МБ диагностика дизентерии

Основной метод — бактериологический. Материалом для исследования служат испражнения. Схема выделения возбудителя: посев на дифференциально-диагностические среды Эндо и Плоскирева (параллельно на среду обогащения с последующим посевом на среды Эндо, Плоскирева) для выделения изолированных колоний, получение чистой культуры, изучение ее биохимических свойств и, с учетом последних, идентификация при помощи поливалентных и моновалентных диагностических агглютинирующих сывороток. Выпускают следующие коммерческие сыворотки.

1 ) К шигеллам, не ферментирующим маннит:

к S. dysenteriae1и 2 (поливалентные и моновалентные),

к S. dysenteriae 3—7 (поливалентные и моновалентные),

к S. dysenteriae 8—12 (поливалентные и моновалентные).

2) К шигеллам, ферментирующим маннит:

к типовым антигенам S. flexneri 1, 11, III, IV, V, VI,

к групповым антигенам S. flexneri 3, 4, 6, 7, 8 — поливалентная,

к антигенам S. boydii 1—18 (поливалентная и моновалентные),

к антигенам S. sonnei 1 фазы, 11 фазы,

к антигенам S. flexneri I—VI + S. sonnei — поливалентная.

Для быстрой идентификации шигелл рекомендуется следующий метод: подозрительную колонию (лактозонегативная на среде Эндо) пересевают на среду TSI (англ. triple sugar iron) — трехсахарный агар (глюкоза, лактоза, сахароза) с железом для определения продукции H2S; или на среду, содержащую глюкозу, лактозу, сахарозу, железо и мочевину. Любой организм, который расщепляет мочевину через 4— 6 ч инкубирования, вероятнее всего, относится к роду Proteus и может быть исключен. Микроорганизм, образующий H2S или имеющий уреазу, или образующий кислоту на косячке (ферментирует лактозу или сахарозу), может быть исключен, хотя штаммы, образующие H2S, должны быть исследованы как возможные члены рода Salmonella. Во всех других случаях культура, выросшая на этих средах, должна быть исследована и, если ферментирует глюкозу (изменение цвета столбика), выделена в чистом виде. Одновременно она может быть исследована в реакции агглютинации на стекле с соответствующими антисыворотками к роду Shigella. При необходимости проводят другие биохимические тесты, проверяющие принадлежность к роду Shigella, а также изучают подвижность.

Для обнаружения антигенов в крови (в том числе в составе ЦИК), моче и испражнениях могут быть использованы следующие методы: РПГА, РСК, реакция, коагглютинации (в моче и испражнениях), ИФМ, РАГА (в сыворотке крови). Эти методы высокоэффективны, специфичны и пригодны для ранней диагностики.

Для серологической диагностики могут быть использованы: РПГА с соответствующими эритроцит Самыми диагностикумами, иммунофлуоресцентный метод (в непрямой модификации), метод Кумбса (определение титра неполных антител). Диагностическое значение имеет также аллергическая проба с дизентерином (раствор белковых фракций шигелл Флекснера и Зонне). Реакцию учитывают через 24 ч. Она считается положительной при наличии гиперемии и инфильтрата диаметром 10—20 мм.

29. Классификация пищевых отравлений.

30. Пищевые токсикоинфеции, основные возбудители.

Пищевые токсикоинфеции возникают только в связи с употреблением в пищу продуктов, обильно зараженных бактериями. Пищевые токсикоинфекции имеют обычно характер групповых заболеваний и отличаются коротким инкубационным периодом, острым непродолжительным течением и отсутствием, как правило, контагиозных случаев заболеваний, так как заражающие дозы их возбудителей велики.

Токсикоинфекции являются следствием массивного обсеменения пищевого продукта живыми возбудителями. Через пищу возможно заражение различными возбудителями (брюшного тифа, дизентерии, холеры, бруцеллеза и др.), для которых али­ментарный способ заражения не является единственным. Передача возбудителей в этих случаях происходит также контактно-бытовым и другими путями.

