Принципы отбора проб

Отбор проб для санитарно-микробиологического исследования предметов, аппаратуры, рабочих поверхностей проводится с по­мощью следующих методов:

— смыв с использованием стерильного тампона или салфетки или ополаскивания мелких предметов и внутренней поверх­ности флаконов;

— контактный метод — метод «отпечатков».

Метод смывов. При отборе проб с крупных плоскостей (повер­хности рабочих столов, стен, ванн и др.) используют стерильные ватные или марлевые тампоны размером 2x2 см, не более 2 слоев. Перед употреблением их смачивают физиологическим раствором хлористого натрия или питательной жидкой средой.

Тампоны вмонтированы в пробирки, на дно которых наливается смачивающая жидкость (физиологический раствор, среда Кесслера) в объеме 3-5 мл.

На исследуемую поверхность для ограничения площади обсле­дования накладывают рамку-шаблон площадью 100 см² (10x10 см), изготовляемую из проволоки диаметром 3-5 мм. Перед взятием пробы шаблон стерилизуют пламенем горелки.

Для взятия пробы тампон опускают до дна пробирки, затем влажным тампоном производят смыв и снова погружают его в жидкость. Перед использованием салфеток их также смачивают стерильной жидкостью и после обтирания ими поверхностей пере­носят в колбу для последующего исследования.

Мелкие предметы (пробки, прокладки и т. д.) погружают непос­редственно в питательную среду (10 мл), встряхивают в течение 10 мин. Полученную смывную жидкость используют для посева.

Для забора смывов с рук: увлажненной стерильной марлевой салфеткой размером 5x5 см протирают руки обследуемого, начиная с менее загрязненных участков кожи (тыльная часть ладони, ла­донь, межпальцевые промежутки, ногтевые ложа и подногтевые пространства). Салфетки помещают в колбы с увлажняющей жид­костью и транспортируют в лабораторию с соответствующим сопро­водительным документом.

Смыв с халатов производится с площади 100 см². Обязательно исследуются передняя сторона халата и нижние части рукавов.

Смывы с аптечной посуды проводят путем ополаскивания буты­лок, флаконов и т. д. — 10-30 мл стерильного физиологического раствора с последующим мерным высевом. Одновременно исследу­ется не менее 3-5 емкостей.

Метод отпечатков. Метод применяется для определения мик­робной контаминации ровной гладкой поверхности (как горизон­тальной, так и вертикальной).

Кусочки марли в виде кружков диаметром 3—6 см, мембранные фильтры или полоски фильтровальной бумаги (все должно быть стерильным!) помещают в чашку Петри и заливают расплавленной плотной средой (3%-й МПА или среда Эндо двойной концентра­ции). После остывания стерильным пинцетом забирают кружочки марли, полоски бумаги или фильтры, накладывают стороной, про­питанной средой, на исследуемую поверхность, осторожно прижи­мая пинцетом. Затем переносят в стерильную чашку Петри нижней поверхностью вверх для последующей инкубации в термостате.

Метод отпечатков выгоден тем, что позволяет непосредственно обнаруживать загрязнение объектов.

Определение общего микробного числа

ОМЧ горизонтальных и вертикальных поверхностей, халатов, рук определяют путем мерного высева жидкости или питательной среды, которой производили смыв.

В пробирках с тампонами или в колбах, содержащих салфетки (после проведения смывов), общий объем жидкости доводят до ко­нечного объема, добавляя стерильный изотонический раствор хло­рида натрия, чтобы получилось исходное разведение 1: 10. После интенсивного 2-3-минутного встряхивания готовят десятикратные разведения. В зависимости от предполагаемой степени загрязнен­ности посевы производят из нескольких разведений.

Заключение по общей микробиологической чистоте дают на ос­новании подсчетов по формуле:

М = n^. 10 / S, (дробь)

где М — общее микробное число (КОЕ); п — количество колоний в 1 мл исходного разведения смыва (КОЕ); 10 — количество смачи­вающей жидкости, мл; S — площадь, с которой произведен смыв, см².

При оценке санитарно-гигиенического состояния предметов оби­хода и оборудования можно ориентироваться на критерии, разработанные и предложенные ЛВ Георгиевой (1977).

При определении ОМЧ вспомогательных материалов смывную жидкость в количестве 1 мл засевают в 2 чашки Петри с мясо-пептонным агаром, предварительно расплавленным и остуженным до 40 " С, с последующей инкубацией в термостате в течение 18-24 ча­сов при t =37 °С.

Количество микроорганизмов не должно превышать 150 КОЕ с 3 флаконов (колб, цилиндров и т. д.), 5 пробок, 5 прокладок и т. д.

Определение титра бактерий группы кишечной палочки (БГКП) в смывах

Общая характеристика БГКП:

— грамотрицательные бактерии;

— не образуют спор;

— ферментируют лактозу до кислоты и газа (КГ);

— ферментируют глюкозу до КГ;

— не обладают оксидазной активностью.

