Выполнение ИФА

1. Возьмите ваш 12-луночный стрип. Подпишите первые три лунки «+» (это будет положительный контроль), следующие три лунки «-» (отрицательный контроль). Следующие шесть лунок предназначаются для вашего опыта и опыта вашего напарника по работе (по три), подпишите их вашими инициалами. Например, Митя Гиляров и Аня Лопатина подписали бы свои лунки так:

1. Для связывания антигена:

а. Чистым носиком перенесите по 50 мкл положительного контроля из фиолетовой пробирки в первые три («+») лунки.

б. Чистым носиком перенесите по 50 мкл отрицательного контроля из синей пробирки в следующие три («-») лунки.

в. Вместе с вашим напарником перенесите по 50 мкл ваших образцов в подписанные вашими именами лунки. Обязательно используйте чистый носик для каждого образца!

1. Подождите 5 минут, для того чтобы все белки в составе образца связались с плашкой.

1. Промойте лунки:

А. Переверните стрип, положите его на пачку бумажных полотенец и легонько постучите по дну. Убедитесь, что брызги не попали обратно в лунки.

Б. Выкиньте верхнее полотенце.

В. Чистой пипеткой заполните каждую лунку буфером для промывки из стакана, стараясь не переливать его через стенки. Для всех стадий промывки можно использовать одну и ту же одноразовую пипетку.

Г. Опять положите стрип на пачку полотенец и постучите по дну.

Д. Выкиньте 2-3 верхних полотенца (которые промокли).

1. Повторите всю процедуру промывки (шаг 7) еще раз.

1. Чистым носиком добавьте по 50 мкл раствора первичных антител («П.А».)из зеленой микропробирки во все 12 лунок.

1. Подождите 5 минут, чтобы антитела могли связаться с антигеном

1. Промойте лунки, повторив процедуру промывки ДВА раза.

1. Чистым носиком добавьте по 50 мкл раствора вторичных антител («В.А.») из оранжевой пробирки во все 12 лунок.

1. Подождите 5 минут, чтобы вторичные антитела могли связаться с первичными.

1. Промойте лунки, повторив процедуру промывки ТРИ раза.

1. Чистым носиком добавьте по 50 мкл субстрата пероксидазы («Субстрат») из коричневой пробирки во все 12 лунок.

1. Подождите 5 минут. Наблюдайте за тем, что получилось, и запишите ваши результаты.