Для пищевых токсикоинфекций существует только один путь передачи — через пищу. Пищевые токсикоинфекции могут вызывать представители по крайней мере пяти семейств бактерий: Enterobacteriaceae (роды - Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus, Serrcuia, Hafnia, Enterobacier, Citrobacler и др.), Vibrionaceae (V. parahemolyticus), Pseudomonaclaceae, Streptococcaceae (протеолитические варианты стрептококков серогруппы D), Bacillaceae—роды Bacillus (В. cere us), Closrridium (C. perfringens, серотипы A, D, F; C. bolulinum, серотипы А, В, С, E, F).

31. Эпидемиологические особенности пищевых токсиконифекций.

Пищевые токсикоинфекции отличаются от других инфекций, при которых заражение происходит также через пищу, течением по типу острого токсикоза: на первый план выступают симптомы интоксикации; у разных лиц во время одной и той же вспышки наблюдаются различные клинические проявления, патологоанатомические изменения выражены слабо и не соответствуют тяжести заболевания. Для пищевых инфекций (брюшной тиф, дизентерия и др.) характерными являются относительно продолжительный инкубационный период, отличительные для каждой болезни клинические проявления и типичные патологоанатомические изменения, т. е. на первый план выступают инвазивные (инфекционные) свойства возбудителей, которые также могут сопровождаться сильным токсикозом.

Немаловажной особенностью современной эпидемиологии сальмонеллезов является установление роли человека как источника заражения сальмонеллами. Заражение человека от больного или бактерионосителя возможно не только через пищу, в которой сальмонеллы находят хорошие условия для размножения, но и контактно-бытовым путем. Этот способ заражения приводит к широкому распространению бессимптомного бактерионосительства.

К особенностям эпидемиологии сальмонеллезов за последние годы следует отнести также повышение этиологической роли S. enteritidis, активизацию пищевого пути передачи возбудителей инфекции с преобладанием роли птицы и птигцепродуктов, увеличение числа групповых заболеваний, в том числе внутрибольничных, рост заболеваемости среди детей до 14 лет (более 60 % всех случаев заболеваний).

32. Факторы патогенности сальмонелл, генетический контроль их синтеза.

У сальмонелл имеются факторы адгезии и колонизации, факторы инвазии; они имеют эндотоксин и, наконец, они, по крайней мере S. typhimurium и некоторые другие серотипы, могут синтезировать два типа экзотоксинов: а) термолабильные и термостабильные энтеротоксины типа LT и ST; б) шигаподобные цитотоксины.Особенностью токсинов является внутриклеточная локализация и выделение после разрушения бактериальных клеток. LT сальмонелл имеет структурное и функциональное сходство с LT энтеротоксигенных Е. coli и с холерогеном. Его м. м. 110 кД, он устойчив в диапазоне рН 2, 0—10.0. Токсинообразование у сальмонелл сочетается с наличием у них двух факторов кожной проницаемости:

а) быстродействующего — продуцируется многими штаммами сальмонелл, термостабилен (при 1000С сохраняется в течение 4 ч), действует в течение 1—2 ч;

б) замедленного — термолабилен (разрешается при 75 °С в течение 30 мин), вызывает эффект (уплотнение кожи кролика) через 18—24 ч после введения.

Цитотоксин, продуцируемый сальмонеллами, термолобилен, его цитотоксическое действие проявляется в угнетении синтеза белка энтероцитами. Обнаружено, что отдельные штаммы сальмонелл могут одновременно синтезировать LT, ST и цитотоксин, другие — только цитотоксин.Вирулентность сальмонелл зависит также от обнаруженной у них плазмиды см. м. 60 МД. утрата ее значительно снижает вирулентность бактерий. Предполагается, что появление эпидемических клонов сальмонелл связано с приобретением ими плазмид вирулентности и R-плазмид.

33. Формы заболеваний, вызываемых сальмонеллами, особенности патогенеза.