Выделяются в окружающую среду только из кишечника чело­века и теплокровных животных.

К бактериям группы кишечной палочки (БГКП) относятся 4 представителя семейства энтеробактерий:

— Escherichia coli;

— Klebsiella spp.;

— Enterobacter spp.;

— Citrobacter spp.

При предполагаемой малой степени фекального. загрязнения предварительно производят посев смыва на среду обогащения (сре­ду Кесслера, глюкозо-пептонную среду) при обнаружении БГКП контактным методом или используют среду Эндо, расчет числа БГКП ведут на 1 см2 поверхности иссле­дуемого предмета.

Идентификация выделенных культур БГКП ведется как при исследовании питьевой воды.

Наличие бактерий группы кишечной палочки в смывах не до­пускается.

Исследование смывов на присутствие патогенных бактерий (ста­филококки, сальмонеллы, протеи, синегнойная палочка) проводят по общепринятым методикам санитарно-микробиологического кон­троля пищевых продуктов (3. Н. Кочемасова и др. Санитарная мик­робиология и вирусология. 1987).

Наличие патогенных кишечных бактерий, а также стафилокок­ков и синегнойной палочки в смывах не допускается.

(!!!) Практическая работа

Задание 1

В больничной аптеке проведено исследование оборотной аптеч­ной посуды, возвращающейся из отделений (инфекционного, легоч­ного, гнойной хирургии) до и после ее обработки дезраствором.

Согласно Приказу № 309, такая посуда до мытья погружается в один из дезрастворов:

1%-й активированный раствор хлорамина на 30 минут или

свежеприготовленный 3%-й раствор перекиси водо­рода на 80 минут с последующим мытьем, или

Если дезинфекция прово­дится одновременно с мытьем, для чего посуду погружают:

— в 1%-й (0, 5%-й) раствор хлорцина на 120 минут;

— в 0, 2%-й (0, 1%-й) раствор ДП-2 на 120 минут;

— в 3%-й раствор перекиси водорода + 0, 5%, моющего средства.

В данной аптеке обрабатывают 1%-м активированным раствором хлорамина.

Данные смывов представлены на чашках с питательными среда­ми до и после обработки раствором хлорамина: на МПА для опре­деления общей микробной обсемененности, на среде Эндо для оп­ределения БГКП, на среде Сабуро для определения плесневых грибов и грибов рода Candida, на желточно-солевом агаре для оп­ределения стафилококков.

Высевы сделаны мерно из 10-кратных разведений.

Оцените качественный и количественный состав микрофлоры, полученной до и после обработки, и сделайте заключение об эф­фективности предстерилизационной подготовки оборотной посуды в данной аптеке.

Дайте свои рекомендации по улучшению качества обработки.

Какие последствия могут возникнуть при использовании посуды после столь неэффективной обработки и почему?

Задание 2

Из дистиллированной воды до стерилизации (вода взята из кол­бы) выделена кишечная палочк

Параллельно с водой исследован смыв с внутренней поверхно­сти водоприемника, с рук сотрудника, работающего с дистиллято­ром. Из обоих объектов также выделена кишечная палочка.

Для решения вопроса об источнике контаминации воды было проведено колицинотипирование выделенных кишечных палочек.

Определите колицинотипы, данные внесите в таблицу и дайте заключение.

Задание 3

Методом смыва обследован стол для приготовления инъекцион­ных растворов. Обследование проведено на выявление БГКП, синегнойной палочки, стафилококка, дрожжевых и плесневых гри­бов. Для выявления БГКП посевы сделаны на среду Эндо, для вы­явления стафилококка — на желточно-солевой агар, для выявле­ния синегнойной палочки — на МПБ, для выявления дрожжевых и плесневых грибов — на среду Сабуро.

Изучите посевы, определите, выделены ли представители пере­численных групп микроорганизмов.

Предложите мероприятия по предотвращению в последующем попадания патогенных и условно-патогенных бактерий на поверх­ность стола для приготовления инъекционных растворов.

Микробиологическое исследование нестерильных лекарственных форм

(???) Контрольные вопросы

1. Основные группы нестерильных лекарственных препаратов.

2. Источники попадания микроорганизмов в нестерильные лекар­ственные формы.

3. Поведение микроорганизмов (сапрофитов, условно-патогенных и патогенных) в лекарственной форме или субстрате.

4. Стадии размножения микроорганизмов в жидких, сыпучих, плотных субстанциях и лекарственных формах.

5. Методы микробиологического контроля субстанций и несте­рильных лекарственных форм:

а) выявление энтеробактерий;

б) выявление синегнойной палочки;

в) выявление золотистого стафилококка;

г) выявление грибов (дрожжевых, дрожжеподобных и плесне­вых).

6. Методы и пути предупреждения микробной контаминации суб­станций и нестерильных лекарственных форм.

(!!!) Задания для практической работы

1. Работа с ситуационными задачами по теме, анализ представлен­ных в задаче результатов, выработка заключения, разработка профилактических мер по предупреждению микробной конта­минации.

