Метод мембранных фильтров

Пробу в объеме 50 мл фильтруют через 2-3 фильтра с таким расчетом, чтрбы получить изолированные колонии.

Фильтры помещают на желточно-солевой агар (п. 2.4.16) и инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч.

Подсчитывают блестящие выпуклые колонии белого, палевого, золотистого цвета, окруженные радужной с перламутровым блеском зоной; 96-98 % таких колоний образованы Staphylococcus aureus.

При необходимости подтвердить принадлежность таких бактерий к Staphylococcus aureus подозрительные колонии пересевают на желточно-солевой агар бляшками, микроскопируют, определяют плазмокоагулазную активность. При наличии мелких грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздей, и коагулировании плазмы дают положительный ответ.

Число колоний стафилококков делят на объем воды, профильтрованной через фильтры, на которых велся учет, и умножают на 100.

Титрационный метод

Делают посевы 10, 1 и 0, 1 мл исследуемой воды в 2-3 повторностях в стерильную пептонную воду с хлоридом натрия; 1 и 0, 1 мл вносят в среду накопления, содержащую 10% хлорида натрия и 1% пептона.

Для посева 10 мл заготавливают впрок сухие навески хлорида натрия по 1 г, стерилизуя их сухим жаром, и 25%-ный стерильный раствор пептона.

К 10 мл исследуемой воды прибавляют соответственно 1 г хлорида натрия и 1 мл 25 %-ного раствора пептона.

Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 ч. Высев из посевов производят на желточно-солевой агар.

Вычисление числа стафилококков в 100 мл воды производят по соответствующим таблицам прилож. 8.

Приложение 8

(обязательное)

Таблицы расчета наиболее вероятного числа микроорганизмов

Таблица 8.1

Расчет наиболее вероятного числа бактерий в 100 мл воды поверхностных водоемов, обеззараженных сточных вод

При исследовании других объемов воды, помимо 1; 0, 1 и 0, 01, соответственно уменьшают или увеличивают НВЧ. Например, при исследовании объемов 10; 1 и 0, 1 мл НВЧ уменьшают в 10 раз; при исследовании объемов 0, 1; 0, 01 и 0, 001 мл НВЧ увеличивают в 10 раз; при исследовании объемов 0, 01; 0, 001 и 0, 0001 мл НВЧ увеличивают в 100 раз и т. д.

Если при исследовании воды сделан посев более чем трех десятикратных объемов воды или разбавлений, то учитывают 3 такие последовательные объема, в последнем из которых получен один или несколько отрицательных результатов. Например: 10 мл - обе пробирки положительны, 1 мл - аналогично, 0, 1 мл - положительный результат только в одной пробирке, 0, 01 мл - отрицательный результат в обеих пробирках. Учитывают объемы 1; 0, 1 и 0, 01 мл

Таблица 8.2