Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Провести контрольное исследование крови донора (крови из флаконов).
|
|
Контейнер (бутылку) с переливаемой кровью, эритроцитной массой выдерживают после взятия из холодильника при комнатной температуре не более 30 минут, в экстренных случаях подогревают до температуры +37°С в специальных устройствах (под контролем термометра!). Подогревание крови показано в следующих случаях: при скорости переливания более 50 мл/кг/час у взрослых и более 15 мл/кг/час у детей, в частности, у новорожденных; если у пациента имеется клинически значимая холодовая агглютинация.
Контрольное исследование крови донора на групповую принадлежность проводится при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток по приведенной ранее инструкции.
Пробы на индивидуальную совместимость крови реципиента и донора выполняются сывороткой крови больного, которую получают путем центрифугирования или отстоя крови в пробирке. Сыворотка для выполнения проб на совместимость годна при хранении в холодильнике течение 2-3-х суток. Пробы на совместимость по группам крови АВО и на резус-совместимость проводятся последовательно и обе пробы обязательны для выполнения. Также обязательно проведение обеих проб при переливании каждой следующей дозы крови или ее компонентов.
Порядок получения сыворотки больного и крови донора.
Для получения сыворотки у больного берут 4-5 мл крови без стабилизатора в пробирку после определения группы крови, на пробирку наклеивается групповая марка, на которой должна быть указаны номер медицинской карты, фамилия и инициалы больного, дата. При этом врач должен лично убедиться в том, что надписи на пробирке сделаны правильно и относятся к тому больному, у которого взята эта кровь. Запрещается взятие образцов крови у 2-х или более больных одновременно.
Через 3-5 минут пробирку с кровью следует сильно встряхнуть для отделения сгустка с стенок пробирки или обвести его сухой стеклянной палочкой. После ретракции сгустка от него отделяется сыворотка, которая и служит для выполнения пробы на совместимость (если необходимо ускорить отделение сыворотки, пробирку с кровью центрифугируют около 5 минут при 200 (3000 об/мин).
Пробирку с кровью реципиента и контейнеры с остатками перелитых гемопродуктов следует хранить в течение 2-х суток в холодильнике при температуре+4+8°С.
Под термином «совместимость» понимают сочетание крови донора и реципиента по антигенам и антителам, не вызывающие иммунологических взаимодействий.
- Провести пробу №1 на совместимость – по группе АВО.
Техника проведения пробы на совместимость по группам крови системы АВО.
На белую промаркированную (с обозначением Ф.И.О. реципиента) пластинку наносятся 2 капли сыворотки крови больного, к которой добавляется маленькая капля крови донора (соотношение 10: 1). Кровь перемешивается с сывороткой больного, затем пластинку периодически покачивают в течение 5 минут и одновременно наблюдают результат реакции. Отсутствие агглютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по группам крови АВО. Появление агглютинации указывает на их несовместимость и на недопустимость переливания данной крови.
Кровь донора получают из контейнера (бутылки), который подготовлен для переливания. Для этого кровь выпускают через иглу устройства для переливания крови (или из отрезка трубки контейнера) в небольшом количестве (5-10 капель) в пробирку или на пластинку, на которой будет производиться проба. На пробирке (пластинке) надписывается фамилия и инициалы донор, группа его крови и номер контейнера (бутылки). При этом врач должен лично убедиться в том, что на пробирке (пластинке) правильно указаны все сведения о доноре, имеющиеся на контейнер (бутылке), из которого получена эта кровь. Если больному переливается кровь из нескольких контейнеров (бутылок), пробы на совместимость должны быть выполнены с кровью из каждого контейнера (бутылки), даже если на них обозначено, что кровь получена от одного и того же донора
Если выявлена несовместимость сыворотки реципиента с эритроцитами донорской крови необходимо исключить технические ошибки: перепутывание образцов крови, перепутывание от бранных доз донорской крови. Пробы на совместимость следует повторить с эритроцитами из той же дозы крови и из дополнительно отобранной. Параллельно проводится аутотест с собственными эритроцитами пациента. В случае подтверждения несовместимости сыворотки реципиента донорскими эритроцитами, в частности, у больных с отягощенным трансфузионным или акушерским анамнезом следует провести универсальную пробу на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента. При выявлении антител (универсальная проба положительна) пробирка кровью больного должна быть направлена в учреждение службы крови для индивидуального подбора донорской крови.
Перед переливанием крови или эритроцитной массы новорожденному необходимо определить группу крови матери и ребенка. Затем эритроциты ребенка исследуют в прямой пробе Кумбса и, если она отрицательна, проводят пробу на совместимость эритроцитов донора и сыворотки ребенка. При совпадении групповой принадлежности у матери и ребенка в пробе на совместимость может быть использована сыворотка матери.
