Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Схема постановки основного опыта РСК
Примечание: * - гемолитическую систему готовят, смешивая в равных количествах гемолитическую сыворотку в тройном титре и 3% взвесь эритроцитов барана; выдерживая смесь в течение часа при 37° С. Результаты РСК предварительно учитывают после извлечения пробирок из термостата и окончательно – спустя 15-18 ч после пребывания их при комнатной температуре или в холодильнике. Интенсивность реакции выражают плюсами: ++++ - реакция резко положительная, характеризующаяся полной задержкой гемолиза (эритроциты оседают на дно, жидкость бесцветная); +++ - реакция положительная, характеризующаяся частичным гемолизом (лизировано ~ 25% эритроцитов, осадок меньше, жидкость розовая); ++ - реакция положительная, характеризующаяся гемолизом (лизировано ~50% эритроцитов, осадок небольшой, жидкость розовая); + - реакция сомнительная (лизировано ~75% эритроцитов, незначительный осадок, жидкость интенсивно окрашен1.; _ - реакция отрицательная (лизированы все эритроциты, жидкость интенсивно окрашена и прозрачна – лаковая кровь). Достоверность результатов подтверждается контролями ингредиентов. Заполните дома таблицу 2. Таблица 2.
Обозначения: С – сыворотка; А – антиген; К – комплемент; Г – гемолитическая сыворотка; Э – эритроциты; ГС – гемолитическая система.
Оценка результатов: положительная реакция с интенсивностью не меньше ++ при достоверных контролях свидетельствует о наличии антител и серологическом подтверждении клинического диагноза; отрицательная реакция при достоверных контролях свидетельствует о том, что антитела не выявлены и серологически клинический диагноз не подтвержден. РСК используется, помимо диагностики хронической гонорее, при риккетсиозах, вирусных и других инфекциях. 2. Учтите и оцените результаты РИФ (прямой) с исследуемым материалом (отделяемое карбункула) и люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой. Постановка: готовится фиксированный препарат-мазок из исследуемого материала, на который наносится люминесцирующая сибиреязвенная сыворотка, содержащая антитела к бациллам сибирской язвы, меченные флюоресцентным красителем (ФИТЦ – флюоресцеина изотиоцианат). Препарат помещают во влажную камеру, инкубируют 30 мин при 37°С, после чего его промывают водой и высушивают. Учет результатов реакции осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, позволяющего освещать препарат ультрафиолетом, что заставляет флюорохром светиться. Критерии учета и оценки: при положительной РИФ – в результате соединения специфических антител, меченых флюорохромом, с антигенами микробных клеток в препарате выявляют светящиеся микроорганизмы, сходные по морфологии, размерам и взаимному расположению с предполагаемым возбудителем. Бациллы сибирской язвы – это крупные палочки длиной до 7-8 мкм, с обрубленными концами, располагающиеся в патологическом материале короткими цепочками, парами или одиночно.
3. Учтите и оцените результаты ИФА с сыворотками доноров на ВИЧ-инфекцию. Постановка: для определения специфических антител используют специальные панели из полистирола, в лунках которых фиксирован инактивированный вирус или его антигены. В лунки вносят сыворотки обследуемых и инкубируют. При этом гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела удаляют промыванием буферным раствором. Затем в лунки вносят антитела против иммуноглобулинов (антител) человека, меченные пероксидазой. Если в исследуемой сыворотке присутствовали искомые антитела, то на данном этапе они, выступая в качестве антигена, прореагируют с меченными античеловеческими антителами. Добавление после отмывки субстрата (ортофенилендиамина – ОФ5. позволяет учесть результаты реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет, оценивается как положительная реакция. Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей антиВИЧ - ИФА «+» и сывороткой, заведомо не содержащей антиВИЧ — ИФА «-». Для проведения ИФА широко используют 96-луночные полистироловые планшеты, т. к. на полистироле легко адсорбируются антитела, а после специальной обработки – различные антигены. Для работы с этими планшетами используются многоканальные автоматические пипетки, позволяющие вносить ингредиенты одновременно в несколько лунок панели, а также автоматические и полуавтоматические устройства для промывания лунок. Существуют и специальные автоматы, позволяющие осуществлять все эти этапы ИФА практически без участия человека.
4. Ознакомиться и описать в таблице: антиген для реакции Вассермана, диагностические сыворотки для РСК, диагностикумы для РСК; люминесцирующая сибиреязвенная сыворотка (ФИТЦ), тест-система иммуноферментная для определения антител к ВИЧ. 5.4. Итоговый контроль знаний: - вопросы для самоконтроля: 1. Цель прогревания (56° 30 мин.) сывороток, используемых в РСК. 2. Методика постановки ИФА с целью определения специфических антител. 3. Методика постановки ИФА с целью определения специфического антигена. 4. Методика постановки РИФ с целью экспресс-диагностики заболеваний. 5. Назовите отличие непрямой РИФ от прямой и ее преимущества при определении специфических антигенов. -решение ситуационных задач. ЗАДАЧА №1. При постанове РСК с сывороткой обследуемого с клиническим диагнозом «коклюш» в контроле гемолитической системы наблюдается задержка гемолиза.
ЗАДАЧА №2. При постановке РСК с сывороткой обследуемого с клиническим диагнозом «бруцеллез» получены следующие результаты: реакция достоверна по контролям, в опыте задержка гемолиза.
ЗАДАЧА №3. С материалом от обследуемой К. с клиническим диагнозом «урогенитальный хламидиоз» была поставлена РИФ.
ЗАДАЧА №4. В родильный дом поступила беременная женщина, у которой при исследовании сыворотки крови был определен маркер вируса гепатита B.
ЗАДАЧА №5. В анонимный кабинет обратился гражданин К. с просьбой проверить его на инфицирование ВИЧ. В процедурном кабинете у гражданина К. была взята кровь.
6. Домашнее задание для уяснения темы занятия. Занятие № 11 Иммунопрофилактика, иммунотерапия инфекционных заболеваний. Контрольное занятие: Инфекция, иммунитет, аллергия. 7. Список тем по НИРС, предлагаемый кафедрой:
8. Рекомендуемая литература по теме занятия: Обязательная: 1. Поздеев, О. К. Медицинская микробиология: учеб. пособие / О.К. Поздеев – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 768 с. Дополнительная: 1. Ярилин, А.А. Иммунология: учебник / А.А. Ярилин – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с. 2. Гиллеспи, С.Х. Наглядные инфекционные болезни и микробиология / С.Х. Гиллеспи, К.Б. Бамфорд – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 136 с. 3. Хаитов, Р.М. Иммунология: учебник / Р.М. Хаитов – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 528 с. 4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: 1 т.: учебник / ред. В.В. Зверев [и др.] – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с. 5. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: 2 т.: учебник / ред. В.В. Зверев [и др.] – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 477 с.
|