![]() Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Количественное определение белков методом спектрофотометрии с использованием красителя малахитового зеленого
Около 1, 0095 г (точная навеска) лиофилизированного маточного молочка поместили в мерную колбу на 100 мл. Довели водой до метки. Взяли 1 мл полученного раствора и поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл. Затем добавили 1 мл малахитового зеленого и довели водой до метки. Спектр поглощения полученного раствора измеряли на спектрофотометре СФ – 56, в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. Параллельно проводили такое же определение со стандартным раствором альбумина, содержащего 9, 98% белка. Максимальная оптическая плотность для маточного молочка наблюдалась при 343 нм (Рисунок 2) и при 342 нм для стандартного раствора альбумина (Рисунок 3).
Рисунок 2 - Спектр поглощения маточного молочка с малахитовым зеленым Рисунок 3 - Спектр поглощения стандартного раствора альбумина с малахитовым зеленым
Содержание белка рассчитывали по формуле (2):
гдеАх – оптическая плотность исследуемого раствора; Аст – оптическая плотность раствора альбумина с концентрацией 9, 98%; ах – навеска лиофилизированного маточного молочка; С% – концентрация стандартного раствора альбумина; Wx(1), (2), Wст.(1), (2) – объемы мерных колб; Vст. – объем аликвоты стандартного раствора альбумина; Vх – объем аликвоты полученного раствора маточного молочка. Результаты количественного определения белка в лиофилизированном маточном молочке методом спектрофотометрии с использованием красителя малахитового зеленого представлены в таблице 4.
Таблица 4. Результаты количественного определения белка с использованием красителя малахитового зеленого в лиофилизированном маточном молочке
t – коэффициент Стьюдента при числе степеней свободы f = n – 1 и двухсторонней доверительной вероятности Р (0, 95). Количественное определение белков методом спектрофотометрии с использованием красителя малахитового зеленого также было проведено для нативного маточного молочка. Максимальная оптическая плотность для нативного маточного молочка наблюдалась при 352 нм. Результаты количественного определения представлены в таблице 5.
Таблица 5. Результаты количественного определения белка с использованием красителя малахитового зеленого в нативном маточном молочке
t – коэффициент Стьюдента при числе степеней свободы f = n – 1 и двухсторонней доверительной вероятности Р (0, 95).
|