2. Знакомство с требованиями ГФ XI и Изменений к ГФ XI по группам нестерильных лекарственных форм.

Исходные субстанции для приготовления нестерильных лекар­ственных препаратов часто контаминированы большим количе­ством разнообразных микроорганизмов. Так, среди субстанций и препаратов высокую степень микробной загрязненности имеют: тальк, окись магния, папаверин, фенобарбитал (люминал), кофеин, порошки глюкозы, амидопирина и др. Исследование микробной контаминации этих объектов выявило результаты, представленные в табл. 1.

Таблица 1

Микробная обсемененность лекарственных препаратов, субстанций и др.

Кроме исходной субстанций и сырья, на микробную чистоту лекарственного препарата влияют микроорганизмы, находящиеся на различном оборудовании, с помощью которого производится препарат (весы, дозирующее устройство, устройство для закупорки флаконов и т. д.), вспомогательные материалы и инструменты (фильтры, шпатели, прокладки и т. д.), посуда, воздух производственных помещений, дистиллированная вода, одежда и руки персонала и т. д. Последствия этой контаминации были рассмотрены в разделе «Асептика».

В табл. 2 показано, каким образом микроорганизмы действуют на химические структуры лекарственных препаратов.

Таблица 2

Влияние микроорганизмов на качество лекарств

Микроорганизмы, попадая в субстанцию или жидкую лекарственную форму, мазь, мазевую основу и т. д., размножаются с разной скоростью (рис. 1). Типичную кривую размножения микроорганизмов в жидкой среде можно разделить на 4 основные стадии.

I. ЛАГ-фаза (4-5 часов) — фаза приспособления микробов к новой среде. Размножения не происходит, происходит рост (увеличение размеров) микробных клеток за счет накопления белка; часть микробов может погибнуть, не приспособившись к новым условиям.

П. ЛОГ-фаза (5-6 часов) — фаза логарифмического роста. Происходит бурное размножение микробов в среде. Микроорганизмы физиологически наиболее активны, выделяют в среду большое количество продуктов метаболизма. Гибели микробов в этой фазе практически не происходит.

III. Стационарная фаза (5-7 часов) — кривая размножения переходит в линию, параллельную нижней оси. Процессы метаболизма идут активно, и среда насыщается продуктами обмена, ухудшаются условия для нормального функционирования микробов, идут процессы отмирания. Число вновь образующихся и отмирающих клеток практически эквивалентно, поэтому кри вая размножения и идет горизонтально.

Рис. 1. Кривая роста микроорганизмов

IV. Фаза ускоренной гибели микробов (более 10 часов) — в среде практически не остается источников питания. Микробы резко меняют свои морфологические, физиологические характеристики, что приводит к их гибели.

Эта кривая может видоизменяться в зависимости от вязкости, плотности субстрата, количества в нем воды, консервантов, но принцип сохраняется. Каждая из указанных стадий характеризует то или иное состояние системы «микроорганизм — лекарственный препарат» и тем самым определяет качество препарата в данный временной момент.

Если система «микроорганизм — лекарственный препарат» находится в III или IV стадии, то в зависимости от состава ингредиентов и попавшей в нее микрофлоры могут наблюдаться изменения вкуса, цвета или запаха (органолептические характеристики), выделение газов, появление осадка, хлопьев, плесени или даже изменение консистенции. В этом случае выбраковка идет по органолептическим свойствам.

Наиболее часто подобные изменения отмечается в водных настоях, отварах. При добавлении консервантов этот процесс может удлиниться во времени в несколько раз. Если микробная контаминация происходит в вязких субстанциях и лекарственных формах (мази, мазевые основы и др.), то микробная диффузия резко затрудняется и формируются локальные очаги размножения микробов в виде гнездных очагов (изменение цвета, консистенции, появление плесени и т. д.).

Гораздо сложнее обстоит дело с I и II стадиями. Проблема состоит в том, что бактерии не успевают за это время столь значительно изменить качества субстанции или лекарственного препарата, чтобы это можно было определить органолептически. Именно с I и особенно II стадий развития пирогенные свойства возникают у инъекционных растворов. Нестерильные лекарственные препараты меняют свою лечебную эффективность, приобретают свойства токсичности или инфективности, снижается их способность к длительному хранению. Эти процессы на I и II стадиях не сопровождаются внешними, органолептически определяемыми изменениями.

Все процессы, происходящие на I-IV стадиях развития микроорганизмов в субстрате, могут ускоряться на фоне нарушения санитарных нормативов, микроклимата помещений (температура, влажность, содержание пылевых частиц и т. д.). Например, повышение влажности и температуры воздуха способствует отсыреванию порошков, таблеток с последующей активацией в них жизнедеятельности микроорганизмов.

Растворы в бюреточных установках (концентраты) почти всегда содержат большое количество микроорганизмов (споровые, неспоровые палочки, стафилококки, дрожжевые грибы, сарцины и др.). Концентраты из бюреточной установки в несколько раз более обсеменены, чем исходные растворы, что указывает на нарушение правил санитарного режима эксплуатации бюреточных установок.

