Лабораторная диагностика микотоксикозов, вызываемых грибами родов Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Stachybotrys, Dendrodochium

Цель занятий. Ознакомить студентов с характеристикой мико-токсинов, вызывающих микотоксикозы, грибами-продуцентами этих токсинов и методами исследований для постановки диагно­за на микотоксикозы.

Оборудование и материалы. Культуры грибов родов Aspergillus, PeniciUium, Fusarium, Stachybothrys и др. на агаре Чапека или дру­гих средах в чашках Петри (в больших пробирках), препароваль­ные иглы или микологические крючки, предметные и покровные стекла, микроскопы, таблицы и плакаты по данной теме.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Микотоксикозы. Болезни животных и человека; харак­теризуются отравлением, которое возникает при поедании кор­мов (пищи), содержащих токсические продукты жизнедеятель­ности микроскопических грибов-плесеней — микотоксины (от греч. mykes — гриб и toxinum — яд). Известно около 250 видов раз­личных микроскопических грибов, продуцирующих 100 токсических метаболитов. Природными субстратами грибов-проду­центов микотоксинов служат разнообразные сельскохозяйствен­ные культуры. К микотоксинам чувствительны почти все виды домашних, диких животных, птицы и рыбы. Наименование микотоксикоза происходит от названия токсина или гриба-проду­цента. При диагностике микотоксикоза наибольшее внимание уделяют обнаружению токсина, поскольку гриб-продуцент в ряде случаев к моменту исследования погибает и, кроме того, один и тот же микотоксин могут синтезировать различные виды грибов.

Лабораторная диагностика микотоксикозов основана на ре­зультатах токсико-биологических, органолептических, микологи­ческих и физико-химических исследований.

Материал для исследования. В лабораторию направляют пробы всех кормов, входивших в суточный рацион животного в течение одного месяца до проявления болезни, а также остатки кормов из кормушек, содержимое желудочно-кишечного тракта павших животных и др. Отбор средних проб корма проводят ветеринар­ные и зооинженерные специалисты с представителями предпри­ятий. Отобранную среднюю пробу делят на две части, упаковы­вают в чистые сухие стеклянные банки объемом 2...3 л, гермети­чески закрывают и пломбируют. Одну часть отправляют в лабо­раторию, другую хранят в хозяйстве в течение одного месяца в условиях, предотвращающих порчу или вторичное загрязнение. В документе указывают цель исследования, вид кормового сред­ства, назначение, массу всей партии, место отбора пробы, основ­ные клинические признаки у больных животных. Прилагают ко­пию акта вскрытия трупов (при гибели животных), копию экс­пертиз ветеринарной лаборатории об исключении инфекционных болезней и отравлений животных химическими или растительными ядами (если такие исследования были проделаны лабораторией).

Органолептическое исследование. Определяют внешний вид, цвет, запах корма, выявляют признаки, отличающие дефектный корм от доброкачественного (изменение цвета; затхлый, плесне­велый или гнилостный запах; наличие на поверхности корма ми­целия гриба и др.). О санитарном качестве зерна можно косвенно судить по цвету и состоянию зерновых оболочек.

Токсикологическое исследование. Проводят на различных био­логических моделях: кроликах, аквариумных рыбках гуппи поро­ды Винер, белых мышах или сельскохозяйственных животных.

На кроликах ставят кожную пробу. К 50 г измельченного кор­ма добавляют 150 мл диэтилового эфира (эфир для наркоза) или ацетона. Смесь встряхивают при комнатной температуре с помо­щью шуттель-аппарата 3 ч. Экстракт фильтруют и выпаривают до полного исчезновения запаха. Налет, оставшийся на стенках чашки, смывают небольшим количеством эфира и используют для биопробы, которую ставят на кроликах массой 2...2, 5 кг. Предварительно у кролика в области бедра, лопатки или бока выстригают участок кожи 6 см². Пигментированная или с при­знаками шелушения кожа непригодна для исследования.

