Правила микроскопирования

АЛЬБОМ

ПО ЦИТОЛОГИИ, ГИСТОЛОГИИ И ЭМБРИОЛОГИИ

СТУДЕНТА ____ КУРСА ВЕТЕРИНАРНОГО ФАКУЛЬТЕТА ГРУППА ________

___________________________________________________________________________

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ ВЕТЕРИНАРИЯ/ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА

УЧЕБНЫЙ ГОД 20___/20____

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

Требования к гистологическому препарату:

- тонкий

- прозрачный

- оптически дифференцированный (цветной)

1. Взятие свежего материала (объем 1 см³)

2. Фиксация (сущность – зафиксировать прижизненную структуру белков)

Фиксаторы: 10% забуференный раствор нейтрального формалина; спирты и др.

3. Уплотнение срезов

- заморозка (уплотнение жидкой угольной кислотой)

- пропитывание разогретым парафином (t = 57⁰С)

- пропитывание раствором целлоидина

Материал дегидратировать (обезводить) и обезжирить в спиртах восходящей концентрации, затем пропитать веществом, в котором растворяется парафин (ксилол, толуол, хлороформ и др.), пропустить через смесь органического растворителя (парафин + хлороформ 1: 1), уплотнить парафином.

4. Приготовление срезов на микротоме (толщина срезов 5-8 мкм).

5. Окраска срезов

Красители:

а) основные: окрашивают преимущественно ядра клеток (например, гематоксилин)

Структуры, окрашивающиеся основными красителями, называются базофильными.

б) кислые: окрашивают преимущественно цитоплазму (например, эозин)

Структуры, окрашивающиеся кислыми красителями, называются оксифильными или ацидофильными.

в) нейтральные или специальные (например, орсеин окрашивает эластические волокна, судан и осмиевая кислота – жиры, азотнокислое серебро – нервная ткань)

Депарафинировать срез органическим растворителем (ксилол), провести через спирты нисходящей концентрации (наводнить), окрасить красителями, провести через спирты восходящей концентрации (обезводить), просветлить срез в органическом растворителе (ксилол) и заключить в бальзам (смола пихты или канадского кедра), накрыть покровным стеклом.

ПРАВИЛА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

1. Установить микроскоп в «Рабочее положение»: объектив малого увеличения располагается на расстоянии примерно 1 см от поверхности предметного столика, перпендикулярно к нему.

2. Настроить освещение, пользуясь вогнутой стороной зеркала (плоскую сторону используют при ярком освещении) или включить встроенный источник освещения.

3. Поместить гистологический препарат на предметный столик и, пользуясь макровинтом, добиться четкого изображения. Перемещая препарат по предметному столику руками, рассмотреть все имеющиеся структуры.

4. При необходимости перейти на большое увеличение, нужно повернуть револьвер с объективами до щелчка и расположить объектив большого увеличения перпендикулярно к поверхности предметного столика. С помощью макровинта добиться появления изображения, а затем, воспользовавшись микровинтом, получить максимально четкое изображение. Рассмотреть имеющиеся структуры.

5. Закончить микроскопирование на малом увеличении, повернув револьвер с объективами до щелчка и установив объектив малого увеличения перпендикулярно к поверхности предметного столика.

6. Снять препарат с предметного столика, поместить его в коробку для гистологических препаратов.

7. Отключить встроенный источник освещения.