В мазевых основах микрофлора может сохраняться длительное время. Так, кишечная палочка, золотистый стафилококк при температуре +4 °С сохраняются в вазелине, белом ланолине и других основах до 60 дней.

Нормативы микробной обсемененности нестерильных лекарственных средств и перечень патогенных бактерий, которые не должны присутствовать в НЛС, представлены в Изменениях к ГФ XI.

Помимо НЛС, в Изменения внесены микробиологические требования к субстанциям и вспомогательным материалам. Учитываются многие параметры: возрастные категории лиц, для которых готовится НЛС; пути введения препарата; происхождение компонентов НЛС (синтетические, природные, животного, растительного и т. д. происхождения).

Требования к приготовлению НЛС и микробиологические нормативы регламентируются Приказом МЗ РФ № 309 (п. 9 и приложение № 12).

Из числа патогенных бактерий, вызывающих заболевания у человека, в НЛС не должны встречаться кишечная палочка, сальмонеллы или вообще представители семейства энтеробактерий (в зависимости от категории препарата и его назначения); из гноеродных — золотистый стафилококк и синегнойная палочка. На этом основании и составляется схема выделения и идентификации микроорганизмов из нестерильных лекарственных средств (рис. 2).

При проведении исследования на микробиологическую чистоту необходимо определить антимикробную активность лекарственного препарата. Определение антимикробного действия препарата проводят при отсутствии явных указаний на наличие консерванта или антимикробного вещества.

Используемые в методике тест-штаммы указаны в разделе «Микробиологический контроль стерильности лекарственных препаратов» данного методического пособия.

Методика

Рис. 2. Схема выделения и идентификации микроорганизмов из нестерильных лекарственных средств

2-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Candida albicans + (10: 1) буферный раствор и лекарственное средство; г=20-25°С, 72 часа;

3-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Pseudomonas aeruginosa + (10: 1) среда № 8 и лекарственное средство; t=35-37 °C, 48 часов;

4-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Staphylococcus aureus + (10: 1) среда № 3 и лекарственное средство; £ =35-37 °С, 48 часов;

5-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Е. coli + (10: 1) среда №8 и лекарственное средство; t=35-37°C, 48 часов.

Контроли: пробирки с теми же средами, но без лекарственного средства + тест-штаммы (для оценки жизнеспособности тест-штаммов).

Рис. 2. Схема выделения и идентификации МО из НЛФ

Отсутствие роста в опытных пробирках свидетельствует об антибактериальном действии лекарственного препарата.

При наличии антибактериального действия при испытании на микробиологическую чистоту препарат разводится в 100-200 раз и засевается в данном разведении мерно в необходимые питательные среды или применяются инактиваторы. указанные в фармакопейных статьях. При подсчете колоний необходимо учитывать разведение препарата.

Таблица

Микробиологическая чистота готовых лекарственных средств (ГЛС) (изменения к ГФ XI)

(при отсутствии других требований в частных фармакопейных статьях)

Помимо микробной контаминации (ОМЧ и наличие определенных патогенных МО) применяются другие виды микробиологических исследований, представленные на схеме.

(!!!) Практическая работа

Задание 1

Из косметического кабинета поступила жалоба на недоброкачественную партию косметической мази на ланолиновой основе: гнездное разжижение, неспецифический неприятный запах.

Мазь была исследована в бактериологической лаборатории на микробную чистоту согласно нормативам и требованиям ГФ XI: мазь в разведении 1: 10 в количестве 1 мл засеяна на плотную среду № 1, в количестве 0, 5 мл — на плотную среду Сабуро, в жидкие среды накопления № 1, № 2 (Сабуро), № 3 (для выявления энтеробактерий), № 8 (для выявления стафилококков и синегнойной палочки) по 0, 5 мл. После 5-суточной инкубации при 37 " С на плотных питательных средах выявлен рост колоний, а на жидких — равномерное помутнение на средах № 1, № 2, № 8. Из среды № 8 сделан высев на среду № 9 (для выявления пигмента пиоцианина у синегнойной палочки) и на желточно-солевой агар для выделения стафилококков.

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте свое заключение по микробной чистоте данного препарата.

Какой микроб выявлен в данном препарате?

Откуда он мог попасть в мазь?

Как можно установить источник контаминации мази?

Задание 2

В бактериологическую лабораторию для оценки микробиологической чистоты поступил сироп «Бронхолитин», содержащий консервант (этиловый спирт).

Препарат был исследован согласно нормативам и требованиям ГФ XI. Разведение препарата 1: 100 было засеяно на плотные среды № 1 в количестве 1 мл и № 2 (Сабуро) — 0, 5 мл. В количестве 0, 5 мл данное разведение препарата засеяно в жидкие среды накопления: №1, №2 (Сабуро), №3 (для накопления энтеробактерий) и № 8 (для накопления стафилококков и синегнойной палочки).