На одном кролике можно ставить не более четырех проб. На выстриженный участок кожи кролика наносят стеклянной ло­паткой половину экстракта и легко втирают его. При восковидной консистенции экстракта его предварительно подогревают. Часть участка оставляют свободной от экстракта как конт­рольную. Через 24 ч наносят оставшийся экстракт. Чтобы пре­дупредить его слизывание, кролику надевают воротник (не менее чем на три дня). Учет проводят на следующий день после повтор­ного нанесения экстракта и продолжают вести наблюдение в те­чение 3...5 дней в зависимости от реакции, после чего дают окон­чательную оценку: а) корм нетоксичный — отсутствуют воспали­тельная реакция и изменения на коже; б) корм слаботоксич­ный — шелушение кожи, отечность, болезненность, незначи­тельное утолщение кожи с образованием отдельных корочек; в) корм токсичный — резкая гиперемия, отек, утолщение кожи, болезненность, появление язвы и струпа.

В качестве дополнительного теста определяют токсичность кормов на аквариумных рыбках. Методика основана на извлече­нии микотоксинов из фуражного зерна, продуктов его перера­ботки и комбикормов, экстракции хлороформом и исследовании на рыбках гуппи. В раствор экстракта помещают 5 рыбок незави­симо от пола и возраста. Ведут наблюдение в течение 24...30 ч. Оценка степени токсичности корма: а) нетоксичный — при гибе­ли не более одной рыбки в течение 24 ч; б) слаботоксичный — при гибели 2...4 рыбок; в) токсичный — при гибели всех 5 гуппи за тот же отрезок времени.

Методика определения токсичности корма на белых мышах основана на извлечении токсических веществ из жмыхов, кормо­вых дрожжей ацетоном и введении концентрированного экст­ракта однократно в желудок мышам массой 20...25 г. Животных наблюдают в течение 3 сут, не ограничивая их в корме и питье. Оценка результатов корма: а) нетоксичный — мыши живы, на вскрытии у убитых мышей патологоанатомических изменений нет; б) слаботоксичный — мыши живы, при вскрытии у убитых обнаруживают геморрагическое воспаление желудочно-кишеч­ного тракта, чаще очаговое; в) токсичный — гибнут все мыши (или одна), на вскрытии павших или убитых устанавливают ге­моррагическое воспаление желудочно-кишечного тракта, часто дегенерацию тканей печени, почек или кровоизлияние в парен­химатозных органах. Если токсичность корма не выявлена всеми перечисленными методами, подозрительные корма скармливают лабораторным животным (цыплятам, утятам, голубям, белым мышам, морским свинкам, кроликам) или животным тех видов, которые болели в хозяйстве.

Микологический анализ. Включает в себя выделение из кормов и идентификацию грибов-продуцентов микотоксинов. С этой целью из кормов делают посевы в чашки Петри с агаром Чапека, сусло-агаром или в жидкую среду Билай. Грубые корма высевают во влажные камеры со средой Ван—Итерсона. Перед посевом агар расплавляют в водяной бане, после охлаждения до 45...50 º С в него для подавления роста сопутствующей микрофлоры добав­ляют антибиотики (пенициллина 5*10⁴ ЕД/л и стрептомицина 10⁵ ЕД/л среды). Для приготовления влажной камеры со средой Ван—Итерсона на дно чашки Петри кладут слой ваты с кружком фильтровальной бумаги по диаметру чашки и стерилизуют в су­шильном шкафу. Перед посевом на фильтровальную бумагу на­ливают среду Ван—Итерсона до увлажнения бумаги, не создавая избытка влаги (около 5 мл).

Для выделения грибов из зерен последние раскладывают по поверхности фильтровальной бумаги по 10 штук, чтобы они не соприкасались одно с другим. Посевы культивируют при 22...25 °С 3...10 дней до образования характерного спороношения, после чего проводят макро- и микроскопическое исследова­ние культур грибов с целью идентификации.

