Капсула, микрокапсула, слизь

Ферменты- вещества, способные каталитически влиять на скорость биохимических реакций. Они играют важную роль в жизнедеятельности микроорганизмов.

Значение ферментов в жизнедеятельности микробой: питание микроорганизмов осуществляется благодаря наличию в клетке различных ферментов, катализирующих все жизненно необходимые реакции.

Использование ферментотивной активности микробов. Ферментативную активность бактерий и грибов широко используют в промышленности для получения органических кислот (уксусной, молочной, щавелевой, лимонной), приготовления молочных продуктов (сыр, ацидофилин, кумыс), в виноделии, пивоварении и других отраслях промышленности. Знание ферментативных процессов, характерных для определенного вида микроорганизмов.

3. 1-е сутки. 1. Посев исследуемого материала на среды выращивания и инкубирование в термостате при 35 - 37°.

3-е сутки (через 72 часа) 1. Изучение характера колоний на средах выращивания с использованием стереоскопического микроскопа.

2. Отсев колоний для получения чистой культуры микроба.

3. При наличии большого числа колоний на среде выращивания: а) приготовление мазков, окраска их по Граму, микроскопия; б) постановка реакции агглютинации на стекле со специфическими неадсорбированными коклюшными и паракоклюшными сыворотками в разведении 1: 10 и специфическими монорецепторными сыворотками к агглютиногенам (факторам) 1 и 14; в) постановка пробы на уреазу.

4. Выдача предварительного положительного результата проведенного исследования. 4-е сутки (через 96 часов).

1. Изучение выделенной чистой культуры б) приготовление мазков и окраска их по Граму, микроскопия, 5-е сутки (через 120 часов).

1. Изучение выделенной культуры коклюшного микроба или в случае позднего роста паракоклюшного по схеме 4-х суток исследования.

2. Учет результатов 4-х суток исследования.

3. Определение сероварианта коклюшного микроба.

Б11.

Капсула-аморфное, сильно обводненное в-во. М.б. макро и микро. По хим. природе представлена большим кол-вом воды и полисахаридов. Ф-ции: -защита от фагоцитоза, а/б; -адгезия; -антигенная. Бактерии могут образовывать капсулоподобное в-во-липидно-полисахаридное в-во, не прочно связано, явл. продуктом метаболизма самой кл. Д/выяв. капсул окраска по Зырянову.

Капсула - слизистая структура толщиной более 0, 2мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая четко очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках из патологического материала. Капсула состоит из полисахаридов (экзополисахаридов), иногда из полипептидов, Капсула гидрофильна, препятствует фагоцитозу бактерий. Капсула антигенна: антитела против капсулы вызывают ее увеличение (реакция набухания капсулы).
Многие бактерии образуют микрокапсулу - слизистое образование толщиной менее 0, 2мкм, выявляемое лишь при электронной микроскопии. От капсулы следует отличать слиэь - мукоидные экзополисахариды, не имеющие четких границ. Слизь растворима в воде.

2.Пит. средой назыв. среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяют д/размножения бактерий в лаб. условиях.

-быть питательными, то есть содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей.

-иметь оптимальную концентрацию водородных ионов — pH,

-быть изотоничными для микробной клетки; то есть осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки.

-быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды.

-плотные среды́ должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию.

-обладать определённым окислительно — восстановительным потенциалом,

-быть по возможности унифицированным, то есть содержать постоянное количество отдельных ингредиентов.

3.Стерилизация-полное уничтожение вегетативных форм мо и их спор. Дезинф-ия-уничтож. патогенных д/чела мо с помощью хим. в-в(хлорамин 0, 5-5%, лизол 3-5%).

Б12.

1.Вид-популяция мо, обладающих в стандартных условиях, сходными фенотипич. и генотипич. хар-ми. Штамм-культура мо, выделенная из определенного источника(организм, окр. среда).Клоном назыв. культуру мо, полученную из 1 материнской клетки. Многие виды бактерий подразделяются по одному признаку на биолог. варианты-биовары. Биовары, различающиеся по антигенным св-ам называются сероварами, по чувствительности к фагу- фаговарами.

2.Принцип получ. ч/к-разобщение микробных Кл.Способы разоб-я: а)механ-е: -посев «штрих с площадкой»; -метод секторных посевов; -метод Дригальского; -метод Коха; б)химич-й: -обработка исслед. материала хим. в-вами, учитывая физиологию; -добавление антимикробных в-в в пит.среды; в)биологический: -заражение лаб животных; -прогревание исслед. материала при выделение спорообразующих бактерий; -культивирование при ↓ t.

Посев исследуемого материала методом «штрих с площадкой» – исследуемый материал наносят на поверхность плотной питательной среды на ограниченном участке, а затем распределяют путем посева частыми параллельными штрихами.

Метод Дригальского – материал, внесенный на первую чашку с питательной средой и посеянный с помощью шпателя, последовательно засевают тем же шпателем, не стерилизуя его, еще на 1-2 чашки.

