Гепатит А. Возбудитель, характеристика вириона. Способы заражения. Методы лабораторной диагностики. Проблема специфической профилактики.

Вирус гепатита А (ВГА, Hepatitis A virus). Вирус гепатита А имеет сферическую форму, диаметр вириона — 27 нм. Геном Представлен однонитевой позитивной РНК с м. м. 2, 6 МД. Суперкапсид отсутствует. Тип симметрии кубический - икосаэдр. Капсид имеет 32 капсомера, он образован четырьмя полипептидами (VP1—VP4). По своим свойствам вирус гепатита А отнесен к роду Heparnovirus, семейству Picornaviridae. В антигенном отношении вирус гепатита A (HAV — hepatitis A virus) является однородным.

Источником инфекции является только инфицированный человек. Вирус выделяется в большом количестве с испражнениями за 12—14 дней до появления желтухи и в течение 3 нед. желтушного периода.

Способ заражения — фекально-оральный, главным образом водный, а также бытовым и пищевым путем. Возможно также заражение воздушно-капельным путем. Восприимчивость населения всеобщая. Болеют преимущественно дети в возрасте до 14 лет.

Для диагностики гепатита А предложены различные иммунологические методы: РСК, иммунофлуоресцентный метод, гемагглютинация иммунного прилипания (комплекс вирусный антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах и вызывает их склеивание). Однако возможности применения этих методов ограничены из-за отсутствия специфических вирусных антигенов, а реакция иммунофлуоресценции требует биоптатов печени, что нежелательно. Надежным и специфическим является метод иммунной электронной микроскопии, однако он очень трудоемкий. Поэтому пока единственной приемлемой иммунологической реакцией является метод имму-носорбентного анализа твердой фазы в виде ИФМ или РИМ, особенно в модификации «захвата» иммуноглобулинов класса М. В нашей стране для этой цели предложена тест-система — «ДИАГН-А-ГЕП». Принцип работы этой тест-системы следующий. На стенках полистироловых луночек сорбируются вначале антитела к иммуноглобулинам класса М (антииммуноглобулины М), затем добавляется исследуемая сыворотка больного. Если в ней есть антитела класса IgM, они будут связываться ан-ти-антителами М, затем добавляется специфический вирусный антиген (вирус гепатита А), который получают путем выращивания в культуре клеток. Система промывается, и к ней добавляются противовирусные антитела, меченные пероксидазой хрена. Если произошло взаимодействие всех четырех компонентов системы, возникает четырехслойный «сэндвич»:

1) антииммуноглобулины М, 2) иммуноглобулины М (против вируса гепатита А — в исследуемой сыворотке больного), 3) вирусный антиген, 4) антивирусные антитела, меченные ферментом.

Для обнаружения этого комплекса в луночки добавляют субстрат для фермента. Под влиянием фермента он разрушается, и образуется окрашенный продукт. Интенсивность окраски можно измерить количественно с помощью спектрофотометра или фотоколориметра.

В России эффективная вакцина против гепатита А была получена еще в 1995 г., и сейчас она успешно применяется.

Гепатит В. Структура и характеристика основных свойств вириона. Поверхностный антиген, его значение. Особенности взаимодействия вируса с клеткой. Способы заражения. Методы лабораторной диагностики. Специфическая профилактика.

Hepatitis B virus, HBV В составе вириона имеются три основных антигена

1. HBsAg — поверхностный (superficial), или растворимый (soluble), или австралийский антиген.

2. HBcAg — сердцевинный антиген (сог-антиген).

3. HBeAg — антиген е, локализован в сердцевине вириона

Собственно вирион — частица Дейна — имеет сферическую форму и диаметр 42 нм. Суперкапсид вириона состоит из трех белков: главного (основного), большого и среднего (рис. 88, 1). Геном заключен в капсид и представлен двунитевой кольцевидной ДНК с м. м. 1, 6 МД. ДНК состоит приблизительно из 3200 нуклеотидов, однако ее «плюс»-нить на 20—50 % короче «минус»-нити.

Поверхностный антиген — HBsAg — существует в виде трех морфологически различных вариантов: 1) представляет суперкапсид цельного вириона; 2) в большом количестве встречается в виде частиц диаметром 20 нм, имеющих сферическую форму; 3) в виде нитей длиной 230 нм. Химически они идентичны. В составе HBsAg имеется один общий антиген а и две пары взаимоисключающих типоспецифических детерминантов: d/y и w/r, поэтому существуют четыре основных субтипа HBsAg (и соответственно HBV): adw, adr, ayw и ayr. Антиген а обеспечивает формирование общего перекрестного иммунитета ко всем субтипам вируса.

Белки, образующие поверхностный антиген, существуют в гликозилированной (gp) и негликозилированной форме. Гликозилированными являются gp27, gp33, gp36 и gp42 (цифры обозначают м. м. в кД). Суперкапсид HBV состоит из главного, или основного, S-белка (92 %); среднего М-белка (4 %) и большого, или длинного, L-белка (1 %).

Главный белок — p24/gp27, Большой белок — p39/gp42, Средний белок - gp33/gp36.

Взаимодействие с клеткой.

1. Адсорбция на клетке.

2. Проникновение в клетку с помощью механизма рецепторопосредованного эн-доцитоза (окаймленная ямка -> окаймленный пузырек -> лизосома -> выход нук-леокапсида и проникновение вирусного генома в ядро гепатоцита).

3. Внутриклеточное размножение.

Источником заражения вирусом гепатита В является только человек. Заражение происходит не только парентеральным путем, но и половым, и вертикальным (от матери плоду)

В настоящее время основным методом диагностики гепатита В является использование реакции обратной пассивной ге-маглютинации (РОПГА) для обнаружения вируса или его поверхностного антигена — HBsAg. Как уже отмечалось, в крови поверхностного антигена содержится во много раз больше, чем самого вируса (в 100—1000 раз). Для реакции РОПГА используют сенсибилизированные антителами против вируса гепатита В эритроциты. При наличии антигена в крови происходит реакция гемагглютинации. Для обнаружения антител к вирусному антигену HBsAg используют различные иммунологические методы (РСК, РПГА, ИФМ, РИМ и др.)

Специфическая профилактика

прививки против гепатита В являются обязательными и должны проводиться на первом году жизни. Для вакцинации предложено два типа вакцин. Для приготовления одной из них в качестве сырья используют плазму вирусоноси-телей, поскольку в ней вирусный антиген содержится в количествах, достаточных для приготовления вакцины. Главное условие для приготовления этого типа вакцин — их полная безопасность, Для изготовления вакцины другого типа применяют методы генной инженерии, в частности, для получения антигенного материала используют рекомбинантный клон дрожжей, вырабатывающих поверхностный антиген вируса гепатита В.

В России созданы вакцины как для взрослых людей, так и для новорожденных и детей раннего возраста. Полный курс прививки состоит из трех инъекций:

I доза — сразу после рождения; II доза — через 1—2 мес; III доза — до конца 1-го года жизни.