При макроскопическом исследовании учитывают различные признаки выросших колоний: цвет, форму, консистенцию, ха­рактер роста, образование склероциев, выделение пигмента, степень развития воздушного мицелия. Затем готовят препараты «раздавленная капля». Микологическим крючком или препаро­вальной иглой берут частицы мицелия (желательно со спороношением из молодых культур с периферии, от старых — из центра колоний) и вносят их в фиксирующую жидкость. Другой иглой материал расправляют на предметном стекле и покрывают по­кровным стеклом, слегка прижимая его. Микроскопируют с по­мощью малого объектива (х8, х40) или в иммерсионной системе при слегка спущенном конденсоре. Токсичность культур опреде­ляют методом кожной пробы на кроликах или другим способом.

Физико-химический анализ. Его цель — качественное и количе­ственное определение микотоксинов в кормах и других материа­лах с помощью различных методов — люминесцентного анализа, хроматографии и т.д..

При оценке результатов анализов необходимо учитывать данные всех исследований, а в случае постановки диагноза — клинические признаки и характер патологоанатомических изменений.

Афлатоксикозы. Заболевания, возникающие при поедании животными кормов, содержащих афлатоксины. Все афлатоксины (В_1, В₂, С_1, С₂ и их производные M_15, М₂ и др.) отнесены к фурокумаринам. Афлатоксин М₁ — продукт метаболизма афлатоксина В₁ выделяющийся с молоком. В естественных условиях афлаток­сины встречаются в растительных продуктах, кроме того, неко­торые токсигенные штаммы грибов (Aspergillus flavus и A. parasiticus и др.) вырабатывают их при определенной темпера­туре и влажности.

Природные субстраты грибов-продуцентов: арахис, кукуруза и другие различные зерновые и бобовые культуры, семена хлопчат­ника и др. (рис. 136).

Афлатоксины оказывают гепатотоксическое и гепатоканцерогенное, мутагенное, тератогенное и иммунодепрессивное действие (рис. 137).

Наиболее чувствительны к афлатоксинам поросята в возрасте до 3 мес, супоросные свиноматки, телята, откормочные свиньи, взрослый крупный рогатый скот и овцы, лошади, птицы (утки, индейки, гуси, фазаны, куры). Де­фицит в кормах витаминов, белка или нарушение у животных обмена веществ повышают чувствительность животных к афлатоксинам.

Лабораторная диагностика афлатоксикозов включает в себя выделение афлатоксина и определение его количества методом тонкослойной хроматографии согласно действующей инструк­ции. Подтверждением служит обнаружение афлатоксина в орга­нах и тканях животного. Если в пробах не выделены афлатокси­ны, диагноз ставят по результатам выделения гриба-продуцента из фекалий или содержимого желудочно-кишечного тракта, ос­татков корма или пыли, взятых из силоса или бункера, где хра­нился корм, и воспроизведения в эксперименте культурой этого гриба заболевания (биопроба), аналогичного по всем признакам, которые наблюдали в хозяйстве.

Материал для исследования. В лабораторию отправляют корма, молоко, фекалии; от павших животных — печень, почки, мышеч­ную ткань.

Выделение и идентификация грибов рода Aspergillus, а также культуральные и морфологические свойства описаны в теме 37.

Охратоксикозы. Заболевания, возникающие при поедании животными кормов, содержащих охратоксины — производные гидроизокумарина. Из известных охратоксинов — А, В, С и D — наиболее токсичен охратоксин А, который относят к группе кислых микотоксинов, экстрагирующихся из корма при кислом рН.

Типичные продуценты охратоксинов: грибы Aspergillus ochraceum, от которых произошло название микотоксина (имен­но из них токсин был впервые выделен), и Penicillium viridicatum. Охратоксины могут продуцировать и другие грибы рода Aspergillus и Penicillium. Токсигенные штаммы A. ochraceus в боль­шинстве своем, кроме охратоксинов, образуют пенициллиновую кислоту, а штаммы P. viridicatum — цитрины. Поэтому на практи­ке корма могут быть заражены сразу несколькими токсинами. Однако основным токсическим агентом в этих случаях является охратоксин А.