Метод секторных посевов – исследуемый материал одной петлей засевают последовательно на несколько секторов. При этом определенная техника посева (метод Gould) позволяет не только получить изолированные колонии, но и определить количество микроорганизмов

3. Метаболизм бактерий

-его интенсивность имеет достаточно высокий уровень, что возможно обусловлено гораздо большим соотношением поверхности к единице массы, чем у многоклеточных;

-процессы диссимиляции преобладают над процессами ассимиляции;

-субстратный спектр потребляемых бактериями веществ очень широк - от углекислого газа, азота, нитритов, нитратов до органических соединений, включая антропогенные вещества - загрязнители окружающей среды (обеспечивая тем самым процессы ее самоочищения);

-бактерии имеют очень широкий набор различных ферментов - это также способствует высокой интенсивности метаболических процессов и широте субстратного спектра.

Б13

1.Таксономия-раздел систематики, изучающий принципы классификации организмов Искусственная(объединяет организмы в группы на основе сходства их важнейших свойств) Естественная систематика(конечная цель – объединение родственных форм, связанных общностью происхождения и установление иерархического соподчинения отдельных групп.)

Базовый признак, используемый для классификации микроорганизмов – тип клеточной организации. по восходящей: вид, род, триба или колено, семейство, порядок, класс, отдел, царство. при необходимости вводят – подтриба или подколено, подсемейство, подпорядок, подкласс, подотдел. В основе таксономии микроорганизмов лежат след.свойства: Морфологические(общие критерии: величина, форма, агрегация, наличие капсулы, эндоспор, жгутиков) и тинкториальные (способность окрашиваться красителями.по Граму: Грамположительные, Грамотрицательные); подвижность(скользящие бактерии(за счет волнообразных сокращений тела), плавающие(движение обеспечивают жгутики или реснички)); способность к спорообразованию; физиологическая активность(по способу питания, по типу получения энергии, по отношению к кислороду(аэробные, анаэробные и факультативные)); биохимические свойства; антигенные свойства (родоспецифичные, видоспецифичные, сероватоспецифичные); чувствительность к бактериофагам; химический состав; генетическое сродство.

2.Большинство способов основано на использовании диф.диагностики сред, включающих различные индикаторы; способность к ферментации; оценивают по изменению окраски среды вследствие образования кислот, вызывающих изменение окраски индикатора; пестрый ряд – применяют среды Гиса(МПБ, индикатор, углеводы и тд, желтый → красный); стеклянные поплавки для определения способности микроорг-в ферментировать углеводы с образованием кислоты и газа; расщепление белков – нек-е бактерии проявляют протеолитическую активность, выделяя протеазы, катализирующие расщепление белков; образование аммиака(проводят посев в МПБ, закрепляют полоску лакм.бумаги, бумага синеет); образование индола и сероводорода(посев в МПБ, бумажки пропитывают щавелевой кислотой, ацет.свинца.индол-краснеет, сероводород – чернеет.)

3.Цель: идентификация исслед-й культуры и определение ее а/бграммы.Отмечают хар-р роста выделенной ч.культуры. Визуально ч.культура хар-ся однородным ростом. При микроскопическом исслед. окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нем обнаруж. морфологические и тинкториально однородные клетки.Проводят посев культуры на «пестрый ряд»: полужидкие среды Гиса с индикатором ВР, глюкоза, лактоза, манит и МПБ.Основой изучения б/х-х св-в мо с целью их идентификации является определение промежуточных и конечных продуктов метаболизма.Посев исслед. культуры в столбик полужидкого агара-позволяют определить отношение к молекулярному О2.Определение а/бграммы диско-диффузным методом.

Б14

1 Клеточные стенки бактерий состоят из пептидогликана (муреина) и бывают двух типов: грамположительного и грамотрицательного. Клеточная стенка грамположительного типа состоит исключительно из толстого слоя пептидогликана, плотно прилегающего к клеточной мембране и пронизанного тейхоевыми и липотейхоевыми кислотами. При грамотрицательном типе слой пептидогликана существенно тоньше, между ним и плазматической мембраной находится периплазматическое пространство, а снаружи клетка окружена ещё одной мембраной, представленной т. н. липополисахаридом и являющаяся пирогеннымэндотоксином грамотрицательных бактерий.

Капсула, микрокапсула, слизь

Капсула - слизистая структура толщиной более 0, 2мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая четко очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках из патологического материала. Она выявляется при специальных методах окраски Зырянова, Гиса. Капсула состоит из полисахаридов (экзополисахаридов), иногда из полипептидов, например, у сибиреязвенной бациллы она состоит из полимеров D-глутаминовой кислоты. Капсула гидрофильна, препятствует фагоцитозу бактерий. Капсула антигенна: антитела против капсулы вызывают ее увеличение (реакция набухания капсулы).
Жгутики. Жгутики бактерий определяют подвижность бактериальной клетки. Жгутики представляют собой тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны, имеют большую длину, чем сама клетка. Толщина жгутиков 12-20 нм, длина 3-15 мкм. Они состоят из 3 частей: спиралевидной нити, крюка и базального тельца, содержащего стержень со специальными дисками (1 пара дисков - у грамположительных и 2 пары дисков - у грамотрицательных бактерий). Дисками жгутики прикреплены к цитоплазматической мембране и клеточной стенке. Метод Лейфсона