Прямая проба Кумбса (прямой антиглобулиновый тест) применяется для выявления в крови ребенка антител, которые он мог получить от матери (до 4-х-месячного возраста антитела у детей не вырабатываются даже после многократных трансфузий).
При выявлении несовместимости сыворотки ребенка с эритроцитами донора или наличия гемолитической болезни у новорожденного необходимо использовать в пробе на совместимость сыворотку матери. В этих случаях предпочтение следует отдать переливанию эритроцитов 0(I) группы крови с низкими титрами анти-А и анти-В антител (если ребенок имеет не 0(I) группу крови). При подозрении на АВО-гемолитическую болезнь следует использовать эритроцитную массу 0(I) группы крови, ресуспендированную в 1/3 объема свежезамороженной плазмы АВ(IV) группы, в частности, для обменных трансфузий, поскольку А или В субстанции помогают нейтрализовать анти-А или анти-В антитела.
- Провести пробу №2 на совместимость – по резус-фактору.
Пробы на резус-совместимость крови донора и реципиента.
Эта проба проводится с целью выявления в крови реципиента антител к антигенам эритроцитов донора, которые могли выработаться у реципиента вследствие предыдущих переливаний крови или резус-несовместимой беременности.
При проведении проб на совместимость по резус-антигену D следует учитывать, что если резус-отрицательному больному будет ошибочно выбрана резус-положительная кровь, это может быть выявлено только в том случае, если у реципиента имеются в крови резус-антитела. Выявить различие в резус-принадлежности крови донора и реципиента, если последний не имеет антител, пробы на совместимость не могут.
Предупреждение таких ошибок должно быть обеспечено предварительным определением (резус-принадлежности крови донора и реципиента и тщательной проверкой записей этих результатов в медицинской карте и на контейнере (бутылке) с кровью.
Ввиду того, что при иммунизации антигенами системы Резус образуются в подавляющем большинстве случаев неполные антитела, которые требуют для своего выявления определенных условий, для пробы на резус-совместимость рекомендуется использовать одну из следующих методик.:
► Проба на резус-совместимость с использованием 33% раствора полиглюкина.
Проба проводится в пробирке без подогрева в течение 5 минут. На дно промаркированной пробирки вносятся 2 капли сыворотки больного, 1 капля крови донора и 1 капля 33% раствора полиглюкина, специально приготовленного для лабораторных целей. Содержимое пробирки перемешивается путем встряхивания, затем пробирку следует наклонить почти до горизонтально го положения и медленно поворачивать таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки. Наблюдение проводится в течение 5 минут. Затем в пробирку следует долить 3-4 мл изотонического раствора хлорида натрия, перемешать содержимое путем 2-3-х кратного перевертывания пробирки (не взбалтывать!) и просмотреть на свет невооруженным глазом.
Оценка результатов: наличие агглютинатов эритроцитов на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости указывает на то, что кровь донора несовместима с кровью больного и не может быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, без признаков агглютинации эритроцитов, кровь донора совместима с кровью больного.
► Проба на резус-совместимость с использованием 10% раствора желатина.
На дно пробирки, соответственно промаркированной, поместить 1 каплю эритроцитов донора, затем добавить 2 капли подогретого до разжижения 10% раствора желатина и 1 каплю сыворотки больного. Раствор желатина перед употреблением необходимо тщательно просмотреть. При помутнении, появлении хлопьев, потере способности загустевать, желатин не пригоден.
Содержимое пробирки закрыть пробкой, перемешать путем встряхивания и поместить в водяную баню или термостат в горизонтальном положении при температуре +46 - +48°С на 15 мин. Затем пробирку извлечь из водяной бани или термостата, добавить 5-8 мл изотонического раствора хлорида натрия, перемешать содержимое путем 1-2-кратного перевертывания пробирки и просмотреть на свет невооруженным глазом или через лупу.
Оценка результатов: наличие агглютинатов на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, слегка опалесцирует и в ней не наблюдается агглютинация эритроцитов, кровь донора совместима с кровью реципиента.
► Непрямая проба Кумбса как проба на совместимость переливаемой крови.
Оснащение:
- пробирка № 1 высотой не менее 10 см с маркировкой, содержащей сведения о доноре (фамилия, инициалы, групповая и резус-принадлежность);
- пробирка № 2 высотой 3-4 см с маркировкой, содержащей сведения о больном (фамилия инициалы, групповая и резус-принадлежность);
- лабораторная центрифуга;
- термостат 37°С;
- белые пластинки со смачиваемой поверхностью;
- изотонический раствор хлорида натрия;
- антиглобулиновая сыворотка;
- пастеровские пипетки.
Техника проведения реакции
Через иглу устройства для переливания кровь, эритроцитную массу донора из бутылки, предназначенной для трансфузии, или из отрезка трубки контейнера набрать в количестве 1-2 мл в пробирку №1.