После 5-суточной инкубации на питательных средах выявлен рост только на среде № 1 (жидкой и плотной).

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте заключение по микробной чистоте данного препарата.

Почему при исследовании данного препарата использовано 100-кратное разведение?

Задание 3

В бактериологическую лабораторию поступили таблетки тетрациклина для исследования на микробиологическую чистоту. Препарат исследовался с соблюдением требований и нормативов ГФ XI.

После предварительного разведения 1: 400 тетрациклин в количестве 1 мл был засеян на плотную среду № 1, в количестве 0, 5 мл — на плотную среду № 2 (Сабуро) и по 0, 5 мл в жидкие среды накопления № 1, № 2 (Сабуро), № 3 (для накопления энтеробактерий) и № 8 (для накопления стафилококков и синегнойной палочки).

После 5-суточной инкубации был выявлен рост в виде колоний только на плотной среде Сабуро и в виде равномерного помутнения также только в среде № 2 (Сабуро).

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте свое заключение по микробной чистоте данного препарата.

Какие микроорганизмы выделены из данного препарата? Чем можно объяснить их присутствие в тетрациклине?

Почему при исследовании данного препарата использовано 400-кратное разведение?

Задание 4

В бактериологическую лабораторию на исследование микробиологической чистоты поступил сухой экстракт корня солодки. Исследование проводилось с соблюдением требований и нормативов ГФ XI.

После предварительного разведения в 10 раз препарат в количестве 1 мл был засеян на плотную среду № 1, в количестве 0, 5 мл — на плотную среду № 2 (Сабуро) и в количестве 0, 5 мл — на жидкие среды накопления: № 1, № 2 (Сабуро), № 3 (для накопления энтеробактерий) и № 8 (для накопления стафилококков и синегнойных палочек).

После 5-суточной инкубации при 37 °С на плотных питательных средах обнаружен рост микроорганизмов в виде колоний и равномерное помутнение жидких сред накопления: № 1, 2, 3. Из среды № 3 сделан высев на среду Эндо (№ 4 — для выявления кишечной палочки и других энтеробактерий) и на висмут-сульфитный агар (№ 5 — для выявления сальмонелл). Через сутки на среде Эндо отмечен рост лактозо-положительных, грамотрицательных, оксидазо-негативных микроорганизмов.

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте свое заключение по микробной чистоте данного препарата.

Какой микроорганизм выделен из данного препарата?

Каким путем выделенный микроб мог попасть в препарат?

Как можно определить источник контаминации экстракта данным микроорганизмом?

Определение количества жизнеспособных клеток в препаратах из микробов

Материал для исследования: препарат «Бактисубтил».

Цель исследования: определение количества жизнеспособных клеток бактерий штамма Bacillus cereus IP 5832.

1 капсула должна содержать не менее 1 млрд. зародышевых спор!

Методика исследования. В стерильных условиях содержимое одной капсулы вносится в мерный объем стерильного физиологического раствора, из которого готовят последовательные десятикратные или стократные разведения (от 10" 1 до 10~8). Из разведения 10" 8 делается мерный высев в количестве 1 мл на 2—3 чашки Петри с МПА и заливается 20-30 мл расплавленного и охлажденного до 40-45 °С МПА. Чашки помещаются в термостат на 18-24 часа (t=37°C).

После инкубации производится подсчет колоний на всех чашках и определяется среднее арифметическое, которое является основным для вычисления количества жизнеспособных спор. Для этого найденное среднее количество спор необходимо умножить на разведение.

(!!!) Практическая работа. На исследование поступили 2 серии препарата «Бактисубтил». После выполнения соответствующих разведений, посевов и инкубации в термостате на МПА выявлен рост колоний бацилл.

Произведите подсчет бацилл для каждой серии препарата, сделайте заключение о соответствии нормативам данной лекарственной формы.

Определение идентичности Lactobacillus bulgaricus в препарате «Гастрофарм»

и наличия энтеробактерий (ФС № 42-368-86)

Материал для исследования: таблетки «Гастрофарм».

Цель исследования

1. Микроскопическое определени е (на основании морфологических и тинкториальных свойств) микроорганизмов Lactobacillus bulgaricus.

2. Определение энтеробактерий в препарате.

Методика исследования

I этап. Растирают в стерильной ступке 10 таблеток, заливают стерильным физиологическим раствором. Бактериологической петлей забирают взвесь и помещают на 2 предметных стекла. Мазки сушат, фиксируют и окрашивают по Граму и Нейссеру.

При микроскопии мазка, окрашенного по Граму, определяют наличие конгломератов и одиночных грамположительных палочек длиной 5-30 мкм.

При микроскопии мазка, окрашенного по Нейссеру, определяют наличие конгломератов и одиночных палочек длиной 5-30 мкм, с желто-оранжевыми зернами волютина.

II этап. Готовят 10-кратное разведение препарата и засевают на среду № 3 для накопления энтеробактерий. При наличии роста на данной среде делают высев на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Препарат не должен содержать энтеробактерий.

