Студопедия

Главная страница Случайная страница

КАТЕГОРИИ:

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника






Ориентировочная РА для идентификации микроба






Реакция служит для предварительного определения вида микроба. На предметное стекло наносят каплю узкоспецифичной адсорбированной сыворотки (т.е. сыворотку, содержащую только специфические антитела). Сыворотку наносят в разведении 1: 10 и рядом - каплю физиологического раствора (контроль). Исследуемую культуру микроба петлей вносят в обе капли и размешивают. Через 2-4 мин учитывают результат. При положительной реакции (соответствие исследуемой культуры диагностической сыворотке) наблюдается скучивание бактерий в виде хлопьев на фоне прозрачной жидкости. В контроле - равномерная муть. Реакцию ставят перед постановкой развернутой РА для идентификации микроба.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

РНГА является своеобразной модификацией РА. Сущность реакции состоит в том, что молекулы антигена адсорбируются на поверхности эритроцитов. Такие " нагруженные" антигенами эритроциты приобретают способность агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичной для данного антигена. Эритроциты склеиваются и выпадают в осадок, образуя на дне пробирки гемагглютинат. В последнее время РНГА получила широкое распространение благодаря высокой чувствительности, экспрессивности и простоте постановки.

В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных двукратных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят - 0, 5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0, 5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0, 1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 ч. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном - оседают в виде пуговки или колечка (табл. 9).

 

Таблица 9 Постановка реакции непрямой гемагглютинации
Ингредиеенты Номера лунок панели Контроли
1-я 2-я 3-я 4-я 5-я 1-й 2-й
Изотонический раствор натрия хлорида, мл 0, 5 0, 5 0, 5 0, 5 0, 5 - 0, 5
Исследуемая сыворотка в разведении 1: 25, мл 0, 5® 0, 5® 0, 5® 0, 5® 0, 5­ Заведомо положительная сыворотка 0, 5 -
Полученное разведение сыворотки 1: 50 1: 100 1: 200 1: 400 1: 800    
Эритроцитарный диагностикум, мл 0, 1 0, 1 0, 1 0, 1 0, 1 0, 1 0, 1
Инкубация при 37°С в течение 2 ч в термостате.
Результаты +++ +++ - - - +++  

Титр сыворотки 1: 100

На эритроцитах можно адсорбировать не только антигены, но и антитела. В данном случае РНГА можно применять для индикации патогенных микробов во внешней среде. Для этого IgG сыворотки (фиксируют на поверхности бараньих эритроцитов. Разрешающая способность экспресс-индикации антигенов составляет несколько тысяч микробных тел в 1 мл.

Реакция латекс-агглютинации (РЛА)

Помимо эритроцитов, в качестве носителей антигенов или антител можно использовать частицы полистирольного латекса, которые служат носителями антигена и при образовании иммунных агрегатов играют роль " мостиков" между молекулами антител. Латексные частицы являются как бы искусственными эритроцитами, но более устойчивы к внешним воздействиям. Каплю суспензии такого латекса прибавляют к капле исследуемой сыворотки, тщательно перемешивают. При положительной реакции образуются мелкие, но хорошо видимые невооруженным глазом агглютинаты.

Реакция коагглютинации (РКА)

Белок А некоторых штаммов золотистого стафилококка способен неспецифически адсорбировать на своей поверхности Fc-фрагменты иммуноглобулина G (за исключением IgG3). Получившаяся молекула способна агглютинировать гомологичные антигены.

Помимо частиц латекса, белка А в реакциях " антиген - антитело'' могут быть использованы и другие инертные носители (бентонит, каолин, активированный уголь и др.).


Поделиться с друзьями:

mylektsii.su - Мои Лекции - 2015-2024 год. (0.006 сек.)Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав Пожаловаться на материал