Пили. Пили (фимбрии, ворсинки) - нитевидные образования, более тонкие и короткие (3-10нм х 0, 3-10мкм), чем жгутики. Пили отходят от поверхности клетки и состоят из белка пилина, обладающего антигенной активностью. Различают пили, ответственные за адгезию, то есть за прикрепление бактерий к поражаемой клетке, а также пили, ответственные за питание, водносолевой обмен и половые (F-пили), или конъюгационные пили. Пили многочисленны - несколько сотен на клетку.

Споры. Споры - своебразная форма покоящихся фирмикутных бактерий, т.е. бактерий с грамположительным типом строения клеточной стенки. Споры образуются при неблагоприятных условиях существования бактерий (высушивание, дефицит питательных веществ и др.. Внутри бактериальной клетки образуется одна спора (эндоспора). Образование спор способствует сохранению вида и не является способом размножения, как у грибов. Споры кислотоустойчивы, поэтому окрашиваются по методу Ауески или по методу Циля-Нильсена в красный, а вегетативная клетка в синий цвет. Форма спор может быть овальной, шаровидной; расположение в клетке -терминальное, т.е. на конце палочки (у возбудителя столбняка), субтерминальное - ближе к концу палочки (у возбудителей ботулиэма, газовой гангрены) и центральное (у сибиреязвенной бациллы). Спора долго сохраняется из-за наличия многослойной оболочки, дипиколината кальция, низкого содержания воды и вялых процессов метаболизмов. Метод по Ожешки, Тружильо

3 Физический метод. Он заключается в удалении воздуха из эксикатора или анаэростата при помощи масля­ного воздушного насоса. Жидкие среды перед засевом для удаления из них воздуха кипятят, то есть проводят так на­зываемое регенерирование среды; для предотвращения кон­такта жидкой среды с воздухом на ее поверхность наносят слой вазелинового или парафинового масла.

Физические методы. Основаны на выращивании микроорганизмов в безвоздушной среде, что достигается:

1) посевом в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества;

2) посевом микроорганизмов в глубину плотных питательных сред;

3) механическим удалением воздуха из сосудов, в которых выращиваются анаэробные микроорганизмы;

4) заменой воздуха в сосудах каким-либо индифферентным газом.

Б 15

1 Грамотрицателъные бактерии имеют сравнительно тонкую клеточную стенку. В ней выделяют два слоя — пластичный и ригидный. Последний образован одним, редко двумя слоями пептидогликана. На пептидогликановом каркасе расположены фосфолипиды, липополисахариды (ЛПС) и белки, образующие пластичный слой • Фосфолипиды клеточной стенки пластичного слоя прикреплены к пептидогликану липопротеинами, пересекающими периплазматическое пространство. Основное отличие внешнего фосфолипидного слоя от внутреннего ригидного — высокое содержание липополисахариды. • Липополисахариды клеточной стенки состоят из липидной части (липид А), базисной части молекулы полисахарида (сердцевина) и боковых полисахаридных цепей (рис. 4-5). Иммуногенные свойства проявляют боковые полисахаридные цепи и сердцевина. Липидная часть термоустойчива и отвечает за биологические эффекты ЛПС.. • Белки, входящие в состав пластичного слоя, подразделяют на основные (мажорные) и второстепенные (минорные). К мажорным белкам относят порины, образующие трансмембранные каналы, вовлечённые в транспорт ионов и гидрофильных соединений из внешней среды в периплазму. Минорные белки также могут участвовать в транспорте веществ через пластичный слой (путём облегчённой диффузии или активного транспрта молекул).

3 Стерилиза́ ция — освобождение какого-либо предмета или материала от всех видов микроорганизмов (включая бактерии и их споры, грибы, вирусы и прионы), либо их уничтожение. Методы стерилизации: Физический Химический Физические методы стерилизации.

1. Паровой метод. Стерилизующим средством является водяной насыщенный пар под избыточным давлением 0, 05 МПа - 0, 21 МПа, температурой 110-135º С; стерилизацию осуществляют в паровых стерилизаторах (автоклавах). Режимы стерилизации: 2атм.-30мин., 1, 5атм. – 45 мин., 1, 1 атм. – 1 час. Паровым методом стерилизуют общие хирургические и специальные инструменты, детали приборов и аппаратов из коррозионностойких металлов, стекла, шприцы с пометкой 200 º С, хирургическое белье, перевязочный и шовный материал, изделия из резин (перчатки, трубки, катетеры, зонды и т.д.), латекса, изделия из пластмасс.

Воздушный метод. При воздушном методе стерилизации стерилизующим средством является сухой горячий воздух, стерилизацию осуществляют в воздушных стерилизаторах. Режим стерилизации 180 С – 1 час.