Билет №3

1) При попадании в организм незначительного числа патогенных микроорганизмов (что бывает наиболее часто) их обычно эффективно элиминируют защитные факторы организма. Для развития заболевания необходимо, чтобы патоген обладал достаточной вирулентностью, а его количество (инфицирующая доза) превышало некоторый порог, определяемый в каждом конкретном случае вирулентностью возбудителя и состоянием резистентности организма. В контексте патогенных свойств инфицирующую дозу можно рассматривать как определённое количество микроорганизмов, обеспечивающее возможность адгезии, колонизации и инвазии в ткани.

Входные ворота инфекции. Тропизм. Пантропизм. Не менее значимо проникновение возбудителя. Многих возбудителей отличает тропизм [от греч. trope, направление] к определённым тканям. Например, гонококк вызывает типичные поражения после попадания на слизистые оболочки половых органов или глаз, а дизентерийная амёба — на слизистую оболочку кишечника. С другой стороны, туберкулёзная или чумная палочки способны, вызвать заболевание вне зависимости от пути проникновения, приводя к развитию полиморфных поражений, варьирующих в зависимости от места проникновения. Для таких патогенов характерен пантропизм. Проникнув в организм, возбудитель начинает размножаться в месте внедрения, формируя первичный очаг поражения (первичный аффект), либо распространяется (диссеминирует) в другие органы и ткани

3) Иммуноглобулины: определение, структура.

Иммуноглобулинами называются белки, которые синтезируются под влиянием антигена и специфически с ним реагируют. При электрофорезе они локализуются в глобулиновых фракциях.
Иммуноглобулины состоят из полипептидных цепей. В молекуле иммуноглобулина различают четыре структур:
1. Первичная – это последовательность определенных аминокислот. Она строится из нуклеотидных триплетов, генетически детерминируется и определяет основные последующие структурные особенности.
2. Вторичная определяется конформацией полипептидных цепей.
3. Третичная определяет характер расположения отдельных участков цепи, создающих пространственную картину.
4. Четвертичная характерна для иммуноглобулинов. Из четырех полипептидных цепей возникает биологически активный комплекс. Цепи попарно имеют одинаковую структуру.
Любая молекула иммуноглобулина имеет Y-образную форму и состоит из 2 тяжелых (Н) и 2 легких (L) цепей, связанных между собой дисульфидными мостиками. Каждая молекула иммуноглобулина имеет 2 одинаковых антигенсвязывающих фрагмента Fab (англ. Fragment antigen binding) и один Fc-фрагмент (англ. Fragment cristalisable), с помощью которого ИГ комплементарно связываются с Fc-рецепторами клеточной мембраны.
Концевые участки легких и тяжелых цепей молекулы иммуноглобулина достаточно разнообразны (вариабельны), а отдельные области этих цепей отличаются особенно выраженным разнообразием (гипервариабельностью). Остальные участки молекулы ИГ относительно низменны (константны). В зависимости от строения констатных областей тяжелых цепей иммуноглобулина разделяются на классы (5 классов) и подвиды (8 подвидов). Именно эти константные области тяжелых цепей, существенно отличаясь по аминокислотному составу у различных классов иммуноглобулинов, в конечном итоге определяют особые свойства каждого класса антител:

