Для микробиологического исследования

Вид исследуемого материала зависит от цели исследования. При микробиологической диагностике клинический материал забирается из организма больного и/или носителя, при проведении эпидемиологического анализа - дополнительно исследуются пробы из объектов внешней среды (воды, воздуха, почвы, продуктов питания, смывы с предметов, инвентаря).

Для качественного проведения лабораторной диагностики важное значение имеет правильное взятие материала, правильное приготовление мазков и производство посева. Посев от каждого больного должен сопровождаться одновременно приготовлением двух мазков из того же очага, откуда сделан посев. Качество окраски мазков в значительной степени зависит и от их приготовления: материал в мазках должен быть расположен равномерным, тонким слоем, но в то же время содержать достаточно материала для исследования.

Выделения, жидкости и ткани организма (гной, мокроту, кровь, испражнения, рвотные массы, мочу, содержимое полостей зева и носа, промывные воды бронхов и желудка, ликвор, выделения из половых органов, трупный материал), содержащие наибольшее количество возбудителя. В каждом случае учитывают особенности предполагаемой инфекции, место максимальной локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду. Материал для исследования берут, соблюдая правила асептики. Для повышения качества лабораторной диагностики необходимым условием является взятие материала до начала антимикробной терапии или после 1–2 суточного перерыва в ней. Игнорирование этого обстоятельства может обусловить отрицательные результаты исследования.

Гной, серозно-гнойный экссудат (внеклеточную жидкость, накапливающуюся в тканях или серозных полостях), некротические массы берут из закрытых очагов пункцией шприцем, из открытых – пипеткой, шприцем, сухим тампоном, ложечкой Фолькмана, желательно из глубины патологического очага, после очистки от поверхностных масс. Гной лучше брать в пробирку с МПБ, можно просто в стерильную пробирку, в количестве 1 мл (при подозрении на анаэробную инфекцию желательно взять 8–15 мл). Из гноя сразу же делается мазок и посев во избежание лизиса бактерий.

Слизь из зева и носа исследуют при подозрении на дифтерию, менингококковую инфекцию, ангину, коклюш или другие респираторные заболевания. Материал берут стерильным тампоном.

Мазок из зева берут натощак или не ранее, чем через 2 часа после полоскания, питья или еды под визуальным контролем с использованием шпателя. Корень языка придавливают книзу и кпереди шпателем, держа его левой рукой, а правой рукой осторожно вводят в ротовую полость тампон и снимают налёт, не касаясь тампоном слизистых оболочек рта, языка, зубов. Лучше всего снять налёт или слизь на границе поражённого участка, где возбудителей больше и жизнеспособность их выше.

Перед взятием слизи из носа необходимо предложить больному высморкаться или очистить нос сухим ватным фитилем и удалить корки. Тампон вводят в каждую ноздрю, плотно прикасаясь всеми сторонами его к стенкам и перегородке носа. Полученный материал с тампона немедленно высевают на плотные питательные среды, а также наносят на предметное стекло, подсушивают и направляют в лабораторию.

Мокроту забирают на раннем этапе болезни, утром, натощак. Если мокроты выделяется мало, секрецию её можно усилить ингаляцией тёплого гипертонического или щелочного раствора, назначением бронхолитиков. Для снижения контаминации мокроты микрофлорой глотки и полости рта их многократно прополаскивают стерильной водой или физраствором. После этого больной откашливает мокроту в стерильную банку и сразу же закрывает её стерильной крышкой.

При поступлении на исследование мокроты особое внимание следует обратить на оценку качества доставленного образца. Критериями пригодности мокроты для бактериологического исследования является наличие более 25 сегментоядерных лейкоцитов и не более 10 эпителиальных клеток в поле зрения при просмотре, как минимум, 20 полей зрения мазка, окрашенного по Граму.

Промывные воды бронхов (бронхо-альвеолярный лаваж) забирают (при отсутствии мокроты или параллельно с ней) специально или в сочетании с лечебными процедурами. Больной тщательно ополаскивает глотку и полость рта стерильной водой или физраствором. Под контролем гортанного зеркала в дыхательные пути вводят 4 мл физраствора. Откашливаемое содержимое собирают в стерильные широкогорлые банки.