Природные субстраты A. ochraceus и P. viridicatum: ячмень, ку­куруза, овес, пшеница, горох, рис, гречиха, соевые бобы, арахис, фасоль, земляные орехи, кофе и др.

Охратоксины оказывают на организм животных нефротоксическое, тератогенное и канцерогенное действие. Охратоксикозам подвержены свиньи, птицы, крупный рогатый скот, лошади. Очень чувствительны к охратоксинам собаки.

Лабораторная диагностика охратоксикозов направлена на об­наружение токсина или грибов-продуцентов и основана на ре­зультатах токсико-микологического и физико-химического ана­лиза кормов и патологического материала. Методы определения микотоксина и идентификации грибов-продуцентов описаны в данной теме. Выделение и идентификация грибов рода Aspergillus и Penicillium описаны в теме 37.

Пенициллотоксикозы. Заболевания, возникающие при поеда­нии животными кормов, зараженных микотоксином — пеницилловой кислотой. Последнюю длительное время применяли как антибиотик, но из-за высокой токсичности в лечебной практике больше не используют.

Продуценты пеницилловой кислоты: различные виды грибов, преимущественно рода Penicillium — P. ruberulum, P. cyclopium, P. viridicatum и др. и некоторые варианты грибов родов Aspergillus, A. ochraceus, A. sulphureus.

Природные субстраты этих грибов: кукуруза, бобовые корма, табак.

По сравнению с фузарио- и аспергиллотоксикозами пеницил­лотоксикозы изучены недостаточно. Наиболее чувствительны к пеницилловой кислоте свиньи. Под влиянием этого токсина у животных происходит расширение кровеносных сосудов, глубо­кие дистрофические изменения в проксимальных канальцах по­чек. Пеницилловая кислота оказывает цитотоксическое, кардио-токсическое и канцерогенное действие на организм животных. В развитии смешанного микотоксикоза свиней, кроме различных токсинов, продуцируемых грибами рода Penicillium, принимает участие пеницилловая кислота.

Лабораторная диагностика пенициллотоксикозов основана на результатах токсико-микологического анализа, проводимого для обнаружения токсина или гриба-продуцента.

Рубратоксикозы. Группа болезней, развивающихся при скарм­ливании животным кормов, загрязненных рубратоксинами А, В, С. Наиболее распространен рубратоксин В.

Грибы-продуценты рубратоксина — Penicillium rubrum и P. purpurogenes. Последний вырабатывает в больших количествах рубратоксин В. Указанные грибы нередко выделяют из кормов вместе с токсигенными A.flavus, что говорит о возможности их синергического действия при совместном развитии на кормах.

Природные субстраты P. rubrum и P. purpurogenes: различные зерновые, бобовые, арахис, корма, семена подсолнечника и др.

Из сельскохозяйственных животных наиболее чувствительны к рубратоксину свиньи, особенно поросята. Наиболее остро и с высоким летальным исходом болезнь протекает у новорожден­ных поросят (токсин выделяется с молоком). Рубратоксины А и В оказывают гепатотоксическое, мутагенное и тератогенное дей­ствие на животных.

Лабораторная диагностика рубратоксикозов включает в себя выделение и идентификацию грибов рода Penicillium (см. тему 37).

Для воспроизведения заболевания в эксперименте ставят био­пробу на двух свиноматках с новорожденными поросятами из благополучного по инфекционным болезням хозяйства. Свино­маткам скармливают корм, загрязненный выделенной культурой гриба.

При положительном результате биопробы у свиноматок появ­ляются признаки отравления: диарея, угнетение, частичный от­каз от корма. Поросята после первого сосания свиноматки заболевают и погибают на 4...5-й день. Клинические признаки, патологоанатомические изменения у подопытных животных анало­гичны наблюдаемым в хозяйствах.

