под микроскопом при специальном окрашива­нии. Вирус натуральной оспы образует цитоплазматические включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.
Размеры вирусов определяют с помощью электронной мик­роскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с извест­ным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име­ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицатель­ным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих виру­сов выполняет только наследственную функцию.
Вирусы поражают позвоночных и беспозвоночных животных, а также растения и бактерии. Являясь основными возбудителя­ми инфекционных заболеваний человека, вирусы также участвуют в процессах канцерогенеза, могут передаваться различными пу­тями, в том числе через плаценту (вирус краснухи, цитомегаловирус и др.), поражая плод человека. Они могут приводить к постинфекционным осложнениям — развитию миокардитов, пан­креатитов, иммунодефицитов и др.
Кроме обычных вирусов, известны и так называемые нека­нонические вирусы — прионы — белковые инфекционные ча­стицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10—20x100—200 нм. Прионы, по-видимому, являются одновременно индукторами и продуктами автономно­го гена человека или животного и вызывают у них энцефалопа­тии в условиях медленной вирусной инфекции (болезни Крейтцфельдта—Якоба, куру и др.).
Другими необычными агентами, близкими к вирусам, явля­ются вироиды — небольшие молекулы кольцевой, суперспирализованной РНК, не содержащие белка, вызывающие забо­левания у растений.

Вопрос 22 черты риккетсий. Методы культивирования. Риккетсиозы, общая

характеристика

. Отличительные

Риккетсии – это бактерии, отличительной чертой которых является облигатный внутриклеточный паразитизм. По своему строению близки к грамотрицательным бактериям. Имеются собственные ферментные системы. Неподвижны, спор и капсул нет. Для риккетсий характерен выраженный полиморфизм. Выделяют четыре формы: 1) форму А – кокковые, овальные, расположенные одиночно или в виде гантелей; 2) форму В – палочки средней величины; 3) форму С – бациллярные риккетсии, крупные палочки; 4) форму D – нитевидные, могут давать ответвления. Морфология зависит от стадии инфекционного процесса. При острой форме в основном встречаются формы А и В, при хронической, вялотекущей – С и D. Взаимодействие риккетсий с клеткой включает в себя несколько этапов. 1) Адсорбция на рецепторах соответствующих клеток. 2) После прикрепления мембрана делает инвагинацию, риккетсия погружается в клетку в составе вакуоли. 3) Далее возможны два варианта: 1) одни виды риккетсий продолжают оставаться внутри вакуоли и там размножаются; 2) другие лизируют мембрану и свободно лежат в цитоплазме. 4) Риккетсии интенсивно размножаются, мембрана разрушается, и они выходят из клетки. Облигатный внутриклеточный паразитизм риккетсий реализуется на клеточном уровне. Для их культивирования применяются те же методы, что и для культивирования вирусов: 1) заражение ткани; 2) заражение куриных эмбрионов; 3) в организме экспериментальных животных; 4) в организме эктопаразитов.

Риккетсиозы - группа острых, преимущественно трансмиссивных, инфекционных болезней, вызываемых риккетсиями; характеризуются рядом общих патогенетических, патоморфологических, иммунологических и клинических проявлений в виде высокой лихорадки, сыпей, гепатолиенального синдрома; при некоторых из них имеются первичный аффект и регионарный лимфаденит. К ним относят: 1) эпидемические антропонозные риккетсиозы: сыпной тиф и его отдаленную рецидивную форму - болезнь Брилля-Цинссера; 2) эндемические зоонозные риккетсиозы: крысиный (блошиный) сыпной тиф, клещевая марсельская лихорадка, клещевой сыпной тиф Северной Азии; в группу пароксизмальных риккетсиозов входят лихорадка цуцугамуши (японская речная лихорадка), лихорадка Ку, везикулезный (оспоподобный) гамазориккетсиоз и волынская или окопная лихорадка. Кроме этих риккетсиозов, регистрируемых на территории нашей страны, имеется множество (более 30) других нозоформ, вызываемых патогенными риккетсиями, в том числе лихорадка Скалистых гор и ее тяжелейший вариант - бразильский сыпной тиф, индийский клещевой тиф, Южно-Африканская клещевая лихорадка и др.

Вопр 23 Понятие о морфологических свойствах микроорганизмов. Мо

рфологические группы

бактерий

Мир микроорганизмов делится на 2 группы: эукариоты и прокариоты. Бактерии относятся к царству прокариотов, представители которых, в отличие от эукариотов, не обладают оформленным ядром. Наследственная информация у прокариотов заключена в молекуле ДНК, располагающейся в цитоплазме клетки.

Внутри вида существуют варианты: морфоварианты, или морфовары, отличающиеся по морфологии; биовары — по биологическим свойствам, хемовары — по ферментативной активности, серовары — по антигенной структуре, фагова-ры — по чувствительности к фагам.