Пробирку долить доверху изотоническим раствором хлорида натрия, содержимое перемешать, центрифугировать, аспирировать отмывную жидкость. Такое отмывание повторить дважды, каждый раз удаляя отмывную жидкость.
Со дна пробирки № 1, содержащей отмытые эритроциты донора, очень тонкой пастеровской пипеткой набрать маленькую каплю (0, 01 мл) эритроцитов и перенести ее в пробирку № 2.
В пробирку № 2 к эритроцитам донора добавить 3 капли сыворотки больного, пробирку встряхнуть для перемешивания эритроцитов с сывороткой, после чего поместить в термостат при 37°С на 45 минут. За это время изоиммунные антитела, если они имеются в сыворотке реципиента, фиксируются на эритроцитах донора.
После инкубации в пробирку № 2 добавить доверху изотонический раствор хлорида натрия, содержимое пробирки перемешать, центрифугировать и удалить отмывную жидкость. Такое отмывание эритроцитов повторить 3-4 раза.
К осадку отмытых эритроцитов добавить 3-4 капли изотонического раствора хлорида натрия для получения приблизительно 5% взвеси.
Одну каплю 5% взвеси эритроцитов перенести на белую пластинку, добавить по одной капле антиглобулиновой сыворотки.
Сыворотку перемешать с эритроцитами и наблюдать результат реакции при покачивании пластинки в течение 20-ти минут.
При несовместимости по резус-фактору агглютинация обычно наступает в течение первой минуты. Однако при низком титре резус-антител (или других антител) агглютинация может наступить позже.
Трактовка результатов
Если наблюдается агглютинация эритроцитов (агглютинаты видны в виде комочков на просветленном или полностью обесцвеченном фоне), это указывает на то, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не может быть ему перелита. Если взвесь эритроцитов осталась гомогенно окрашенной, без признаков агглютинации, это значит, что кровь больного не содержит неполных антител к эритроцитам донора в отношении резус-фактора и других аллоантигенов, к которым могли образоваться антитела неполной формы.
Непрямая проба Кумбса является чувствительной только в отношении неполных антител.
► Универсальная проба на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента.
Проба на индивидуальную совместимость сыворотки реципиента с эритроцитами предполагаемого донора является наиболее надежным способом выявления антител, способных вызвать повреждение перелитых эритроцитов и посттрансфузионные реакции (гемолитические). Проведение такой пробы позволяет:
- определить АВО совместимость донора и реципиента;
- выявить практически все антитела в сыворотке реципиента, направленные против эритроцитов донора.
Во всех случаях, кроме срочных трансфузий, проба проводится в 2 этапа: первый - без использования антиглобулинового реагента, второй - с антиглобулиновым реагентом или с использованием раствора желатина. В случае использования желатина метод менее чувствителен.
Первый этап
Поместить 2 капли сыворотки реципиента в маркированную пробирку.
Добавить 1 каплю 3% взвеси трижды отмытых эритроцитов донора в изотоническом растворе хлорида натрия (фиксация антител происходит лучше в растворе низкой ионной силы -LISS, поэтому предпочтительнее взвесить эритроциты в растворе LISS, обычно поставляемое изготовителем вместе с антиглобулиновым реагентом).
Немедленно центрифугировать при 2000 об/мин в течение 20-30 секунд.
Просмотреть супернатант на наличие гемолиза, мягко покачивая пробирку отделить клеточный осадок от дна пробирки и определить наличие агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов на этой стадии может означать несовместимость по системе АВО, либо присутствие в сыворотке реципиента полных холодовых антител не АВО специфичности (анти-S, анти-Р1, анти М, анти-N и др.).
Второй этап
Проба с антиглобулиновым реагентом
Если гемолиз отсутствовал, а после встряхивания пробирки эритроциты образовали гомо генную суспензию, следует инкубировать пробирку 30-45 минут (при использовании LISS время инкубации составляет 10-15 минут) при 37°С.
Центрифугировать пробирку при 2000 об/мин в течение 20-30 секунд и просмотреть супернатант на наличие гемолиза и агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов (после встряхивания пробирки) говорит о присутствии у реципиента полных тепловых антител против эритроцитов донора.
Если гемолиз и агглютинация отсутствуют, следует провести отмывание эритроцитов 3-4 раза большим объемом (не менее 5 мл) в изотоническом растворе хлорида натрия (недостаточное отмывание может привести к инактивации антиглобулинового реагента и ложноотрицательному результату теста, поскольку сыворотка даже в разведении 1: 4000 инактивирует равный объем антиглобулинового реагента).
Добавить 1-2 капли антиглобулиновой сыворотки и тщательно перемешать.