Фузариотоксикозы. Заболевания, развивающиеся при скармливании животным кормов, загрязненных микотокси-нами, продуцируемыми грибами только рода Fusarium, могут быть вызваны отдельными микотоксинами или их комбинацией. Фузариотоксикозы различают по видам микотоксинов.

Ф-2 токсикоз (микотоксический токсикоз, вульвовагинит непо­ловозрелых свинок). Болезнь вызывает зеараленон (токсин Ф-2, ферментативно-эстрогенное вещество (ФЭВ) и его производные: α и β -зеараленоны. Микотоксин оказывает на организм живот­ного эстрогенное (вызывающее охоту) и тератогенное воздей­ствие.

Продуценты микотоксина зеараленона — грибы F. graminearum, F. moniliforme и др. — типичные почвенные микроорга­низмы, способные развиваться на влажном корме при его хранении. Грибы хорошо растут на зерне пшеницы, кукурузы, сорго, хуже на зерне ячменя и овса, в сене. К зеараленонтоксикозам восприимчивы свиньи, крупный рогатый скот (болезнь характе­ризуется массовыми вульвовагинитами, отечностью молочной железы, у хряков отеком препуция). Наиболее чувствительны свиньи и хряки в возрасте 2...5 мес. α -Зеараленон в 3...4 раза, а β -зеараленон в 1, 2 раза активнее по эстрогенному действию, чем зеараленон. В основном они влияют на матку, яичники, тестикулы и молочные железы. Из организма ассимилированный зеара­ленон и его токсические метаболиты выделяются с желчью, фе­калиями и мочой, а у лактирующих животных и с молоком. На птиц зеараленон действует слабее.

Лабораторная диагностика Ф-2 токсикоза (зеараленонтоксикоза) основана на обнаружении токсических доз микотоксина в корме и его токсических метаболитов α и β в органах и тканях животных; при подостром течении болезни — в фекалиях. Микотоксикологическое исследование (кукурузы, кормов) проводят с целью обнаружения гриба-продуцента.

При микотоксикологическом исследовании необходимо ис­ключить отравления, вызванные люцерной, клевером и другими бобовыми, содержащими эстрогенные вещества. При органолептическом исследовании выявляют пораженные грибами зерно­вые корма — легковесные зерна с матово-серой оболочкой; иног­да на оболочке заметны пятна или коростинки красного и розо­во-оранжевого цвета, представляющие собой грибницы или спороношение гриба. Такую окраску можно обнаружить и в самом зерне при его надломе.

Материал для исследования. В лабораторию отправляют корм, пораженные органы и ткани животных.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Соскобы с пораженных зерен, отобранных при органолептическом исследо­вании, помещают на предметное стекло в каплю 50%-го водного раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. В поле зрения обнаруживают характерный для гри­бов рода Fusarium септированный мицелий, макроконидии из не­скольких крупных удлиненных клеток веретенообразной или серповидной формы или микроконидии (более мелкие), чаще одноклеточные на простых или разветвленных конидиеносцах. Иногда находят хламидоспоры, склероции.

Выделение и идентификация грибов рода Fusarium. Грибы хоро­шо растут на агаре Чапека, сусло-агаре и среде Билай с рН 4, 5...5, 6 при температуре 18...24°С.

На твердых питательных средах F. graminearum образует коло­нии с хлопьевидным пушистым белым, бело-розовым или крова­во-красным мицелием.

При изучении морфологии выросшей культуры грибов обна­руживают на воздушном мицелии спородохии (сплетения конидиеносцев в виде подушечек на поверхности гифов), состоящие из макроконидий различной формы (веретеновидные, серповид­ные, эллиптически изогнутые, конические). Встречаются розо­вые или темно-красные склероции. Иногда обнаруживают промежуточные хламидоспоры.

С помощью токсикобиологического анализа выявляют дермонекротическое действие микотоксинов, находящихся в корме. Ф-2 токсин не оказывает дермо-некротическое действие, не вы­зывает летального исхода. Методы микотоксикобиологических исследований описаны ранее.

