Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Ход определения. Химический контроль ценности питательных сред
|
|
Химический контроль ценности питательных сред
Применение белковых гидролизатов в качестве полноценных источников органогенов для бактерий обусловлено наличием растворимых и т. о. доступных для усвоения бактериальными клетками продуктов расщепления молекул белка: пептонов, пептидов (высоко-, средне-, низкомолекулярных), аминокислот.
Наиболее информативными и удобными для определения являются 2 показателя питательной ценности азотсодержащих (белковых) основ:
1. содержание аминного азота (NH2) в мг % (в %) – показатель позволяет судить о глубине расщепления белковых молекул и с высокой степенью точности дает представление о питательной ценности для бактерий, т. к. последние усваивают азот только из концевой аминогруппы (т. н. «аминный азот»)
2. содержание свободного триптофана в мг % - показатель определяет абсолютное количество одной из АМК, что дает возможность судить о глубине расщепления белка.
Содержание общего и аминного азота в питательных основах
| Вид основы | Количество (мг%) | Степень расщепления (%) | |
| Общего азота | Аминного азота | ||
| Гидролизат Хоттингера (Хартли) | 1100-1200 | 650-700 | 55-60 |
| Триптический гидролизат казеина | 800-1100 | 500-600 | 55-65 |
| Кислотный гидролизат казеина (казаминовые кислоты) | 800-900 | 750-800 | 80-90 |
| Пептон Мартена | 450-550 | 130-150 | 20-25 |
| Дрожжевой аутолизат | 250-300 | 75-150 | 45-55 |
Определение аминного азота
Метод: «Формольное титрование по упрощенному методу Зеренсена-Гаврилова»
Принцип метода:
Белки и продукты их расщепления являются амфотерными электролитами (т. е. имеют в составе молекулы разнозаряженные группы, взаимонейтрализующиеся, в результате чего молекула в целом реагирует нейтрально)
NH2 ─ CH ─ COOH
│
R
Это схематическое изображение белка или продукта его расщепления (пептона, полипептида, альбумозы, АМК)
NH3+ ─ CH ─ COO─
│
R
Так перемещается ион водорода в нейтральной среде (рh=7, 0), в результате образуются заряженные группы
NH2 → NH3+ ; COOH → COO─
Аминогруппа, щелочная, карбоксильная группа, кислая,
заряжена положительно заряжена отрицательно
Амфотерные электролиты нет возможности определять количественно с помощью титрования, т. к. они одновременно имеют свойства и кислоты, и щелочи, содержат положительно и отрицательно заряженные участки. Титрационный метод станет доступным, если превратить амфотерный электролит в кислоту или щелочь. В данной методике это достигается с помощью формальдегида. При взаимодействии с формальдегидом аминогруппа белка (аминокислоты, полипептида и т. д.) связывается с карбонильной группой формальдегида. Образуются т. н. «метиленовые производные формальдегида», имеющие кислый характер (щелочная аминогруппа нейтрализована). Т. о. обеспечивается возможность оттитровать щелочью кислые карбоксильные группы, количество которых равно количеству аминогрупп, связанных с формальдегидом. Количество щелочи, ушедшей на титрование, эквивалентно количеству аминного азота (азота аминогрупп).
Принцип метода кратко: «Блокирование формальдегидом при рh 7, 0 концевых аминогрупп и титрование щелочью равного количества оставшихся свободными карбоксильныхгрупп»
Проведение исследования колориметрическим способом
(с применением индикаторов)
Реактивы
Раствор индикатора бромтимолового синего: 100 мг сухого порошка растирают в ступке с 3, 2 мл 0, 05Н раствора NaOH, переносят в мерную колбу емкостью 250, 0 мл и добавляют дистиллированную воду до метки.
Хранить укупоренным в темном стекле. Срок годности не ограничен.
Формольная смесь: к 50, 0 мл коммерческого формалина прибавляют 1, 0 мл 1 % водно-спиртового раствора фенол-фталеина (1 г фенол-фталеина + 1, 0-5, 0 мл спирта + дист. вода до 100, 0 мл). Слабо розовый цвет свидетельствует о ph 7, 0. При необходимости подщелачивают 0, 1Н или 10 % NaOH, добавляя щелочь до достижения слабо розового окрашивания.
Хранить укупоренным. Срок годности не ограничен.
Ход определения.
|