(!!!) Практическая работа. В лабораторию поступил препарат «Гастрофарм» для определения идентичности лактобацилл и контроля энтеробактерий. Промикроскопируйте мазки, определите наличие энтеробактерий и дайте заключение по предложенному препарату.

Определение идентичности ядов, используемых для приготовления лекарственных форм

Материал для исследования: мазь «Випросал», содержащая яд гюрзы.

Цель исследования: определение наличия и идентичности яда гюрзы.

Методика исследования

Основа исследования — реакция преципитации в геле (РП).

1. В преципитационные пробирки разливают 1, 5%-й «голодный» агар, смешанный в соотношении 1: 1 с сывороткой, содержащей антитела к яду гюрзы (слой № 1).

2. После застывания слоя № 1 поверх него наливают 0, 5 мл 0, 75%-го МПА (слой № 2, где будет происходить реакция преципитации: антиген-токсин + антитела сыворотки в виде мутного кольца).

3. После застывания слоя № 2 на него наслаивают 0, 5 мл предварительно расплавленного при 45 " С препарата. Пробирку закрывают резиновой пробкой и инкубируют в термостате (t=37 °C) в течение 4 суток. После чего, при наличии кольца преципитации, делают заключение об идентичности яда.

Практическая работа. В лабораторию поступили на исследование 2 серии мази «Випросал» для определения наличия и идентичности яда гюрзы. По готовым демонстрационным наборам сделайте заключение об идентичности яда, находящегося в лекарственном препарате.

Определение антимикробной активности прополиса

Цель исследования: определить антимикробную активность препарата.

Методика исследования

Готовится спиртовое разведение порошка прополиса (маточный раствор).

В дозированные 3 объема расплавленного и остуженного до 40 °С МПА вносят такие количества маточного раствора, чтобы получить конечные концентрации прополиса в агаре 0, 08; 0, 04; 0, 02%. Полученные разведения прополиса в агаре разливают по 15 мл в чашки Петри и дают застыть.

Параллельно готовят 2 контрольные чашки:

а) 1 мл спирта этилового (96°) +15 мл МПА (для исключения бактериостатического действия спирта на тест-штамм); б) 15 мл МПА (для подтверждения жизнеспособности тест-штамма).

На все чашки петлей высевают тест-штамм Bacillus cereus 8035 и помещают их на сутки в термостат (t=35—37" С).

После инкубации на контрольных чашках должен наблюдаться рост, что свидетельствует о жизнеспособности тест-штамма и отсутствии бактериостатического действия спирта, являющегося компонентом готовой лекарственной формы (настойки прополиса). Бактериостатическое действие собственно прополиса должно проявляться в концентрации не более 0, 08%, о чем будет свидетельствовать отсутствие роста тест-штамма на чашке с данной концентрацией и меньшими.

Практическая работа. На исследование поступили 2 серии препарата. После проведения всех необходимых манипуляций чашки с опытом и контролями были помещены в термостат на сутки.

Оцените полученные на чашках результаты и сделайте заключение по антибактериальной активности двух серий прополиса.

Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар

Определение антимикробной активности антибиотиков основано на их способности угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем сравнения размеров зон угнетения роста тест-штаммов, образующихся при испытании растворов определенных концентраций Государственного стандартного образца и испытуемого препарата.

Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах действия (ЕД) или мкг. Для большинства антибиотиков 1 ЕД или мкг соответствуют 1 мкг активного вещества.

Метод определения (трехдозный)

В чашки Петри, установленные на строго горизонтальной поверхности, разливают расплавленные и остуженные до 49±1°С два слоя питательной среды, в верхний из которых засеваются конкретные тест-микробы.

В агаровых слоях чашек делают лунки диаметром 6-8 мм и вносят равные объемы рабочих растворов стандартного (CI, C2, СЗ) и испытуемого (И1, И2, ИЗ) образцов. Концентрации растворов, содержащие малую, среднюю и большую дозы, должны находиться в соотношении 1: 2: 4. Концентрация раствора С2 должна быть близка к контрольной концентрации раствора стандартного образца, указанной в ГФ XI.

По величине зон задержки роста тест-микроба на основании специальных формул, отражающих зависимость величины зон задержки роста от концентрации, рассчитывают количество антибиотика, содержащегося в исследуемом препарате.

(!!!) Практическая работа. На исследование поступил таблетированный эритромицин. Для определения количества антибиотика в 1 таблетке препарат раститровали согласно требованиям ГФ XI. В работе использовался тест-штамм для эритромицина — Bacillus cereus HB в концентрации 20 млн. спор на 1 мл среды.

Оцените результаты исследования ориентировочно (сравнивая зоны задержки роста испытуемого препарата и стандартного образца) и дайте предварительное заключение о содержании антибиотика в исследуемом препарате.

Микробиологический контроль стерильности лекарственных препаратов

(???).Контрольные вопросы

1. Понятие «стерильные лекарственные формы».