Центрифугировать пробирку, как указано выше, мягко разбить осадок и просмотреть пробирку на наличие агглютинатов.
Оценка результатов
Кровь донора считается совместимой, если ни на одной стадии пробы на индивидуальную совместимость с кровью реципиента не наблюдается ни гемолиза, ни агглютинации. Агглютинация свидетельствует о наличии аллоантител в сыворотке реципиента, специфичность которой может быть выявлена в специальной серологической лаборатории исследованием с панелью типированных эритроцитов. Такие реципиенты нуждаются в специальном подборе донора.
Качество антиглобулинового реагента гарантируется изготовителем. Реагент с истекшим сроком годности или после повторного замораживания (оттаивания) использованию не подлежит. С целью контроля (если возникли сомнения в качестве реагента) следует провести антиглобулиновый тест с резус-положительными эритроцитами, сенсибилизированными неполными анти-D антителами.
После выполнения проб на совместимость по группе АВО и резус фактору флакон с кровью заправляется система для внутривенной инфузии.
Перед выполнением биологической пробы, переливанием крови и ее компонентов реципиенту врач обязан спросить фамилию, имя, отчество больного, дату его рождения и сверить эти данные с записями в медицинской карте и на пробирке, из которой проводилось определение группы крови и проб на совместимость с донорской кровью. Эта процедура повторяется перед трансфузией каждой дозы крови или ее компонентов.
При переливании цельной донорской крови, эритроцитной массы, отмытых эритроцитов врач, производящий трансфузию, независимо от проведенных ранее исследований и имеющихся записей, обязан;
Проверить документацию:
- сравнить запись определения группы крови реципиента по системе АВО (результат анализа в медицинской карте) и донора (данные этикетки на контейнере с кровью, приготовленной для переливания) и убедиться, что кровь донора совместима с кровью реципиента по группе крови системы АВО;
- проверить запись о резус-принадлежности в медицинской карте реципиента и на этикетке контейнера с кровью и убедиться, что кровь донора и реципиента совпадают по резус-принадлежности.
После осуществления венозного доступа выполняется биологическая проба.
- Провести пробу №3 на совместимость – биологическую.
Перед переливанием каждой дозы крови или эритроцитной массы, плазмы врач обязан измерить температуру, пульс, артериальное давление больного и зафиксировать результат в его медицинской карте.
Биологическая проба производится независимо от скорости введения трансфузионной среды: струйно переливают 10-15 мл крови (эритроцитной массы, ее взвеси, плазмы); затем в течение 3-х минут проводится наблюдение за состоянием больного. При отсутствии клинических проявлений реакций или осложнений у реципиента (учащения пульса, дыхания, появления одышки, затрудненного дыхания, гиперемии лица и т.д.) ему повторно вводится 10-15 мл крови эритроцитной массы, ее взвеси, плазмы) и в течение 3 минут ведется наблюдение за больным. Указанная процедура проводится 3 раза. Отсутствие реакций у больного после троекратной проверки является основанием для продолжения трансфузии.
В случае развития клинических признаков реакции на переливание крови и ее компонентов поведение больного становится беспокойным, у него появляется ощущение озноба или жара, стеснение в груди, боль в пояснице, животе, голове. При этом могут наблюдаться снижение артериального давления, учащение пульса, увеличение частоты дыхания, появление бледности, а аатем - цианоза лица. При возникновении любого из описываемых признаков реакции на переливание крови или ее компонентов гемотрансфузия должна быть немедленно прекращена путем наложения зажима на трубку устройства (системы) для переливания крови. Затем устройство (система) должно быть отсоединено от находящейся в вене иглы, к которой присоединяется другое устройство (система) - с солевым раствором. Игла из вены не удаляется во избежание потери необходимого в дальнейшем венозного доступа.
Проведение мероприятий при реакциях на переливание крови и ее компонентов изложено в главе «реакции и осложнения при переливании крови».
Не допускается: вводить любые лекарства в гемотрансфузионную среду (за исключением 0, 9%-го изотонического раствора хлорида натрия для разведения эритроцитной массы); переливать кровь или ее компоненты из одного контейнера (бутылки) нескольким больным, в том числе детям.
- Выполнить гемотрансфузию;
Переливание крови и ее компонентов производится с соблюдением правил асептики одноразовыми пластиковыми устройствами.
В течение 15 минут после начала трансфузии пациент должен быть под постоянным наблюдением. Температура и пульс должны быть измерены и зафиксированы через 15 минут после начала переливания каждой дозы, после окончания трансфузии повторно регистрируются показатели температуры, пульса и артериального давления.
Если трансфузия одного компонента длится более 12 часов, устройство для переливания крови должно быть заменено новым. Замена аналогичного устройства производится после каждого вида гемотрансфузий, если она сменяется инфузией.