Сальмонеллезы могут протекать с различной клинической картиной: в виде пищевой токсикоинфекции, сальмонеллсзной диареи и генерализованной (тифозной) формы. — все зависит от величины заражающей дозы, степени вирулентности возбудителей и иммунного статуса организма. Массивное обсеменение сальмонеллами пищевого продукта обусловливает пищевую токсикоинфекцию, при которой основные симптомы связаны с поступлением возбудителя в кровь в большом количестве, его распадом и высвобождением эндотоксина. В основе сальмонеллсзной диареи лежит колонизация сальмонеллами энтероцитов. После прикрепления к глипокаликсу тонкого кишечника сальмонеллы внедряются между ворсинками и. прикреплюсь к плазмолемме энтероцитов, колонизируют ее, повреждают микроворсинки, вызывают слущивание энтероцитов и умеренное воспаление слизистой оболочки. Освобождающийся энтеротоксин вызывает диарею, а цитотоксин — гибель клеток. Сальмонеллы размножаются на плазмолемме. но не в энтероцитах, а происходит их инвазия через эпителий в подлежащие ткани слизистой оболочки, они транспортируются через нее в макрофагах, поступают в лимфу и кровь, вызывая бактериемию и генерализацию инфекционного процесса.

34. Методы МБ диагностики сальмонеллеза.

Основной матод диагностики сальмонеллезной инфекции — бактериологический. Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, кровь, промывные воды желудка, моча, послужившие причиной отравления продукты. Особенности бактериологической диагностики сальмонеллеза:

1) использование сред обогащения (селенитовой, магниевой), в особенности при исследовании испражнений;

2) для обнаружения сальмонелл пробы следует брать из последней, более жидкой, части испражнений (верхнего отдела тонкого кишечника);

3) соблюдать соотношение 1: 5 (Одна часть испражнений на 5 частей среды);

в связи с тем, что S. arizonae и S. diarizonae ферментируют лактозу, использовать в

4) качестве дифференциально-диагностической не только среду Эндо, но и висмут-сульфит-агар, на котором колонии сальмонелл приобретают черный (некоторые — зеленоватый) цвет;

5) для посева крови использовать среду Рапопорт;

6) использование для предварительной идентификации колоний 01-сальмонеллезного фага, к которому чувствительны до 98 % сальмонелл,

7) для окончательной идентификации выделенных культур вначале используют поливалентные адсорбированные О- и Н-сыворотки, а затем — соответствующие моновалентные О- и Н-сыворотки.

Для быстрого обнаружения сальмонелл могут быть использованы поливалентные иммунофлуоресцентные сыворотки. Для выявления антител в сыворотке крови больных и переболевших используется РПГА с применением поливалентных эритроцитарных диагностикумов, содержащих полисахаридные антигены серогрупп А, В, С, D и Е.

35. Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства V. cholerae.

V. cholerae относится к семейству Vibrionaceae. которое включает в себя несколько родов (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Phoiobacterium).

Морфологические свойства. Короткие, не образующие спор и капсул, изогнутые или прямые грамотрицательные палочки, диаметром 0, 5 мкм, длиной 1, 5—3, 0 мкм., подвижные (V. cholerae - монотрих, у некоторых видов два и больше число полярно расположенных жгутиков).

Культуральные свойства. Хорошо и быстро растут на обычных средах, хемоорганотрофы. Вибрионы — аэробы и факультативные анаэробы, температурный оптимум для роста 18—37 °С, рН 8, 6—9, 0 (растут в диапазоне рН 6, 0—9, 6), некоторые виды (галофалы) не растут в отсутствие NaС1. Холерный вибрион очень неприхотлив к питательным средам. Он хорошо и быстро размножается на 1 %-ной щелочной (рН 8, 6—9, 0) пептонной воде (ПB), содержащей 0, 5-1, 0 % NaCl, обгоняя рост других бактерий. Для подавления роста протея к 1 %-ной ПВ рекомендуется добавлять теллурит калия (в конечном разведении 1: 100 000). 1 %-ная ПВ является наилучшей средой обогащения для холерного вибриона. При росте он образует через 6—8 ч на поверхности ПВ нежную рыхлую сероватого цвета пленку, которая при встряхивании легко разрушается и падает на дно в виде хлопьев, ПВ умеренно мутнеет. Для выделения холерного вибриона предложены различные избирательные среды: щелочной агар, желчно-солевой агар, щелочной альбуминат, щелочной агар с кровью, лактозо-сахарозные и другие среды. Наилучшей является среда TCBS (тиосульфатцитрат-бромтимоловый сахарозный агар) и ее модификации. Однако чаще всего используют щелочной МПА, на котором холерный вибрион образует гладкие стекловидно-прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции.

