Окраска по Нохту

Реактивы.

1. Основной раствор азура II (1г на 1л дистиллированной воды).

2. Основной раствор эозина калия (1г на 1л дистиллированной воды). Красители нуждаются в вызревании в течение 2 недель в темном месте при периодическом помешивании.

3. Фосфатный буфер с рН 7, 4-7, 5.

4. Рабочий раствор азур-эозина готовят перед употреблением путем смешивания 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина К и 55 мл буферного раствора.

Ход окраски. Окраску производят так же, как методом Романовского – в кюветах с помощью свежеприготовленного рабочего раствора азур-эозина в течение 20-45 минут. Пропорции красителей и время окраски устанавливаются опытным путем для каждой партии красителя.

Окраска по Паппенгейму

Реактивы.

1. Готовый краситель-фиксатор Май-Грюнвальда (1г эозинметиленового синего растворяют в 1л метилового спирта).

2. Свежеприготовленный раствор краски Романовского или рабочий раствор азур-эозина по Нохту.

Ход окраски. Мазки не нуждаются в предварительной фиксации, так как краска Май-Грюнвальда, приготовленная на метиловом спирте, одновременно и фиксирует, и красит мазок. На нефиксированный мазок наносят 2 мл красителя-фиксатора Май-Грюнвальда на 3 минуты. Доливают столько же (2 мл) дистиллированной воды и выдерживают 1 минуту. Краску сливают, промывают мазки водопроводной водой. Докрашивают мазки рабочим раствором азур-эозина по Нохту или разведенной краской Романовского в течение 8-15 минут. Время окрашивания устанавливают опытным путем для каждой новой партии красителя. Промывают мазки водой и высушивают на воздухе.

ТЕХНИКА ПОДСЧЕТА ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ФОРМУЛЫ

Подсчет лейкоцитарной формулы проводят при микроскопии окрашенного мазка крови с иммерсионной системой (объектив 90Х, окуляр 7Х или 10Х, конденсор поднят). Для регистрации клеток используют лабораторные счетчики СЛ-1 (счетчик лабораторный–1) или более современные его модификации. Подсчет лейкоцитов проводят в тонкой части мазка, где эритроциты лежат одиночно, а не сложены в «монетные столбики». Считают все встречающиеся целые, не разрушенные клетки, дифференцируя их по видам. Лейкоциты располагаются в мазке неравномерно: более крупные клетки (моноциты, эозинофилы, нейтрофилы) встречаются чаще по краю мазка, а более мелкие (лимфоциты) – в его середине, поэтому подсчет лейкоцитарной формулы следует проводить как по краю, так и по середине мазка, передвигая его по зигзагообразной линии – «линии меандра».

Если количество лейкоцитов в крови в пределах нормы и при подсчете первых 100 лейкоцитов не обнаружено никаких отклонений ни в составе лейкоцитарной формулы, ни в морфологии клеток, то ограничиваются подсчетом 100 лейкоцитов. Если же были выявлены какие-либо отклонения от нормы, необходим подсчет 200 лейкоцитов. При лейкоцитозах всегда следует подсчитывать 200 лейкоцитов. Для расчета лейкоцитарной формулы в этом случае полученные результаты нужно разделить на 2.

Приготовление лейкоконцентрата проводят в случаях выраженной лейкопении, когда подсчет лейкоформулы затруднен, а также для обнаружения патологических элементов, не выявляемых в обычных препаратах (бластных клеток при лейкопенических формах лейкозов и т.п.).

Принцип. Придобавлении трилона Б, ускоряющего осаждение эритроцитов, получают плазму, содержащую большое количество лейкоцитов.

Реактив: 3% раствор трилона Б.

Ход работы. В пробирку с 1мл 3% раствора трилона Б вносят 4мл венозной крови, осторожно перемешивают и оставляют стоять 30-45 минут при комнатной температуре или в термостате при 37º С. При этом образуется 2-3 мл прозрачной плазмы. Пастеровской пипеткой отсасывают надосадочную жидкость в центрифужную пробирку, стараясь не захватывать эритроциты и центрифугируют 10 минут при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, а из осадка готовят мазки крови, помещая 1 каплю осадка на предметное стекло. Высушивают мазки на воздухе, фиксируют и окрашивают гематологическими красителями.