Для обозначения микроорганизмов принята общебиологическая бинарная (двойная) номенклатура. Первое название обозначает род и пишется с прописной буквы. Второе название обозначает вид и пишется со строчной буквы. Например, Staphylococcus aureus — стафилококк золотистый, S. aureus.

Медицинская микробиология, главным образом, изучает патогенные бактерии, вирусы, простейшие, спирохеты, микоплазмы, риккетсии, хламидии. Большинство микробов представляют собой невидимые невооруженным глазом одноклеточные (бактерии, актиномицеты, спирохеты, простейшие), неклеточные (вирусы), а также многоклеточные организмы (сине-зеленые водоросли, некоторые грибы, хлами-добактерии).

Бактерии (от лат. bacteria — палочка) — это одноклеточные организмы, лишенные хлорофилла. По биологическим свойствам — прокариоты.

Размеры от 0, 1 до 0, 15 микрометра до 16—28 мкм. Размеры и форма бактерий непостоянны и меняются от влияния среды обитания.

По внешнему виду бактерии делятся на 4 формы: шаровидные (кокки), палочковидные (бактерии, бациллы и клос-тридии), извитые (вибрионы, спириллы, спирохеты) и нитевидные (хламидобактерии).

1. Кокки (от лат. coccus — зерно) — шарообразный микроорганизм, бывает сферической, эллипсовидной, бобовидной и ланцетовидной формы. По расположению, характеру деления и биологическим свойствам кокки подразделяются на микрококки, диплококки, стрептококки, тетракокки, сар-цины, стафилококки.

Микрококки характеризуются одиночным, парным или беспорядочным расположением клеток. Они являются сап-рофитами, обитателями воды, воздуха.

Диплококки (от лат. diplodocus — двойной) делятся в одной плоскости и образуют кокки, соединенные по две особи. К диплококкам относятся менингококки — возбудители эпидемического менингита и гонококки — возбудители гонореи и бленнореи.

Стрептококки (от лат. streptococcus — витой), делящиеся в одной плоскости, располагаются цепочками различной длины. Имеются патогенные для человека стрептококки, вызывающие различные заболевания.

Тетракокки (от лат. tetra— четыре), располагающиеся по 4, делятся в двух взаимноперпендикулярных плоскостях.

Редко встречаются в качестве возбудителей болезней у человека.

Сардины (от лат. saris — связываю) — кокковые формы, которые делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и выглядят в виде тюков по 8—16 и более клеток. Часто встречаются в воздухе. Болезнетворных форм нет.

Стафилококки (от лат. staphylococcus) — гроздевидно расположенные кокки, делящиеся в различных плоскостях; располагаются неправильными скоплениями.

Некоторые виды вызывают у человека и животных заболевания.

2. Палочковидные формы подразделяются на бактерии, бациллы и клостридии.

Средние размеры от 1 до 6 мкм в длину и 0, 5—2 мкм в ширину.

К бактериям относятся палочковидные микроорганизмы, как правило, не образующие спор (кишечная палочка, брюшнотифозная, паратифозные, дизентерийные, дифтерийные, туберкулезные и др.).

К бациллам (от лат. bacillus — палочка) и клостридиям (от лат.

closter — веретено) принадлежат микробы, в большинстве своем образующие споры (сенная, сибиреязвенная, столбнячная, возбудители анаэробной инфекции).

По форме палочковидные бактерии бывают короткими (туляремийная), длинными (сибиреязвенная) с закругленными и заостренными концами.

По взаимному расположению палочковидные формы распределяются на три подгруппы:

— диплобактерии и диплобациллы, располагающиеся попарно по длине (бактерии пневмонии);

— стрептобактерии (возбудитель мягкого шанкра) и стреп-тобациллы (бациллы сибирской язвы);

— бактерии и бациллы, которые располагаются без определенной системы (большинство палочковидных форм).

Встречаются бактерии с булавовидными утолщениями на концах — возбудитель дифтерии, некоторые имеют ветвления — микробактерии туберкулеза и лепры. Общее число палочковидных форм бактерий больше, чем корковидных.

3. К извитым формам бактерий относятся вибрионы, спириллы и спирохеты.

Вибрионы (от лат. vibrio — изгибаюсь — клетки, изгиб которых равен 14 завитка спирали, имеющие вид запятой). Типичный представитель — холерный вибрион и водные вибрионы.

Спириллы (от лат. spira — изгиб) — имеют изгибы с одним или несколькими оборотами спирали. Из патогенных известен один вид spirillum minor — возбудитель содоку, способный вызывать у человека болезнь, передающуюся через укус крыс и других грызунов.