При посеве уколом в столбик желатина вибрион через 2 сут. при температуре 22— 23 °С вызывает разжижение с поверхности в виде пузырька, затем воронкообразное и, наконец, послойное.

В молоке вибрион быстро размножается, вызывая через 24—48 ч свертывание, а затем наступает пептонизация молока, и через 3—4 дня вибрион погибает из-за сдвига рН молока в кислую сторону. Тинкториальные свойства. Грамотрицательные палочки.

36. Биохимические свойства холерного вибриона, классификация Хейберга.

Биохимические свойства. Ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа (глюкозу ферментируют по пути Эмбдеиа—Мейергофа). Оксидазоположительны, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты (V. cholerae дает положительную нитрозо-индоловую реакцию), расщепляют желатин. часто дают положительную реакцию Фогеса—Проскауэра т.е. образуют ацетилметилкарбинол) уреазы не имеют, не образуют H2S, имеют декарбоксилазы лизина и орнитина, но не имеют аргипиндигидролазы.

37. Антигенные свойства холерного вибриона, классификация, серовары. НАГ - вибрионы.

Как было установлено А. Гарднером и К. Венкатраманом. холерные и холероподобные вибрионы имеют общий Н-антиген. но различаются по О-антигенам. По О-антигену холерные и холероподобные вибрионы к настоящему времени распределяют на 139 0-серогрупп. но их количество все время пополняется. Холерный вибрион относится к O1 группе. Он имеет общий А-антиген и два типоспецифических антигена — В и С. по которым и различают три, серотипа V. cholerae — ceротип Огава (АВ). ceротип Инаба (AC) и cepотип Гикошима (ЛВС). Холерный вибрион в стадии диссоциации имеет ОR- антиген. В связи с этим для идентификации V cholerae используют О-сыворотку, ОR-сыворотку и типоспецифические сыворотки Инаба и Огава.

38. Биовары холерного вибриона, их отличия.

39. Особенности 7-й пандемии холеры. Седьмая пандемия началась в Индонезии, быстро охватила Филиппины, Китай, страны Индокитая, а затем другие страны Азии, Африки и Европы. Особенности этой пандемии включаются в том, что она;

во-первых, вызвана особым вариантом холерного вибриона — V. cholerae eltor, который до 1961 г. официально даже не признавали возбудителем холеры;

во-вторых, по продолжительности она превзошла все предшествующие пандемии;

в-третьих, она протекала в виде двух волн, первая из которых продолжалась до 1990 г., а вторая началась в 1991 г. и охватила многие страны Южной и Северной Америки, включая США, которые не знали холерных эпидемий с 1866 г. С 1961 по 1996 г. холерой в 146 странах переболело 3 943 239 человек.

40. Эпидемиология холеры.

Основным источником инфекции является только человек— больной холерой или вибриононоситель, а также загрязненная ими вода. Никакие животные в природе холерой не болеют. Способ заражения — фекалъно-оралъный. Пути заражения:

а) основной - через воду, используемую для питья, кутания и хозяйственно-бытовых нужд;

б) контактно-бытовой;

в) через пищу.

Все крупные эпидемии и пандемии холеры были связаны с водой. Холерные вибрионы обладают такими приспособительными механизмами, которые обеспечивают существование их популяций как в организме человека, так и в определенных экосистемах открытых водоемов.

Человек, больной холерой, выделяет возбудителя в огромном количестве— от 100 млн до 1 млрд на 1 мл испражнений, вибриононоситель выделяет 100—100 000 вибрионов в 1 мл, заражающая доза составляет около 1 млн вибрионов. Продолжительность выделения холерного вибриона у здоровых носителей составляет от 7 до 42 дней и 7—10 дней у переболевших. Более продолжительное выделение наблюдается крайне редко.