2. Современные лекарственные средства, к которым предъявляются требования стерильности (дополнения к ГФ XI).

3. Удельный вес стерильных растворов в рецептуре больничных аптек.

4. Обеспечение стерильности: а) соблюдение правил асептики, б) выбор правильного метода и режима стерилизации.

5. Растворы, стерилизуемые в конечной упаковке.

6. Растворы, не подлежащие стерилизации, а изготавливаемые в асептических условиях.

7. Консерванты и требования к ним.

8. Источники формирования пирогенности инъекционных и инфузионных растворов.

9. Методы современного контроля пирогенности инъекционных и инфузионных растворов:

а) биологический метод (ГФ XI),

б) применение ЛАЛ-теста для определения эндотоксина (ВФС 42-2960-97),

в) микробиологический метод (дополнения к методическим рекомендациям по микробиологическому контролю в аптеках от 1990 г.).

10. Санитарно-микробиологические требования к микробной обсемененности субстанций, используемых для приготовления инъекционных растворов.

11. Правила исследования на стерильность лекарственных препаратов.

(!!!) Задания для практической работы

1. Работа с ситуационными задачами по анализу ОМЧ воды для инъекций до стерилизации.

2. Работа с ситуационными задачами по анализу ОМЧ субстанций до стерилизации.

3. Работа с ситуационными задачами по анализу результатов контроля стерильности инъекционных и инфузионных растворов.

Лекарственные средства, к которым предъявляется требование стерильности:

ü инъекционные и инфузионные растворы и другие виды препаратов для парентерального введения (вводимые в полость суставов, в плевральную полость и т. д.);

ü глазные капли после стерилизации и изготовленные в асептичесих условиях;

ü все глазные препараты (мази, пленки, офтальмологические растворы для орошения и др.);

ü препараты, наносимые на открытые раны и ожоги;

ü жидкие лекарственные средства для новорожденных;

ü медицинские иммунобиологические препараты (МИБП).

В аптеках лечебных учреждений до 30-40% рецептуры составляют инъекционные лекарственные формы. Некоторые инъекционные растворы не выдерживают термической стерилизации (барбамил, мединал, адреналина гидрохлорид и др.). Некоторые из препаратов в инъекционных растворах сами по себе оказывают бактерицидное действие (аминазин, дипразин, гексаметилентетрамин и др.

Инъекционные растворы должны быть стерильными, так как они вводятся через полую иглу с нарушением целости кожных и слизистых покровов.

По требованию врача могут быть стерильными мази, присыпки, пластыри. Требования стерильности этой категории лекарственных форм не лишены оснований: зарегистрированы случаи заражения столбняком при использовании нестерильных присыпок.

При заводской технологии изготовления инъекционных растворов воздух в ампульные цехи подается профильтрованный, стерильный.

Инъекционный способ введения лекарственных форм имеет ряд преимуществ:

ü быстрота действия вводимых лекарственных препаратов;

ü отсутствие разрушительного действия ферментов желудочно-кишечного тракта и печени на лекарственные формы;

ü отсутствие действия медикаментов на органы вкуса и обоняния и раздражения желудочно-кишечного тракта;

ü полное всасывание вводимых лекарственных форм;

ü возможность точной локализации действия лекарств (в случае применения анестезирующих веществ);

ü точность дозирования;

ü возможность введения лекарства больным, находящимся в бессознательном состоянии;

ü возможность заготовки инъекционных препаратов впрок (в ампулах).

Требования, предъявляемые к инъекционным растворам (ГФ XI):

ü стерильность;

ü апирогенность;

ü стабильность;

ü отсутствие механических включений.

Состав практически всех растворов для инъекций, а также способы обеспечения их стерильности и стабильности регламентированы.

Требование стерильности предполагает отсутствие в препарате микроорганизмов на любой стадии их развития. Это ведущее требование должно обеспечиваться следующими приемами:

ü соблюдение правил асептики при изготовлении раствора,

ü выбор правильного метода и режима стерилизации.

Стерильные растворы аптечного изготовления делятся на две группы:

ü растворы, которые стерилизуются в конечной упаковке;

ü растворы, которые не подлежат стерилизации и готовятся в асептических условиях на основе стерильной воды с использованием стерильных растворителей, посуды, вспомогательных материалов, с применением мембранной фильтрации и т. д.

Необходимым компонентом любого стерильного лекарственного препарата являются растворители:

ü вода очищенная;

ü вода для инъекций;

ü жирные масла;

ü этилолеат.

В состав комплексных растворителей могут входить глицерин, бензиловый и этиловый спирты, пропиленгликоль и др.

Основными руководящими документами при изготовлении стерильных растворов в аптеках и на фармацевтических производствах являются:

ü ГФ XI и дополнения к ней;

ü методические указания по изготовлению стерильных растворов в аптеках;

ü фармакопейные статьи (ФС);

ü Приказ №214 от 16 июля 1997 г. «О контроле качества лекарственных средств, изготовляемых в аптеках»;

ü Приказ №1026 от 19 октября 1982 г. «Об усилении контроля за санитарным состоянием родильных домов, детски* " лечебно-профилактических учреждений и аптек» и прочая нормативная документация.

