Определение группы крови перекрестным способом

А. Определение группы крови перекрестным способом заключается в одновременном определении групповых агглютиногенов в эритроцитах испытуемой крови по цоликлонам и групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов.

Б. Для определения группы крови перекрестным способом кроме моноклональных антител анти-А, анти-В и анти-АВ используют стандартные эритроциты группы О(I), А(II) и В(III).

В. Кровь для смешивания берут из вены или места укола пальца в сухую чистую пробирку. Кровь центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для отделения сыворотки.

Г. Определение производят на белой пластинке, на верхнюю часть которой наносят обозначения слева направо: анти-А, анти-В. На верхнем крае надписывают фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.

Д. Под соответствующими обозначениями групп крови на пластинку наносят по одной большой капле (0, 1 мл) стандартных моноклональных антител.

Е. На правую часть пластинки под обозначениями О(I), А(II) и В(III) наносят по одной маленькой (0, 01 мл) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо: О(I), А(II) и В(III).

Ж. Из пробирки, содержащей кровь больного, пипеткой извлекают сыворотку и накапывают ее по одной большой (0, 1 мл) капле на подготовленные стандартные эритроциты. После этого той же пипеткой набирают со дна пробирки эритроциты испытуемой крови и наносят их по маленькой (0, 01 мл) капле рядом с каждой каплей подготовленных моноклональных антител.

З. Во всех каплях антитела и сыворотку тщательно перемешивают с эритроцитами, используя стеклянные палочки, пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят не менее пяти минут.

И. По мере наступления агглютинации со стандартными эритроцитами, но не ранее, чем через 3 минуты, в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле (0, 05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при покачивании пластинки до истечения пяти минут.

Учет реакции производится путем сопоставления результатов, полученных при помощи стандартных сывороток и эритроцитов.

Результаты реакций, полученных при помощи моноклональных антител и стандартных эритроцитов, должны совпадать, т. е. указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови. Эти результаты могут быть выражены в четырех различных комбинациях.

А. Исследуемая кровь не дала агглютинации с моноклональными антителами, что указывает на отсутствие в ней групповых агглютиногенов и принадлежность к группе О(I). При этом сыворотка исследуемой крови (нижний ряд) дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами группы О(I) и положительную – с эритроцитами групп А(II) и В(III). Это указывает на наличие в испытуемой крови агглютининов a и b, т. е. подтверждает ее принадлежность к группе О(I).

Б. При помощи моноклональных антител анти-А в исследуемой крови устанавливается наличие агглютиногена А. При этом сыворотка исследуемой крови не дает агглютинации со стандартными эритроцитами групп О(I) и А(II), т. е. она не содержит агглютинин a, но агглютинирует эритроциты группы В(III), т. е. в ее составе имеется агглютинин b, что указывает на принадлежность испытуемой крови к группе А(II) b.

В. При помощи моноклональных антител анти-В в исследуемой крови определяется наличие агглютиногена В. При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами групп О(I) и В(III), что подтверждает отсутствие агглютинина b, и положительную с эритроцитами группы А(II), что говорит о наличии агглютинина a и подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе В(III) a.

Г. При помощи моноклональных антител анти-А и анти-В в исследуемой крови устанавливается наличие агглютиногенов А и В. В этом случае в качестве контроля проводят исследование с цоликлоном анти-АВ. Если с ним также произошла агглютинация, то проводят пробу с физиологическим раствором хлористого натрия, отсутствие агглютинации с которым подтверждает специфичность реакции. При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами всех трех групп, что указывает на отсутствие агглютининов в исследуемой крови, т. е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе АВ(IV)о.