Определение группы крови системы АВ0.

Агглютинины и агглютиногены крови.

Агглютиногены крови, по структуре полисахариды, локализуются в стране форменных элементов. Они являются термостабильными.

Агглютиноген А имеет большое количество разновидностей(А₁, А₂, А₃, А₄, Ах и др. Встречаются у людей с разной частотой.

Агглютинины представляют собой гамма-глобулины плазмы крови.

Группа крови- это различное сочетание взаимосвязанных антигенных свойств эритроцитов (агглютиногенов) и антител (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Агглютиногены. Группа крови. Агглютинины.

О I

А II

В III

АВ IV

Групповые особенности крови человека являются его постоянным признаком. Они возникают во внутриутробном периоде развития, сохраняются в течение всей жизни и передаются по наследству.

3. Резус-фактор. При гемотрансфузии надо учитывать резус-принадлежность больного и донора. При переливании крови, несовместимой по резус-фактору возникают осложнения.

Резус-фактор –это агглютиноген имеющийся у 85% людей.

Определение резус-фактора делают в лабораториях службы крови следующими методами:

- методом конагглютинации с применением желатина;

- при помощи универсального реагента антирезус в пробирках с 33% раствором полиглюкина;

- с помощью сывороток, содержащих полные резус-антитела;

- использование непрямого антиглобулинового теста.

Экспресс-метод определения резус-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке.

Методика проведения. Исследование проводят в центрифугированных пробирках объемом не менее 10мл. На дно пробирки вносят каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ (IV), каплю 33% раствора полиглюкина. Затем добавить 1 каплю исследуемой крови. Круговыми движениями пробирки, содержимое размазывают по стенкам. За агглютинацией следует наблюдать не менее 3минут. Затем, для исключения ложной агрегации эритроцитов, в пробирку добавляют 2-3мл физиологического раствора и перемешивают путем 1-2 кратного перевертывания пробирки.

Оценка результатов. Наличие агглютинации указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.

Определение группы крови системы АВ0.

Используют стандартные сыворотки I II III IV группы крови 2-х серий.

Надеть передник, маску, очки, перчатки, нарукавники.

Методика проведения.

1. На чистую, сухую, обезжиренную тарелку капают по одной капле стандартных сывороток 2-х серий (6 капель). Каждая сыворотка капается отдельной пипеткой. Пипетки маркируются и находятся во флаконах с физ.раствором.

2. Рядом с каплей стандартной сыворотки палочкой или отдельной пипеткой наносится капля крови (соотношение сыворотка-кровь 10: 1).

3. Капли тщательно перемешиваются отдельными палочками.

4. Покачивают тарелку и наблюдают результаты в течение 5минут. По истечению 3минут для исключения ложной агглютинации вносят по капле физ.раствора и продолжают наблюдение.

Определение результатов.

- сыворотки всех групп не дали реакции-исследуемая кровь относится к группе 0(I)

- сыворотки групп 0 (I) и В (III) дали положительную реакцию, сыворотка групп А (II) агглютинацию эритроцитов не вызывала – исследуемая кровь относится к группе А (II)

- сыворотки групп О(I) и А (II) дали положительную реакцию, сыворотка группы В (III) не дала реакцию – кровь отосится к группе

- В (III)

- сыворотки всех групп дали положительную реакцию – кровь можно отнести к группе АВ (IV). нотолько в том случае, если при проведении контроля исследуемых эритроцитов со стандартной сывороткой группы АВ (IV) реакции агглютинации не будет. Положительная агглютинация с сывороткой АВ (IV)означает наличие неспецифической агглютинации.

Определение группы крови системы АВО моноклональными антителами.

Это современный метод определения группы крови АВО моноклональными реагентами(цоликлонами анти-А и анти-В).

Методика определения: Надеть передник, маску, перчатки, нарукавники

1. на тарелку в две ячейки капают по 1 каплецоликлоны анти-А и анти-В

2. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь в соотношении сыворотка –кровь 10: 1.

3. Смешивают реагенты отдельными стеклянными палочками.

4. Наблюдают за результатом 2, 5 минут.

Определение результатов:

-агглютинации нет ни с цоликлоном анти-А, ни с цоликлоном анти-В-

кровь принадлежит к группе О(I)

- агглютинация наблюдается только с цоликлоном анти-А- кровь принадлежит к группе А (II)

- агглютинация наблюдается только с цоликлоном анти-В – кровь принадлежит к группе В (III)

- агглютинация наблюдается как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В – кровь принадлежит к группе АВ (IV)

5. Пробы перед переливание крови.

Надеть маску, очки, передник, перчатки.

Из вены больного берут 5мл крови, центрифугируют и получают сыворотку.

А) Проба на индивидуальную совместимость: наносят 2-3 капли сыворотки на планшетку и добавляют каплю крови донора (10: 1). Кровь смешивают с сывороткой сухой стеклянной палочкой, планшетку слегка покачивают и наблюдают за результатом.

Результат: отсутствие агглютинации-кровь совместима, есть агглютинация – кровь не совместима.

Б) Проба на резус-совместимость:

- написать на чистой пробирке фамилию, имя, отчество рецепиента и его группу крови, а так же номер флакона донора.

- Внести на дно пробирки пастеровской пипеткой 2 капли сыворотки рецепиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% р-ра полиглюкина.

- Перемешайте полученную в пробирке смесь и, наклоняя пробирку до горизонтального положения, поворачивайте ее таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки в нижней ее трети.

- По истечении 5 минут долейте в пробирку2-3 мл изотонического раствора натрия хлорида и перемешайте содержимое путем 2-3 кратного переворачивания пробирки.

Результат:

1. Наличие агглютинации эритроцитов – кровь донора несовместима с кровью больного.

2. Нет признаков агглютинации – кровь совместима.

В) Биологическая проба.

Техника проведения:

Струйно переливать 10-15мл крови (эритроцитарной массы, плазмы), затем в течение 3-х минут наблюдать за больным. При отсутствии клинических проявлений реакции или осложнений (учащения пульса, дыхания, появления одышки, затрудненного дыхания и гиперемии лица ит.д.) вводят вновь 10-15 мл крови (эритроцитарной массы, плазмы и т. д.) и в течение 3-х минут наблюдают за больным. Такую же процедуру повторяют и в 3-й раз. Отсутствие реакции у больного после 3-х кратной проверки, является основанием для продолжения трансфузии. 10-15 мл крови оставляют во флаконе и хранят 1сутки в холодильнике.

6.После переливания крови реципиент в течение 2-часов соблюдает постельный режим и наблюдается врачом. Ежечасно ему измеряют температуру тела, АД, фиксируют эти показания в истории болезни. Контролируется наличие мочевыделения и нормального цвета мочи. На следующий день после переливания обязательно производят общий анализ мочи и крови. Записывается в историю болезни показание к гемотрансфузии и оформляется протокол переливания, содержащий следующие сведения:

– Ф.И.О больного

- группа крови и резус-принадлежность больного

- паспортные данные флаконов крови или компонентов, фамилию и инициалы донора, группу и резус-принадлежность крови, номер флакона, дату заготовки.

- Результат контрольного определения группы крови больного

- Результаты контрольного определения группы каждого флакона крови и ее компонентов.

- Результаты проб на совместимость крови доноров и реципиента при комнатной температуре

- Метод и результаты проб на совместимость при температуре

- Результаты биологических проб

- Состояние больного во время и после трансфузии.