4) Моноклональные антитела. Моноклональные антитела (МАТ) секретируются иммунными клетками, происходящими от единственной антителообразующей клетки. Поэтому МАТ направлены только против определенного эпитопа иммуногенного вещества, так называемой " антигенной детерминанты". Для получения МАТ изолируют лимфоциты из селезенки иммунизированной мыши (1) и производят их слияние с опухолевыми клетками мыши (клетками миеломы) (2). Это необходимо, так как жизнеспособность антителопродуцирующих лимфоцитов в культуре ограничена лишь несколькими неделями. При слиянии с опухолевой клеткой возникают гибридные клетки, так называемые гибридомы, которые являются потенциально бессмертными.Слияние клеток (2) является редким событием, частота которого повышается в присутствии полиэтиленгликоля [ПЭГ (PEG)]. Отбор продуктивных гибридных клеток проводится при длительной инкубации первичной культуры в ГАТ-среде (НАТ-среде) (3), содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Аминоптерин, аналог дигидрофолиевой кислоты, конкурентно ингибирует дигидрофолат-редуктазу и тем самым биосинтез дТМФ (см. с. 388). Поскольку дТМФ существенно необходим для синтеза ДНК, миеломные клетки не могут выживать в присутствии аминоптерина. С другой стороны, клетки селезенки могут преодолевать действие ингибитора, используя для синтеза ДНК гипоксантин и тимидин, однако и они существуют в течение ограниченного времени. Только гибридома выживает в виде культуры в среде ГАТ, так как эти клетки обладают одновременно бессмертием миеломных клеток и способностью клеток селезенки приспосабливаться к аминоптерину.В действительности продуцировать антитела способны только единичные гибридомные клетки. Такие клетки необходимо выделить и размножить клонированием (4). После тестирования клонов на способность образовывать антитела отбираются положительные культуры, которые снова клонируются и подвергаются последующей селекции (5). В результате получают гибридому, продуцирующую моноклональные антитела. Производство моноклональных антител этими клетками осуществляют in vitro в биореакторе или in vivo в асцитной жидкости мыши (6). 2) БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекц. болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, к-рые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептич. условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, осн. клинич. признаки болезни и патологоанатомич. изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 осн. метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патол. или др. исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологич., культурально-биохимич., антигенных и патогенных свойств бактерий.Б. и. начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патол. материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из др. исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования (см.Окраска микроорганизмов). Для обнаружения нек-рых бактерий (напр., возбудителя туберкулёза) патол. материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нем концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерии применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12—24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли. Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА

Билет№6 1. микробные ферменты (гиалуронидаза, коагулаза, фибринолизин, коллагеназа, лецитиназа, лейкоцидины и др.), к-рые способствуют инвазии бактерий и помогают им противостоять защитным реакциям организма. [Роль этих ферментов видна из следующих примеров. Дюран-Рейнальс (F. Dnran-Raynals, 1942) описал так наз. диффузионный фактор, к-рый оказался ферментом — гиалуронидазой. Высоковирулентные бактерии (стрептококки, возбудители газовой гангрены и др.) продуцируют гиалуронидазу, к-рая, расщепляя гиалуроновую кислоту, снижает вязкость соединительной ткани и таким образом способствует внедрению бактерий и распространению их в тканях. Коагулаза, выделяемая нек-рыми вирулентными бактериями, вызывает свертывание плазмы с выделением фибрина, к-рый, обволакивая бактерии, защищает их от фагоцитов и антител];

2. 3.Антиидиотипические антитела, антиидиотипы (anti-idiotypic antibodies, anti-idiotypes) [греч. anti — против, idios — собственный, свой, частный, отдельный, своеобразный и typos — отпечаток, образец, тип] — антитела, специфические по отношению к антигенным детерминантам, расположенным на вариабельных участках других антител. Иными словами, А.а. комплементарны определенной конфигурации пептидной цепи в составе другого антитела, в свою очередь комплементарной конфигурации антигена. Тем самым А.а. химически воспроизводят нужную конфигурацию антигена и могут рассматриваться как «имитаторы» или аналоги антигена. Применение А.а. создает принципиально новый подход к получению диагностических и вакцинных препаратов, особенно полезный в тех случаях, когда антигены не удается приготовить на основе нативного вируса. В ряде случаев А.а., полученные к антителам против ферментов, обладают ферментативной активностью (см.

4. Сущность метода флюоресцирующих антител заключается в визуализации реакции антиген-антитело люминесцентными маркерами. Метод конъюгации глобулинов с органическими флюорохромами разработан в 1942 году А. Кунсом (англ.)русск..^[1]Различают МФА прямой, разработанный А. Кунсом и Мелвином Капланом, ^[2] МФА непрямой, разработанный А. Кунсом и Уиллером и непрямой МФА с комплементом. При прямом методе (пМФА) на препарат с антигеном наносят известную, предположительно соответствующую ему, люминесцирующую сыворотку. В случае образования комплекса, он обнаруживается, люминесцентной микроскопией в виде зеленоватого свечения разной степени интенсивности и четкости.При непрямом методе (нМФА) на мазок из наслоения антигена и немеченой сыворотки наносят антиглобулиновую (видовую по отношению к диагностической сыворотке) люминесцирующую сыворотку. В случае образования комплекса антиген-антитело, последний компонент реагирует с видовой антиглобулиновой люминесцирующей сывороткой. При нМФА с комплементом, его добавляют к комплексу антиген-антитело и идентифицируют образование тройного комплекса по люминесцирующей антикомплементарной сыворотке.Результаты описываются в так называемых «крестах» (от одного + до четырех ++++) — субъективная градация исследователем степени выраженности реакции. Непрямые методы требуют наличия только антиглобулиновых видовых сывороток с флюорохромами, но при этом необходимо большое количество тестовых контролей. При постановке прямым методом делается только один контроль, но требуется множество моноспецифических сывороток. Недостатками всех видов МФА является ограниченная чувствительность из-за наличия возможных перекрестных реакций между близкими по антигенному составу объектами и неспецифическая флуоресценция вследствие адсорбции флуоресцирующих глобулинов на различных элементах препарата. В настоящее время используются коммерческие стандартные конъюгаты, содержащие глобулины к исследуемым антигенам. Метод флуоресцирующих антител.

