Основные биологические свойства стрептококков

Идентификацию S. рneumoniae производят по:

1) чувствительности к оптохину, для чего производят посев одной колонии α – гемолитического стрептококка, подозрительного на пневмококк, штрихом на сектор кровяного агара, помещают диск с оптохином(5мкг) на засеянную поверхность и инкубируют в течение 18-24 часов при температуре 35-37⁰ C в атмосфере 5-10% СО₂. Зона задержки роста > 14мм (диск диаметром 6мм) или > 16мм (диск диаметром 10мм) свидетельствует о наличие S.pneumoniae. Зона задержки роста < 14мм (< 16мм) требует подтверждения испытуемой культуры на принадлежность к S.pneumoniae в тесте с желчью. Крайне редко встречаются штаммы пневмококков, резистентные к оптохину, а рост других «зеленящих» стрептококков подавляется оптохином (с образованием узкой зоны задержки роста).

2) тесту с желчью, основанному на способности 10% желчи лизировать колонии S. pneumoniae на агаре или в бульоне. В две пробирки с 2-3мл сывороточного бульона с 10% раствором желчи и без нее добавляют 0, 5-1мл испытуемой бульонной культуры и выдерживают 1 час при 35-37⁰ С. Просветление жидкости в пробирке «тест» по сравнению с пробиркой «контроль» свидетельствует о принадлежности культуры к S.pneumoniae. Можно использовать диски, пропитанные 20% раствором желчи. Диски накладывают на выросшую культуру и инкубируют в термостате 1-2 часа. По окружности диска на расстоянии 1-2 мм пневмококки лизируются, а S. pyogenes остаются без изменений.

3) сероидентификации, основаной на выявлении пневмококковых полисахаридных антигенов с использованием поливалентной специфической пневмококковой сыворотки. Постановка теста проводится согласно инструкции, прилагаемой к тест-системам. Латекс – агглютинационный тест может использоваться для ускоренного выявления пневмококка непосредственно с чашки первичного посева.

4) Можно использовать реакцию Нейфельда (набухание капсулы) – увеличение капсулы пневмококков в присутствии иммунной сыворотки.На двух предметных стеклах делают мазки из чистой культуры пневмококка. На один мазок наслаивают диагностическую поливалентную сыворотку, на другой физиологический раствор, добавляют по одной капле раствора метиленового синего. Выдерживают при 35-37⁰ С от 10 минут до 1 часа. Микроскопируют и сравнивают опытный мазок с контрольным, где вместо сыворотки использован физиологический раствор.

Идентификацию стрептококков возможно осуществлять на коммерческих тест-системах с визуальным учетом или с использованием автоматических и полуавтоматических микробиологических анализаторов.

Домашнее задание: Уч. С.А. Павлович «Микробиология с микробиологическими исследованиями» с. 255 – 257. Повт. с.246 – 259; Уч. Ф.К. Черкес «Микробиология» с. 244-258, электронный вариант методической разработки лабораторно-практического занятия.