Кровь исследуют при отсутствии или неясности локальных очагов, исследование лучше проводить в начале болезни или в разгаре. При транзиторной бактериемии выявить возбудителя в крови с помощью бакпосева иногда не удаётся. Для повышения выявляемости возбудителя кровь следует брать во время озноба или на высоте лихорадки. Следует помнить, что озноб и лихорадка – наиболее частые явления, побуждающие к выделению гемокультуры, обычно запаздывают на 30–90 мин по отношению к эпизоду бактериемии, поэтому исследование должно проводиться неоднократно.

Чтобы избежать влияния бактерицидных свойств крови, её необходимо разводить большим количеством среды, примерно в соотношении 1: 10. Обычно берут 10 мл крови и засевают в 90 мл жидкой среды (сахарный, сывороточный или желчный бульон). Среда выбирается в зависимости от биологических особенностей возбудителя предполагаемой инфекции. Переливать кровь из шприца во флакон с питательной средой надо над пламенем спиртовки, предварительно сняв иглу. Посев отправляют в лабораторию, вечером и ночью его помещают в термостат. При отсутствии питательной среды кровь берут в стерильную пробирку с соблюдением тех же правил.

Сыворотка или плазма крови для серологического исследования берется натощак. Накануне взятия крови необходимо исключить физические нагрузки, приём алкоголя, жирной пищи и психологические стрессы. За час до взятия крови исключается курение. Во время взятия обследуемый должен

находиться в положении сидя или лёжа.

Для серологического исследования достаточно 1 мл сыворотки (плазмы) или 2 мл крови.

Кровь берут в чистую, сухую, пластмассовую или стеклянную пробирку. При необходимости транспортировки отделяют сыворотку или плазму, которые тотчас замораживают. При постановке серологических реакций возможны повторные замораживания и оттаивания (дефростации) сывороток до 3 раз при хранении их при -20⁰С. После размораживания сыворотку или плазму следует тщательно перемешать.

При работе с кровью следует строго соблюдать рекомендации по предотвращению заражения ВИЧ и парентеральными вирусными гепатитами!!!

Ликвор (8–10 мл) берут при спинно-мозговой пункции в две пробирки: для биохимического анализа и для бактериологического исследования при подозрении на менингит, нейросифилис.

Рвотные массы собирают в стерильные банки с притёртыми крышками и нейтрализуют 10% Na₂CO₃.

Промывные воды желудка (20–50 мл) собираются в стерильную ёмкость после промывания желудка стерильным физраствором без добавления антисептиков (натрия гидрокарбоната, калия перманганата и др.).

Испражнения исследуют при подозрении на кишечные инфекции (брюшной тиф, паратифы А и В, дизентерию, сальмонеллёзы, эшерихиозы и др.). Испражнения (2–3 г) берут стерильным деревянным шпателем или стеклянной палочкой из судна, горшка или непосредственно из прямой кишки с помощью ватных тампонов, металлических петель или через трубку ректоскопа. В судне или горшке не должно оставаться следов дезинфектанта, для чего их необходимо тщательно промыть горячей водой. Нужно стремиться взять слизь, гной, фибринные плёнки и избегать примесей крови в связи с её бактерицидным действием. Взятие материала из rectum не зависит от числа дефекаций и может быть проведено в любой момент. Больного просят лечь на бок с приведёнными к животу бёдрами и ладонями развести ягодицы. Петля или тампон осторожным движением вводится в задний проход на глубину 5–6 см и также осторожно вынимается. Лучше всего сразу же сделать посев материала на питательную среду. Если это невозможно, материал с петли или тампона смывают в пробирку со стерильным физраствором и отправляют в лабораторию.

Желчь (10–20 мл) забирают во время дуоденального зондирования. В отдельные пробирки собирают все три порции желчи (А, В и С). Конец зонда предварительно обрабатывают спиртом, затем после выделения 1–2 мл желчи (для исследования не используется) наполняют пробирки непосредственно через зонд или с помощью стерильного шприца. При наличии кислой реакции (примеси желудочного сока), хлопьев, белесоватого оттенка жидкости материал считается непригодным.

Мочу (20–30 мл) собирают в стерильную, плотно закрывающуюся посуду при помощи стерильного катетера после предварительного обмывания половых органов с мылом и ополаскивания их стерильным физраствором.

У мужчин допустим сбор мочи при естественном мочеиспускании после туалета наружных половых органов. Для посева используется вторая порция мочи. Мочу, взятую при естественном мочеиспускании, засевают только на элективные среды.