Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Ориентировочная РА для идентификации микроба
|
|
Реакция служит для предварительного определения вида микроба. На предметное стекло наносят каплю узкоспецифичной адсорбированной сыворотки (т.е. сыворотку, содержащую только специфические антитела). Сыворотку наносят в разведении 1: 10 и рядом - каплю физиологического раствора (контроль). Исследуемую культуру микроба петлей вносят в обе капли и размешивают. Через 2-4 мин учитывают результат. При положительной реакции (соответствие исследуемой культуры диагностической сыворотке) наблюдается скучивание бактерий в виде хлопьев на фоне прозрачной жидкости. В контроле - равномерная муть. Реакцию ставят перед постановкой развернутой РА для идентификации микроба.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
РНГА является своеобразной модификацией РА. Сущность реакции состоит в том, что молекулы антигена адсорбируются на поверхности эритроцитов. Такие " нагруженные" антигенами эритроциты приобретают способность агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичной для данного антигена. Эритроциты склеиваются и выпадают в осадок, образуя на дне пробирки гемагглютинат. В последнее время РНГА получила широкое распространение благодаря высокой чувствительности, экспрессивности и простоте постановки.
В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных двукратных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят - 0, 5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0, 5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0, 1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 ч. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном - оседают в виде пуговки или колечка (табл. 9).
| Таблица 9 Постановка реакции непрямой гемагглютинации | |||||||
| Ингредиеенты | Номера лунок панели | Контроли | |||||
| 1-я | 2-я | 3-я | 4-я | 5-я | 1-й | 2-й | |
| Изотонический раствор натрия хлорида, мл | 0, 5 | 0, 5 | 0, 5 | 0, 5 | 0, 5 | - | 0, 5 |
| Исследуемая сыворотка в разведении 1: 25, мл | 0, 5® | 0, 5® | 0, 5® | 0, 5® | 0, 5 | Заведомо положительная сыворотка 0, 5 | - |
| Полученное разведение сыворотки | 1: 50 | 1: 100 | 1: 200 | 1: 400 | 1: 800 | ||
| Эритроцитарный диагностикум, мл | 0, 1 | 0, 1 | 0, 1 | 0, 1 | 0, 1 | 0, 1 | 0, 1 |
| Инкубация при 37°С в течение 2 ч в термостате. | |||||||
| Результаты | +++ | +++ | - | - | - | +++ |
Титр сыворотки 1: 100
На эритроцитах можно адсорбировать не только антигены, но и антитела. В данном случае РНГА можно применять для индикации патогенных микробов во внешней среде. Для этого IgG сыворотки (фиксируют на поверхности бараньих эритроцитов. Разрешающая способность экспресс-индикации антигенов составляет несколько тысяч микробных тел в 1 мл.
Реакция латекс-агглютинации (РЛА)
Помимо эритроцитов, в качестве носителей антигенов или антител можно использовать частицы полистирольного латекса, которые служат носителями антигена и при образовании иммунных агрегатов играют роль " мостиков" между молекулами антител. Латексные частицы являются как бы искусственными эритроцитами, но более устойчивы к внешним воздействиям. Каплю суспензии такого латекса прибавляют к капле исследуемой сыворотки, тщательно перемешивают. При положительной реакции образуются мелкие, но хорошо видимые невооруженным глазом агглютинаты.
Реакция коагглютинации (РКА)
Белок А некоторых штаммов золотистого стафилококка способен неспецифически адсорбировать на своей поверхности Fc-фрагменты иммуноглобулина G (за исключением IgG3). Получившаяся молекула способна агглютинировать гомологичные антигены.
Помимо частиц латекса, белка А в реакциях " антиген - антитело'' могут быть использованы и другие инертные носители (бентонит, каолин, активированный уголь и др.).