Т-2 токсикоз. Заболевание животных, возникающее при поеда­нии корма, загрязненного трихотеценовым микотоксином Т-2. Это наиболее изученный из типичных фузариотоксинов, проду­цент которого — гриб Fusarium sporotrichioides (син. F. tricinctum).

Биологическое действие токсина Т-2 многостороннее: он по­ражает сердечно-сосудистую и нервную системы, угнетает разви­тие лимфоидных органов у растущих животных, снижает количе­ство лейкоцитов в крови, ухудшает процесс выработки антител после активной иммунизации на ранней стадии развития иммун­ной реакции у животных, нарушает функции Т- и В-лимфоцитов, ингибирует биосинтез белка. Токсин Т-2 более опасен, чем другие известные микотоксины, продуцируемые грибами родов Aspergillus и Penicillium. Наиболее чувствительны к данному микотоксину крупный рогатый скот, свиньи, птицы, которым скарм­ливают токсический корм (зерно). Чувствителен к отравлению и человек при поедании так называемого «пьяного хлеба», выпе­ченного из зерна, пораженного токсигенным грибом.

Природные субстраты гриба F. sporotrichioides: кукуруза, силос, сено, пшеница и др.

Для постановки диагноза достаточно обнаружить определен­ное количество токсина в кормах согласно методике качествен­ного определения микотоксина Т-2 в зернофураже. Для микотоксикологического исследования корма необходимо предвари­тельно исключить инфекционную природу болезни (отечную бо­лезнь у свиней и др.), а также отравления ядовитыми растениями, минеральными и органическими ядами.

Токсикологическое исследование корма. Обязательно проводят биопробой на коже кролика. Методика описана выше. Токсин Т-2 оказывает резко выраженное дермонекротическое действие (рис. 138).

Рис. 138. Некроз кожи у кролика с образованием толстого струпа на месте нанесения эфирной вытяжки из культуры F. sporotrichioides, выращенной на овсе

Выделение и идентификация гриба F. sporotrichioides. Посевы культивируют из исследуемого материала, как при микотоксикозе Ф-2, после чего изучают культуральные и морфологические признаки выросших культур.

F. sporotrichioides образуют колонии с хорошо развитым воз­душным мицелием белого, розового или желтоватого цвета (рис. 139).

В препаратах из колоний обнаруживают микроконидии, чаще одноклеточные, реже с одной или тремя перегородками, груше­видной или лимоновидной, шаровидно-яйцевидной или веретенно-шаровидной формы (рис. 140). Встречаются также макроконидии веретенно-серповидной формы (рис. 141). Может быть обильное количе­ство хламидоспор.

Стахиботриотоксикоз. Ост­ро или подостро протекающий микотоксикоз, возникающий при поедании животными кормов и подстилки, загряз­ненных грибами Stachybotrys altemans (син. S. atra) или токсическими метаболитами этого гриба. Болезнь проявляется в виде поражений кожи, общего токсикоза, абортов, нарушений иммунной и нервной систем, изменений в кроветворных орга­нах, тяжелых расстройств желудочно-кишечного тракта. Отмеча­ют слабое прикрепление волос, иногда многочисленные крово­излияния на бесшерстных местах. Частные признаки болезни: конъюнктивит, гиперемия слизистой оболочки ротовой полости и носа, саливация и серозные, позднее серозно-геморрагические выделения из носа, некротические очаги на слизистой оболочке ротовой полости. Чаще обнаруживают некротические язвы на деснах вокруг зубов и на языке (рис. 142).

К стахиботриотоксикозу чувствительны лошади, крупный ро­гатый скот, овцы, птицы, свиньи.

