Иммуноферментный анализ (ИФА)

Широкое применение находит твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Он основан на том, что белки прочно адсорбируются на пластинках, например из поливинилхлорида. Один из наиболее распространенных на практике вариантов ИФА основан на использовании меченных ферментом антител той же специфичности. К носителю с иммобилизованными ат добавляют раствор с анализируемым аг. В процессе инкубации на твердой фазе образуются специфические комплексы аг-ат. Затем носитель отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют гомологичные антитела, меченные ферментом, которые связываются со свободными валентностями антигена в составе комплексов. После вторичной инкубации и удаления избытка этих меченных ферментом антител определяют ферментативную активность на носителе, величина которой будет пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена.

При другом варианте ИФА к иммобилизованному аг добавляют исследуемую сыворотку. После инкубации и удаления несвязавшихся компонентов с помощью меченных ферментом антиглобулиновых антител выявляют специфические иммунокомплексы. Данная схема является одной из наиболее распространенных при постановке ИФА.

*

+

Специфические Исследуемый материал- Специфические антитела Субстрат

антитела возбудитель с пероксидазой для пероксидазы

*

+

Специфический Исследуемая АГС, меченная Субстрат для антиген сыворотка пероксидазой пероксидазы

Контроль:

позитивный - иммунная сыворотка, меченная пероксидазой + субстрат - 2 лунки;

негативный - нормальная сыворотка + субстрат - 2 лунки.

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

Ответить на вопросы:

1) Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?