Билет №7
1.Ферментывирусов. Ферментывирусовподразделяют навирионныеивирусиндуцированные.Кпервымотносятферменты транскрипцииирепликации(ДНК-иРНК-полимеразы), обнаруженныеумногихвирусов, обратнаятранскриптазаретровирусов, а также эндо- иэкзонуклеазы, АТФ-аза, нейраминидазаотдельных вирусов. Вирусиндуцированнымисчитаютсятеферменты, структура которыхзакодированаввирусномгеноме.Преждевсегоэтоотноситсяк РНК-полимеразампикорна-, тога-, орто-ипарамиксовирусам, атак-жеДНК-полимеразепокс-игерпесвирусов. Нарядуссобственнымивирусыиспользуютклеточные ферменты, которыенеявляютсявирус специфическими.

2.Гликолиз. Врезультате расщепленияглюкозырасходуется2исинтезируется4молекулы АТФ.Длянекоторыхмикроорганизмовакцепторомэлектроновв цикле гликолизамогутбытьнитратыилиС0 2.Дальнейшиепути превращения пируватапредопределяютсяметаболическими особенностямимикроорганизмов.Дляанаэробовброжениеявляется способомполученияэнергииврезультатеокислительно-восстановительныхреакций.Взависимостиотобразования конечныхпродуктовразличаютнесколькотиповброжения: молочно-кислое, спиртовое, муравьинокислое, пропионовокислое.

Молочнокислоеброжение. БактерииродовLactobacillus, Streptococcus, Bifidobacteriumспособныобразовыватьизпируватамолочную кислоту.Приэтомводнихслучаяхпроисходит образованиетолькомолочнойкислоты, вдругих нарядусмолочнойкислотой образуютсяпобочныепродукты: спирт, ацетонидр., количествокоторых может превосходитьсодержаниеосновногопродукта.

Муравьинокислоеброжение. Этоттипброженияхарактерендля представителейсемействаэнтеробактерий.Однимизконечных продуктовданноготипаброженияявляетсямуравьинаякислота.Наряду снейобразуютсямолочная, уксуснаякислотыидругиепродукты.

Маслянокислоеброжение. Однимизосновныхпродуктов броженияявляетсямаслянаякислота.Приэтомтипеброжения образуютсятакжеуксуснаякислота, С0 2иН2.

Пропионовокислое брожение характернодляпропионобактерий, которыеизпируватаобразуютпропионовуюкислоту.

3. Выделение чистых культур. Наиболее распространенным способом выделения чистых культур является посев смеси микробов на плотные питательные смеси с целью получения отдельных колоний культур, которые считают результатом развития одной клетки. Для посева чаще используют агаризованные среды в чашках Петри.

Существуют два основных метода разведения исследуемого материала:

1) на поверхности плотной питательной среды;

2) предварительное разведение материала в физиологическом растворе.

Метод на поверхности плотной среды используется для выделения чистых культур аэробных и факультативно анаэробных м/организмов. С этой целью для посева берут ряд чашек Петри с плотной средой. В первую чашку наносят исследуемый материал и распределяют его по поверхности шпателем. Затем производят посев последовательно на поверхность Среды в остальных чашках. Количество материала, внесенного в среду, при этом последовательно убывает. Метод предварительного разведения используется для выделения чистых культур м/организмов как аэробных, так и анаэробных. Готовят разведение материалов 10-100 раз и более и производят посев разведений, пользуясь поверхностным или глубинным методом.

Выделение чистых культур строгих анаэробов требует условий выращивания без доступа кислорода.