Возбудитель стахиботриотоксикоза относят к высшим несо­вершенным грибам (класс Deuteromycetes) рода Stachybotrys (ак­тивные разрушители целлюлозы). Stachybotrys alternans образует сатратоксины A, D, F и другие, которые относят к группе трихотеценов. Трихотецены (известно около 60 токсинов) оказывают на животных нейротоксическое, геморрагическое, лейкопеническое, иммунодепрессивное, дермотоксическое, тератогенное действие. Токсин гриба Stachybotrys alternans образуется посте­пенно в стеригмах, конидиях и конидиеносцах и накапливается в субстрате. Токсин устойчив к нагреванию, даже автоклавированию, но инактивируется под действием щелочей и хлора. С пре­кращением роста гриба заканчиваются образование и накопле­ние микотоксина (10...25 дней).

Природные субстраты гриба: солома (ячменная, ржаная, пше­ничная, овсяная), сено (чаще злаковое), зерно (ячмень, овес), кукуруза, рис, горох, хлопок.

Лабораторная диагностика стахиботриотоксикоза основана на органолептическом, токсико-биологическом и микологическом исследовании корма.

Органолептическое исследование. При осмотре кормов обраща­ют внимание на наличие темного или черного налета на стеблях соломы (сена). В дифференциальном диагнозе исключают сап.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Обращают внимание на наличие вегетативных и репродуктивных структур, характерных для гриба. Соломинки, пораженные грибом S. alternans, отбирают с помощью лупы по черному порошистому налету, особенно в узлах соломинок. Налет соскабливают, поме­щают на предметное стекло в каплю 50%-го водного раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. В поле зрения обнаруживают темноокрашенные конидиеносцы и опавшие споры гриба (рис. 143).

Рис. 143. Конидиеносец (а) и конидии (6) Stachybot­rys alternans

Выделение и идентификация гриба S. alternans. Аэроб, темпера­турный оптимум 24...26°С, рН 6, 8...7, 0, влажность 45...50%. При влажности 20 % не растет. Гриб хорошо развивается на естествен­ных субстратах и на искусственных пи­тательных средах: Ван—Итерсона, на агаре Чапека или сусло-агаре. В чашках Петри на фильтровальной бумаге, смо­ченной средой Ван—Итерсона, S. alter­nans образует колонии от темно-серого до черного цвета (рис. 144).

На агаре Чапека гриб образует колонии с двумя зонами (рис. 145). Центральная зона складчатая, черного цвета, по пери­ферии отмечают белую прозрачную каемку. Цвет питательной среды вокруг колоний бурый, нередко с темно-вишневым оттен­ком. На сусло-агаре S. alternans образует черные колонии с бо­роздками, радиально расходящимися от центра.

Цвет мицелия в молодой культуре бледно-оливковый, с возра­стом становится оливково-бурым. Конидиеносцы также изменя­ются в зависимости от возраста и могут быть простыми и развет­вленными, с редкими перегородками. На верхушке конидиеносца можно наблюдать сросшиеся у основания яйцевидные стериг­мы, называемые мутовками. На вершине стеригм образуются одноклеточные округлые конидии. В молодой культуре они глад­кие, бледно-оливкового цвета. Зрелые конидии отличаются шиповидно-бородавчатой формой, непрозрачностью и черным цве­том. Каждая стеригма образует по 3...7 конидий. Они склеиваются рлизью и формируют головку на пучке стеригм (рис. 146).

Дендродохиотоксикоз. Тяжелопротекающий микотоксикоз, ча­сто с молниеносной гибелью. Характеризуется расстройством центральной нервной, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем, кровоизлияниями во внутренних органах, язвенно-не­кротическими процессами на пятачке (у свиней), коже губ и сли­зистой оболочке ротовой полости, дегенеративными изменения­ми в паренхиматозных органах. В отличие от стахиботриотоксикоза при дендродохиотоксикозе отсутствуют кровоизлияния в паренхиматозных органах и изъязвления желудка.

