Определение количества эритроцитов при помощи камеры Горяева.

Для подсчета форменных элементов необходимо ознакомиться со счетной камерой.

Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеется 4 желобка. Между ними образуются 3 узкие пластинки. Средняя пластинка ниже боковых на 0, 1 мм и разделена пополам поперечным желобом. По обе стороны желобка расположены сетки. Т. к. высота боковых пластинок на 0, 1 мм больше средней, то при наложении на них покровного стекла над сеткой образуется камера глубиной в 0, 1 мм.

Камеру Горяева поместить под микроскоп и рассмотреть сначала под малым, а затем под большим увеличением. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15х15). Каждый третий квадрат разделен дополнительно поперечно и продольно линиями на 16 маленьких квадратиков.

Таких больших квадратиков, разделенных на маленькие, в сетке 25. Сторона маленького квадратика равняется 1/20 мм, площадь 1/20 х 1/20 = 1/400² мм; объем малого квадратика равен 1/400 х 1/10 = 1/4000 мм³.

Знакомятся со специальным смесителем—меланжером, предназначенным для смешивания крови с разводящей жидкостью. Меланжер представляет собой пипетку с ампулообразным расширением. В ампуле находится стеклянная бусинка для лучшего размешивания крови. На капилляре нанесены 2 метки: 0, 5 и 1; третья метка стоит за ампулообразным расширением – 101. Эта метка указывает, во сколько раз объем ампулы больше объема капилляра.

Перед началом работы протирают покровное стекло, накладывают его на счетную камеру и несколько раз двигают вверх и вниз все время плотно прижимая его, до появления ньютоновских колец. В спец. чашки наливают разводящую жидкость для крови – 3, 5% р-р поваренной соли. Обрабатывают палец спиртом, затем эфиром. Делают прокол скарификатором, прожженным над пламенем спиртовки докрасна. Первую каплю снимают ватой. В смеситель набирают кровь до метки 0, 5. затем до метки 101– 3, 5% р-р NaCl (разведение в 200 раз). В гипертоническом растворе хлорида эритроциты слегка сморщиваются и будут лучше видны. Концы заполненного меланжера зажимают 1 и 3 пальцами и в течение 1 мин. встряхивают. После тщательного перемешивания крови, 1– 2 капли из меланжера выпускают на вату и затем заполняют счетную камеру, прикасаясь концом меланжера к краю покровного стекла. Если капля слишком велика, то жидкость может попасть на боковые пластинки камеры и высота слоя будет больше 0, 1 мм.

В этом случае камеру следует промыть дистил. Н₂О, насухо вытереть марлей и заполнить снова.

Разведенную кровь следует еще раз перемешать. Заполненную камеру помещают под микроскоп и приступают к подсчету.

Считать эритроциты удобней при большом увеличении. Подсчеты эритроцитов ведут в 5-ти больших квадратах, расположенных в разных местах сетки. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствуются правилом Егорова: относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе, в данном квадратике не обсчитываются. Количество эритроцитов вычисляют по формуле

где Х – искомое число,

А – число эритроцитов в 5-ти больших квадратах или в 80 маленьких.

- объем малого квадратика;

1: 200 – разведение крови;

Х = число эритроцитов в 1 мкл крови.

2. Определение количества эритроцитов фотоэлект­рическим эритрогемометром.

Цель опыта: ознакомиться с автоматизированным ме­тодом подсчета эритроцитов.

Ход работы. Определение чис­ла эритроцитов в крови основанона фотоэлектрическом измерении степени поглощения света взвесью эритроцитов. При определении числа эритроцитов измерения ведутся в инфра­красной части спектра. Производится начальная установка прибора. Для этого оправу с рабочими фильтрами поставить в нижнее положение до упора. В гнездо для кювет вставить установочный фильтр «У». Переключатель «Э – Г» перевести в положение «Э». Отсчетный диск с помощью ручки поставить в такое положение, чтобы риска совпала с делением градусной шкалы на «0», значение которой в градусах выгравировано на верхней торцовой поверхности установочного фильтра против буквы «Э». Ручкой «Уст. нуля» установить стрелку микроамперметра на «0» шкалы. Затем приготовить пробу: пипеткой на 15 см³ налить 14 см³ 3, 5% р-ра NaCl в чистую пробирку и сюда же ввести 20 мм³ исследуемой крови. Содержимое в пробирке перемешать, не встряхивая. После этого заменить фильтр «У» кюветой «Э» с приготовленной смесью. Опреде­ление начинать через 50–60 сек после заполнения кюветы. При этом стрелка микроамперметра отклонится от «0» шкалы. Вращая ручку отсчетного диска, надо добиться возвращения стрелки микроамперметра на «0». На шкале прочесть ответ в млн эритроцитов в мм³.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ:

1. История развития представления об эритропоэзе.

2. Особенности эритрона при старении.

3. Метаболизм эритроцитов.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1. Количество эритроцитов в общем анализе крови у обследуе­мого составило 5, 9. 10⁶ в 1 мкл. Исследование проводилось сразу после возвращения из отпуска. С чем это может быть связано?

2. Анализ крови показал, что диаметр эритроцитов – 5 микрон. Что это означает? Чем может быть вызвано это явление?

3. Оперируемому больному назначили вливание цельной крови. Какая цель преследуется? Какие функции выполнит кровь?

4. Когда целесообразнее ввести эритроцитарную массу: кровопотеря, заболевание крови, селезенки, недостаточность функ­ции красного костного мозга.

5. Известно, что диаметр капилляра меньше диаметра эритроцита. Почему нормальный эритроцит свободно проходит че­рез него?

6. Как изменится гематокрит при переливании кровезаменителей?

7. После аварии у пострадавшего в общем анализе крови – 6, 5.10⁶ эритроцитов в 1 мкл. Что целесообразнее вливать: эритроцитарную массу, нативную кровь или плазму крови? 8. В мазке определили эритроциты нормального диаметра, бледно окрашенные. О чем это говорит?

Сборник «Контрольные вопросы по курсу нормальной физиологии».

Раздел «Физиология крови». Задачи № 1-33.