Особенностью холеры является то, что после нее, как правило, не остается длительного носительства и не формируется стойких эндемических очагов. Однако, как уже указывалось выше, в связи с загрязнением открытых водоемов сточными водами, содержащими в большом количестве органические вещества, моющие средства и поваренную соль, в летнее время холерный вибрион в них не только долго выживает, но даже и размножается.

Важное эпидемиологическое значение имеет тот факт, что холерные вибрионы 01-группы, как нетоксигенные, так и токсигенные. могут длительно сохраняться в различных водных экосистемах в виде некультивируемых форм.

41. Факторы патогенности холерного вибриона.

1.Подвижность.

2. Хемотаксис. С помощью этих свойств вибрион вступает во взаимодействие с эпителиоцитами. У мутантов Che- (утративших способность к хемотаксису) вирулентность значительно снижается, у мутантов Mob- (утративших подвижность) либо полностью исчезает, либо резко снижается.

3. Факторы адгезии и колонизации, с помощью которых вибрион прилипает к микроворсинкам и колонизирует слизистую оболочку тонкого кишечника. К факторам адгезии относятся муциназа. растворимая гемагглютинин/протеаза, нейраминидаза и др.

4. Холерный токсин - холероген.

5. Так называемые новые токсины, которые способны вызывать диарею, но не имеют генетического и иммунологического родства с холерогеном.

6. Дермонейротические и геморрагические факторы. Природа этих токсических факторов и их роль в патогенезе холеры изучены недостаточно.

7. Эндотоксин. Липополисахариды V. cholerae обладают сильным эндотоксическим свойством и вызывают общую интоксикацию организма.

43.Холероген, структура, механизм действия.

Главный из перечисленных факторов патогенности холерного вибриона — экзотоксин холероген (СТХ AB), который и обусловливает патогенез этой болезни. Молекула холероген а состоит из двух фрагментов — А и В.

Фрагмент А состоит из двух пептидов — А1 и А2 он обладает специфическим свойством холерного токсина и наделяет его качествами с уперантигена.

Фрагмент В состоит из 5 одинаковых субъединиц.

Он выполняет ове функции:

1) распознает рецептор (моносиалоганглиозид) энтероцита и связывается с ним;

2) формирует внутримембранный гидрофобный канал для прохождения субъединицы А. Пептио А₂ служит для связывания фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептио А1(АДФ-рибозилтрансфераза). Он взаимодействует с НАД, вызывает его гидролиз- образующаяся при этом АДФ-рибоза связывается с регуляторной субъединицей аденилатциклазы. Это ведет к угнетению гидролиза ГТФ. Возникающий комплекс ГТФ + аденилатциклаза вызывает гидролиз АТФ с образованием цАМФ. (Другой путь накопления цАМФ — подавление холерогеном фермента, гидролизующего цАМФ йо-5-АМФ). Проявление Функции гена ctxАВ, кодирующего синтез экзотоксина, зависит от функции ряда других генов патогенности, в частности генов tcp (кодирующих синтез токсин-контролируемых пилей адгезии- ТКпА), регуляторных генов toxR, wxS и taxT, генов пар (растворимой гемагглютенин/протеазы) и пей (нейраминидазы). Поэтому генетический контроль патогенности V. cholerctc имеет сложный характер.

43.Патогенез холеры, клинические формы заболевания.

Инкубационный период при холере варьирует от нескольких часов до 6 сут., чаще всего 2—3 дня. Попав в просвет тонкого кишечника, холерные вибрионы за счет подвижности и хемотаксиса к слизистой оболочке направляются к слизи. Чтобы проникнуть через нее, вибрионы вырабатывают ряд ферментов: нейраминидазу, протеазы, лецитиназу, которые разрушают вещества, содержащиеся в слизи, и облегчают продвижение вибрионов к эпителиальным теткам. Путем адгезии вибрионы прикрепляются к гликокаликсу^: эпителия и, теряя подвижность, начинают интенсивно размножаться, колонизируя микроворсинки тонкого кишечника, и одновременно вырабатывать большое количество экзотоксина-холерогена. Молекулы холерогена связываются с моносиалоганглиозидом Gm1 и проникают в мембрану клетки, где активируют аденилатциаклазную систему, а накапливающийся цАМФ вызывает гиперсекрецию жидкости, катионов и анионов Nа, НС2О, К, СI из энтероцитов, что и приводит к холерной диарее, обезвоживанию и обессоливанию организма. Различают три типа течения болезни:

1.бурное, тяжелое обезвоживающее диарейное заболевание, приводящее к смерти больного через несколько часов;

2. менее тяжелое течение, или понос без обезвоживания;

3.бессимптомное течение заболевания (вибриононосителъство).

