Окраска микроорганизмов по Граму.

В зависимости от химического состава и строения клеточной стенки прокариоты делятся на грамположительные и грамотрицательные бактерии. Такое деление связано со способностью бактерии окрашиваться по Граму. Эта окраска является важным диагностическим признаком, она коррелирует со многими другими свойствами бактерий.

Основные отличия в строении клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий схематически изображены на рисунке 3.

Рис.3: Схематическое изображение клеточной стенки грамположительных (А) и грамотрицательных (Б) бактерий: 1-цитоплазматическая мембрана, 2-пептидогликан, 3-переплазпатическое пространство, 4-наружная мембрана, 5-ДНК.

Сущность окраски по Граму заключается в том, что при обработке клеток прокариот сначала красителем генциановым фиолетовым, а затем йодом, образуется окрашенный комплекс, который при последующей обработке спиртом удерживается грамположительные, вымываются из клеток грамотрицательные бактерии, которые в результате обесцвечиваются. При последующей обработке фукцином они приобретают розово-красную окраску, а грамположительные имею сине-фиолетовую окраску.

Рис.4: Однослойная структура пептидогликана. Линиями обозначены гетерополимерные цепочки, образованные чередующимися остатками N-ацетилглюкозамина (Г) и N-ацетилмурамовой кислоты (М), соединенными между собой β -1, 4-гликозидными связями. Кружочками обозначены аминокислоты пептидного хвоста.

Приготовление препаратов бактерии, окрашенных по Граму.

1. Приготовление мазка.

2. Фиксация препарата.

3. Окрашивание препарата генциановым фиолетовым (1-2 мин).

4. Обработка раствором Люголя до почернения.

5. Обработка 96% этиловым спиртом (0, 5 – 1 мин).

6. Промывание препарата водой.

7. Окрашивание фуксином (1-2 мин).

8. Промывание препарата водой.

9. Высушивание водой.

10. Микроскопирование препарата с иммерсионной системой.

При правильном окрашивании грамположительные окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – красный.