Возбудитель — гриб Dendrodochium toxicum (рис. 147). Из гриба выделен микотоксин дендродохитоксин (дендродохин), который относят к трихотеценам. Из всех известных трихотеценовых микотоксинов дендродохин наибо­лее токсичен. Токсин образуется при 25 °С в субстрате, на котором растет гриб, в его мицелии и конидиях. Одно­кратная доза 350...450 г пораженной со­ломы вызывает гибель лошадей в тече­ние нескольких часов после приема корма. Дендродохин устойчив к высо­кой температуре, выдерживает нагрева­ние в течение 1 ч при 125°С.

Лабораторная диагностика дендродохиотоксикоза основана на результа­тах главным образом токсико-микологического анализа кормов, из которых выделяют гриб D. toxicum.

Материал для исследования. Грубые корма, в основном солома, мякина, сырой хлопок и другие растительные остатки, а также овес, суданская трава, конопля, горох, которые служат природ­ными субстратами для гриба D. toxicum.

Органолептическое исследование. Проводят в целях профилак­тики болезни за месяц до скармливания кормов животным.

На соломе чаще обнаружи­вают мицелий гриба и очень редко конидию. Часто у корма нормальный внешний вид, так как гриб разрастается в основ­ном внутри субстрата.

Микроскопическое исследо­вание. Проводят после посева исследуемого материала на растительные субстраты и пита­тельные среды (рис. 148).

Токсико-биологическое ис­следование. Заключается в из­влечении из корма токсических веществ и определении их дер-монекротического действия на кроликах. В качестве дополнительных исследований используют метод определения токсично­сти кормов на аквариумных рыбках и белых мышах, морских свинках и крысах. Методики описаны выше.

Выделение и идентификация гриба D. toxicum. Аэроб, хорошо растет на естественных средах: сене, ячмене и на обычных лабораторных средах: агаре Сабуро, сусло-агаре, среде Чапека и др. Температурный оптимум 20...25°С (диапазон 7...35°С). При бо­лее низкой температуре гриб образует только мицелий. Опти­мальная кислотность питательных сред для роста и развития гриба рН 6, 0...7, 0. На растительных субстратах на 3...4-й день после посева появляются небольшие рыхлые мицелиальные подушеч­ки, а затем на 10...12-й день — спородохии (рис. 149). Спородо­хии — тесный слой коротких, часто разветвленных конидиеносцев на поверхности выпуклого сплетения гиф и стромы в виде подушечек. Мицелий бесцветный, гифы септированные.

Рис. 149. Зерна овса, зараженного грибом D. toxicum (на зерновой оболочке темные спородохии гриба окружены белой каймой мицелия )

На агаре Сабуро обнаруживают шаровидные, реже грушевид­ные, интеркалярные и терминальные хламидоспоры. На жидких средах гриб растет на поверхности субстрата в виде пленчатого, вначале пушистого мицелия. На 5...7-й день развиваются споро­дохии. На агаре Чапека (рис. 150) при комнатной температуре гриб образует пушистый воздушный мицелий белого цвета, спо­родохии развиваются медленно. При температуре 22...25 °С обра­зуется белый стелющийся мицелий, колонии круглые, спородо­хии появляются на 4...5-й день. Спородохии — поверхностные, округлые или неправильной формы, 1, 2 мм в диаметре. По пери­ферии окаймлены белым плоским мицелиальным ободком, в центре — оливково-черный слой конидий. С возрастом отдель­ные спородохии сливаются и образуют сплошной оливково-чер­ный слой.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Изучить культурально-морфологические свойства грибов родов Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Stachybotrys.

2. Провести органолептический анализ пораженных плесне­выми грибами кормов (комбикорма, сено).

3. Ознакомиться с результатами дермонекротической пробы на кролике.

4. Составить схему лабораторного исследования на микоток-сикозы.

Контрольные вопросы

1. В чем основные отличия микозов от микотоксикозов?

2. Каковы морфологические и культуральные свойства возбудителей микоток­сикозов?

3. Какой материал отправляют в лабораторию и в чем состоит его исследование на выявление микотоксинов?

4. Как ставят биопробу при диагностике микозов и микотоксикозов?

5. На каких питательных средах культивируют возбудители микозов и микотоксикозов?