Спирохеты (от лат. spirochaeta — бактерия в виде изогнутого длинного винта — штопорообразная форма. Размеры от 0, 3—1, 5 мкм в ширину и 7—500 мкм в длину). В семейство входят сапрофиты и патогенные виды. Они обитают в загрязненных водоемах, на мертвых субстратах. К патогенным относятся три рода: Treponema, Leptospira, Borrelia.

Все микробы обладают полиморфизмом, т. е. индивидуальной изменчивостью форм под влиянием различных факторов — температуры, питательной среды, концентрации солей, кислотности, продуктов метаболизма, дезинфицирующих агентов, лекарственных препаратов.

Способность микробов изменяться учитывается в лабораторной диагностике инфекционных болезней, при изготовлении биологических препаратов, применяемых для профилактических и лечебных целей.

Вопр 24 Понятие о химиотерапии и химиотерапевтических препаратах. Классификация

химиопрепаратов

Химиятерапия – это лечение инфекционных и паразитарных заболеваний хим.веществами которые изберательно действуют на возбудителя заболевания.

Химиопрепарат

1.должен проникнуть в клетку, связаться с мишенью, полностью подавить процесс (бактерицидный или бактериостатический эффект)

Химиотерапевтические препараты –это хим вещества природного или синтетического происхождения которые подавляют рост и размножение мо или вызывают их гибель изберательно в организме хозяина.

Требования к хт.препаратам:

1. Максимальная эффективность в отношении одного или нескольких патогенных мо.

2. Безвредность для организма хозяина(отсутствие токсичности, мутогенности, тератогенности, аллергических реакций и иммунодепрессии)

3. Сохранение активности препарата в биологических жидкостях

4. Высокая биодоступность и хорошее распростренение в организме для достижения очага инфекции

5. Достаточно долгое сохранение в необходимых концентрациях, но отсутствие комуляции.

Классификация хт. Препаратов: антибиотики и собственно химиопрепараты

1. По химическому строению(сульфаниламиды, нитрофураны, оксихиноны, фторхиноны)

2. По направленности действия (противобактериальные.противовирусные..)

3. По спектру действия(узкий, широкий)

Вопрос 25. Предмет и современные задачи медицинской микробиологии и иммунологии. Вклад

российских ученых в развитие микробиологии и иммунолог

18 век

Тереховский –один из первых использовал экспериментральный метод в мб.изучал влияние на мо электрических разрядов различной силы, температуры, различных хим. Веществ.

Самойлович-идея о возможности создания искусственного иммунитета против чумы с помощью прививок.Он разработал и применил целый комплекс противочумных мероприятий.

Мечников – начало 20в

Ивановский открыл вирусы конец 19в

Виноградский – основоположник почвенной микробиологии.

Савченко –установил стрептококковую этиологию скарлатины, использовал антитоксическую сыворотку для ее лечения.

Вопрос 26 Принципы классификации микроорганизмов. Таксономические категории. Внутривидовые

категории

Таксономия – наука о принципах и классификации организмов в иерархическом плане.Основная единица – вид. Род-триба- семейство –порядок –класс-отдел-царство

Вид – сов-ть мо, имеющих общий корень происхождения, сходный генотип и максимально близкие фенотипические признаки.

Признаки которые используются для систематики:

1.морфологические

2 тинкториальные

3 культуральные

4 подвижность

5 споробразование

6 физиологические свойства (способы углеродного, азотного питания, тип дыхания)

7 биохимические свойства

8 чувствительность к специфическим бактериофагам

9 антигенные свойства

10 хим состав клеточнвх стенок\

Внутривидовые категории: биовар, серовар, фаговар, морфовар, культивар.

БИОВАР

(от био... и лат. varietas — разновидность), физиологический тип, внутриподвидовая категория для обозначения штамма или совокупности штаммов бактерий со сходными биохимич. или физиол. признаками;

Серотип (серовар) — группа микроорганизмов одного вида, объединяемых общей антигенной структурой, определяемой серологическими методами диагностики

Фаговар

вариант (см.) того или иного вида (подвида) бактерий, отличающийся от др. вариантов этого же вида по спектру чувствительности к типовым фагам.

Вопрос 27. Различия в строении микроорганизмов прокариот и эукарио

Прокариоты

-нет оформленного ядра, есть его предшественник –нуклеоид.Он представлен одной или несколькими хромосомами, которые состоят из ДНК и свободно располагаются в цитоплазме, не отграниченные от нее никакой мембраной.