44. Методы МБ диагностики холеры

Основным и решающим методом диагностики холеры является бактериологический. Материалом для исследования от больного служат испражнения и рвотные массы; на вибриононосителъство исследуют испражнения; у лиц, погибших от холеры, для исследования берут лигированный отрезок тонкого кишечника и желчный пузырь; из объектов внешней среды чаще всего исследуют воду открытых водоемов и сточные воды.

При проведении бактериологического исследования необходимо соблюдать следующие три условия:

1.как можно быстрее произвести посев материала от больного (холерный вибрион сохраняется в исщражнениях короткий срок);

2.посуда, в которую берут материал, не должна обеззараживаться химическими веществами и не должна содержать их следы, так как холерный вибрион к ним очень чувствителен;

3.исключить возможность загрязнения и заражения окружающих.

Серологическая диагностика холеры имеет вспомогательный характер. С этой целью может быть использована реакция агглютинации получше— определение титра вибриоцидных антител или антитоксинов (антитела к холерогену определяют иммуноферментным или иммунофлуоресцентным методами)

45.Ускоренная диагностика холеры..

Предложены различные варианты ускоренной диагностики. наилучшим из них является люми несцентно-серологический метод Он позволяет обнаружить холерный вибрион непосредственно на иисследуемом материале (или после предварительного подращивания, двух пробирках с 1 %-ной ПВ. а одну из которых добавляют холерный фаг) в течение 1, 5—2 ч.

Для ускоренного обнаружения холерного вибриона Нижегородским ПЭМ предложен набор бумажных индикаторных дисков, состоящих из 13 биохимических тестов (оксидаза, индол, уреаза, лактоза, глюкоза, сахароза, манноза, арабиноза. маннит, инозит, аргинин)которые позволяют дифференцировать представителей рода Vibrio от родов Aeromonas, Plexiomonas, Pseitdomonas, и от семейства Enterpbacteriaceae.

Для быстрого обнаружения холерного вибриона в испражнениях и в объектах вншней среды может быть использована РПГА с антительным диагностикумом. С целью выявления некультивируемых форм холерного вибриона в объектах внешней среды применяют только методу цепной полимеразной реакции.

46.Методы определении тохссигенности холерного вибриона.

47.Принципы лечения больных с острыми диареями на примере холеры.

Леченуе больных холерой должно заключаться прежде всего регидратации и восстановлении нормального водно- солевого обмена. С этой целью рекомендуется использовать солевые растворы, например такого состава: NаCI— 3, 5; ИаНСОз — 2, 5; КСI - ], 5 и -глюкоза - 20, 0 г на 1л воды. Такое патогенетически обоснованное мнение в сочетании с рациональной антибиотикотерапией позволяет снизить летальность при холере до 7 % и менее.

48. Специфическая профилактика холе ы.

Для создания искусственного иммунитета были предложены-розничные вакцины, в том числе из убитых штаммов И паба и Огава; холероген-анатоксин оля поОкожного применения и энтеральная химическая бивалентная вакцина, состоящая из анатоксина и соматических антигенов серотипов Инаба и Огава, так кик перекрестный иммунитет не формируется. Однако продолжительность поствакцинального иммунитета составляет не более б—8 мес., поэтому прививки проводят только по эпидемическим показаниям. В очагах холеры неплохо зарекомендовала себя антибиотикопрофилактика, в частности тетрациклином, к которому холерный вибрион проявляет высокую чувствительность. С такой же целью могут быть использованы и другие эффективные против V. cholerae антибиотики.