Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Подпись преподавателя_____
|
|
К работе № 2 Теоретическая справка
Структурные компоненты бактериальной клетки, их функции методы выявления:
| Постоянные компоненты и их природа | Функции | Метод выявления |
| Клеточная стенка Гр + (пептидогликан, тейхоевые кислоты) Гр – (пептидогликан, фосфолипиды, белки, ЛПС) | 1) Скелетная 2) Защитная 3) Рецепторная 4) Антигенная 5) Адгезивная 6) Транспортная 7) Нарушение синтеза клеточной стенки ведет к образованию L-форм | Световая микроскопия, окраска по Граму |
| ЦПМ (цитоплазматическая мембрана) Двойной слой фосфолипидов с внедрёнными белками | 1) Основной осмотический барьер 2) Участвует в регуляции роста и синтезе компонентов клеточной стенки 3) Транспорт питательных веществ в клетку и метаболитов из нее 4) Инвагинации участков ЦПМ - мезосомы - содержат ферменты, обеспечивающие биологическое окисление | Электронная микроскопия |
| Мезосомы Производные ЦПМ | 1) Аналог митохондрий, обеспечивают синтез АТФ и процессы дыхания 2) Участвуют в делении клетки 3) Участвуют в спорообразовании | Электронная микроскопия |
| Цитоплазма Сложная коллоидная система, состоит из воды, растворимых белков, РНК | Обеспечивает функционирование всех органелл | Электронная микроскопия |
| Рибосомы 70S | Отвечают за биосинтез белка | Электронная микроскопия |
| Нуклеоид Двунитевая молекула ДНК, замкнута в кольцо, плотно уложена в виде клубка | Расположен в центральной зоне бактерий (одна хромосома) – носитель генетической информации | Электронная микроскопия |
| Непостоянные компоненты и их природа | Функции | Метод выявления |
| Капсула Слизистая структура, прочно связана с клеточной стенкой (полисахариды или полипептиды) | 1) Защитная 2) Антигенная 3) Адгезивная | Световая микроскопия, окраска по Бурри, Бурри-Гинсу |
Жгутики
Состоят из белка-флагеллина, являющимся Н-антигеном
Пили
Состоят из белка
| Обеспечивают движение бактерий Пили 1-го порядка обеспечивают адгезию на поражаемой микробной клетке. Пили 2го порядка – конъюгационные, обеспечивают перенос части генетического материала от донора к реципиенту | В мазках «висячая капля», «раздавленная капля», при фазово-контрастной микроскопии Электронная микроскопия |
| Плазмиды Дополнительные факторы наследственности в виде замкнутых колец ДНК с небольшой молекулярной массой | 1) Регуляторная – компенсация нарушений метаболизма ДНК клетки хозяина 2) Кодирующая – внесение в бактериальную клетку новой генетической информации | Электронная микроскопия |
| Включения Гликоген, полисахариды, бета-оксимасляная кислота, полифосфаты (волютин) | Запас питательных веществ | Световая микроскопия. Волютин окрашивают по Леффлеру или Нейссеру |
| Спора Образуют Гр+ бактерии, из одной клетки образуется спора. Плотная многослойная оболочка, с большим содержанием кальция и липидов, низким содержанием воды | Сохранение генетической информации, при неблагоприятных условиях. Расположена: - субтерминально - терминально - центрально | Световая микроскопия, окраска по Ожешко. |
Техника приготовления препаратов-мазков, их фиксация и окраска
Для количественного учета, изучения морфологии, выявления спор, капсул, органоидов, включений препарат-мазок необходимо зафиксировать и окрасить.
1 этап. Обезжирить стекло, протерев рабочую поверхность стекла мылом, которое затем удаляют салфеткой.
2 этап. Если микроорганизмы выращены на плотной питательной среде, то на обезжиренное стекло наносят каплю физиологического раствора и в нее вносят петлей небольшое количество материала, который распределяют тонким слоем на поверхности около 2 см2.
3 этап. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют. В процессе фиксации микробные клетки погибают, этим достигается безопасность работы с ними. Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители, чем живые. В фиксированном мазке клетки прикрепляются к стеклу и не смываются при последующей обработке.
Методы фиксации
| Физический метод | Химический метод |
| Фиксация мазка над пламенем спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх | Мазок погружают в фиксатор на определенное время. В качестве фиксатора используют: этанол – 10-15 мин; ацетон – 5 мин; смесь Никифорова (этанол +эфир – 1: 1) – 10-15 мин и др. |
Методы окраски
| Простые методы (ориентировочные) | Сложные методы (дифференцирующие) |
| 1. Применяют для изучения морфологии микроорганизмов. 2. Окрашивают одним красителем анилино-вого ряда (основным или кислым): кислый фуксин, метиленовый синий, эозин, генциановый фиолетовый. | 1. Применяют для изучения структуры клеток, дифференциации микроорганизмов. 2. Используют несколько красителей. Окраска по методу: Грама, Циля-Нильсена, Ожешко, Романовского-Гимза, Нейссера Гинса-Бурри и др. |
Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, в которых красящий ион - катион.
Краситель наливают на поверхность мазка на определенное время, затем мазок промывают до тех пор, пока струи воды не станут бесцветными, осторожно высушивают фильтровальной бумагой. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения абсолютно прозрачно, а клетки микробов интенсивно окрашены.
Окраска по Граму. Сущность метода
Метод основан на способности микроорганизмов удерживать образующийся при окраске комплекс генцианового фиолетового и йода. Это связано с особенностями строения и химического состава грамположительных и грамотрицательных бактерий. У грамположительных бактерий на поверхности клеток есть магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, которые прочно связывают комплекс генцианового фиолетового с йодом и препятствуют его вымыванию спиртом. Кроме того, грамположительные бактерии имеют более выраженный пептидогликановый слой, в котором после обработки спиртом сужаются поры, что также делает невозможным вымывание красителя. В результате грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.
У грамотрицательных бактерий отсутствуют магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, пептидогликановый слой значительно тоньше, а размеры пор шире. Поэтому при обработке спиртом краситель легко вымывается, бактерии обесцвечиваются и при использовании дополнительного красного красителя грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет.
Методика окраски по Граму
1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового на 1-2 минуты, затем краситель сливают.
2. Наносят раствор Люголя на 1 мин.
3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Препарат промывают водой.
5. Мазок докрашивают водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
Этапы окраски по Граму представлены на стенде.