- не имеют дифференцированного аппарат митоза

-нет ядрышка

-имеют рибосомы 70S

-большинство имеет клеточну стенку, содержащую пептидогликан

-нет митохондрий и хлоропластов

-жгутики из белка флагеллина

Эукариоты

-имеют рибосомы 80S митохондрии или хлоропласты

-не содержат пептидогликана

-все аэробы

-жгутики состоят из белка тубулина

-Ядро отграничено от цитоплазмы специальной мембраной, состоящей из наружного и внутреннего слоев. Она похожа на плазматическую мембрану, но содержит поры. Благодаря им осуществляется обмен между цитоплазмой и ядром. Геном клетки состоит из целого набора хромосом, этим прокариоты и эукариоты также отличаются друг от друга. ДНК в хромосомах эукариот связана с белками-гистонами

-В ядре клеток находятся ядрышки, в которых образуются рибосомы. Бесструктурная масса, кариоплазма, окружает хромосомы и ядрышки. Каждому виду животных и растений свойственен свой, строго определенный набор хромосом. При делении клеток они удваиваются и затем распределяются по дочерним клеткам-

Вопрос 28 Роль микроорганизмов в круговороте веществ в природе. Использование микробных процессов в промышленности и сельском хозяйстве

Круговорот веществ — совокупность превращений химических элементов, из которых построены живые организмы. Основные факторы, определяющие доминирующую роль микробов в круговороте веществ, — широкое распространение микроорганизмов (например, слой плодородной почвы толщиной 15 см может содержать до 5 т микробной биомассы на гектар) и их необычайная метаболическая гибкость при высокой скорости обмена. Большое значение имеет узкая специализация отдельных групп микроорганизмов в отношении утилизируемых веществ. Поэтому некоторые этапы круговорота веществ могут осуществляться исключительно прокариотами. В природе все организмы разделяют на три группы. Продуценты — зелёные растения и микроорганизмы, синтезирующие органические вещества, используя энергию солнца, углекислый газ и воду. Потребители (консументы) — животные, расходующие значительную часть первичной биомассы на построение своего тела. Деструкторы — бактерии (в том числе актиномицеты) и грибы, разлагающие погибшие животные и растения; при этом органические вещества превращаются в неорганические, то есть происходит минерализация.

В результате разрушительных процессов химические элементы, составляющие органические соединения, возвра­щаются как бы в исходное состояние. Главную роль в этой разрушительной работе играют микроорганизмы. Микробы, воздействуя на растительные и животные остатки, разлагают составляющие их органические соединения на простые вплоть до таких простейших минеральных веществ, как углекислый газ, аммиак и вода. Таким образом микроорганизмы возвращают в природу углерод в виде углекислого газа, а азот - в виде ам­миака, который может быть использован растениями непосред­ственно в виде солей аммония или после превращения его в азотнокислые соли.

Эти.древние горняки и не подозревали, что в подобных процессах экстракции металлов активную роль играли бактерии. В настоящее время этот процесс, известный как бактериальное выщелачивание, применяется в широких масштабах во всем мире для извлечения меди из бедных руд, содержащих этот и другие ценные металлы в незначительных количествах. Биологическое выщелачивание применяется также (правда, менее широко) для высвобождения урана. Проведены многочисленные исследования природы организмов, участвующих в процессах выщелачивания металлов, их биохимических свойств и возможностей применения в данной области. Результаты этих исследований показывают, в частности, что бактериальное выщелачивание может широко использоваться в горнодобывающей промышленности и, по всей видимости, сможет полностью удовлетворить потребности в энергосберегающих, не оказывающих вредного влияния на окружающую среду технологиях.

Несколько менее известно, но столь же важно использование микроорганизмов в горнодобывающей промышленности для извлечения металлов из растворов. Некоторые прогрессивные технологии уже включают биологические процессы для получения металлов в растворенном состоянии или в виде твердых частиц «из моечных вод, остающихся от переработки руд. О способности микроорганизмов накапливать металлы известно уже давно, и энтузиасты издавна мечтали об использовании микробов для получения ценных металлов из морской воды. Проведенные исследования рассеяли некоторые надежды и в значительной степени определили области применения микроорганизмов. Извлечение металлов при их участии остается многообещающим способом дешевой обработки загрязненных металлами промышленных стоков, а также экономичного получения ценных металлов.

Давно известно и о способности микроорганизмов синтезировать полимерные соединения; в самом деле, большинство компонентов клетки — это полимеры. Однако на сегодняшний день менее 1% всего количества полимерных материалов производит микробиологическая промышленность; остальные 99% получают из нефти. Пока биотехнология не оказала решающего влияния на технологию полимеров. Возможно, в будущем с помощью микроорганизмов удастся создавать новые материалы специального назначения.

Следует отметить еще один важный аспект применения микроорганизмов в химическом анализе - концентрирование и выделение микроэлементов из разбавленных растворов. Потребляя и усваивая микроэлементы в процессе жизнедеятельности, микроорганизмы могут селективно накапливать некоторые из них в своих клетках, очищая при этом питательные растворы от примесей. Например, плесневые грибы применяют для избирательного осаждения золота из хлоридных растворов.

Современные сферы применения

Микробная биомасса используется как корм