Отбор образцов на исследование

Образцы готовых лекарственных средств и медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) отбираются для контроля от каждой серии в количествах не менее 3 и не более 40 (в зависимости от величины партии).

Для посевов используют жидкие среды:

тиогликолевую — для бактериальной микрофлоры;

жидкую среду Сабуро — для грибковой микрофлоры.

Эти питательные среды обладают высокими ростовыми свойствами и обеспечивают рост микроорганизмов при посеве их в количестве менее 100 жизнеспособных клеток. Соотношение объема исследуемой лекарственной формы и среды — 1: 10.

Этапы исследования

Прежде всего необходимо определить; не обладает ли лекарственная форма антимикробным действием, во избежание неправильной оценки результатов анализа.

Определение антимикробного действия препарата проводят при отсутствии явных указаний на наличие консерванта или антимикробного вещества.

Используемые в методике тест-штаммы: E. coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Candida albicans. Тест-штаммы выращивают на сахарном бульоне при 35-37 оС, 48 часов (Candida albicans — на жидкой среде Сабуро при 20-25 оС, 72 часа). Выращенные культуры разводят стерильным физиологическим раствором до конечной концентрации 1000 клеток/мл; в пробирки вносится по 0, 1 мл приготовленной взвеси.

1-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Staphylococcus aureus + (10: 1) тиогликолевая среда и лекарственное средство, t = 35-37 " С, 48 часов;

2-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Pseudomonas aeruginosa + (10: 1) тиогликолевая среда и лекарственное средство; t = 35-37 " С, 48 часов;

3-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Е. coli + (10: 1) тиогликолевая среда и лекарственное средство; t = 35-37 " С, 48 часов;

4-я пробирка: 0, 1 мл взвеси Candida albicans + (10: 1) жидкая среда Сабуро и лекарственное средство; t=20-25 °С, 72 часа.

Контроли: пробирки с теми же средами, но без лекарственного средства + тест-штаммы (для оценки жизнеспособности тест-штаммов).

Отсутствие роста в опытных пробирках свидетельствует об антибактериальном действии лекарственного препарата.

При исследовании на стерильность для предотвращения антибактериального действия препарат засевается в жидкие среды (тиогликолевая и Сабуро) в соотношении 1: 250 или используются инактиваторы, указанные в частных фармакопейных статьях (например, для сульфаниламидов — парааминобензойная кислота, для пенициллинов и цефалоспоринов — фермент пенициллиназа и т. д.). Если препарат обладает выраженным антимикробным действием, то используют метод мембранной фильтрации (см. ГФ XI, с. 189-191): по окончании фильтрации фильтры отмывают стерильным физиологическим раствором и делят на две части, помещая одну в тиогликолевую среду, а другую — в среду Сабуро.

Антибиотики испытываются на стерильность только методом мембранной фильтрации!

Испытание на стерильность лекарственных средств без антимикробного действия

Метод прямого посева

Препарат вносится в соотношении 1: 10 в жидкие питательные среды по 2-3 пробирки, которые помещаются в термостат: тиогликолевая среда — t = 35-37 " С, 14 суток; среда Сабуро — t = 20-25 " С, 14 суток. Посевы просматриваются ежедневно!

При испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах отбирают в асептических условиях по 0, 1 г (мл) каждой единицы и вносят в стерильную колбу объемом 250 мл, где находятся стерильный фосфатный буфер (рН 6, 8-7, 0), стерильные стеклянные бусы и стерильный эмульгатор. Содержимое колбы подогревают до 41 ±1 °С и встряхивают в течение 30 минут (не более) до получения однородной эмульсии (возможно использование термовстряхивателя). Полученную эмульсию в стерильных условиях переносят в количестве 5, 0 мл в колбы, содержащие по 40 мл тиогликолевой среды и среды Сабуро. Инкубация при 35-37 " С для тиогликолевой среды и при 20-25 °С — для среды Сабуро. Посевы просматриваются ежедневно!

Для лекарственных препаратов, разлитых в склянки объемом более 100 мл, можно использовать метод мембранной фильтрации

Учет и интерпретация результатов

Посевы просматривают в рассеянном свете ежедневно и по окончании срока инкубации (14 дней).

Наличие роста микробов в питательных средах оценивают визуально (макроскопически) по появлению помутнения, пленки, осадка и микроскопически (мазки, окрашенные по Граму).

Если рост через 14 суток отсутствует во всех засеянных пробах, то выдают заключение о том, что препарат (лекарственная форма) стерилен.

Если рост наблюдается хотя бы в одном из посевов макроскопически и подтверждается микроскопически, то посев повторяют: засевают такое же количеств образцов. При этом:

ü если рост отсутствует во всех пробах — посевы стерильные, выдается заключение о том, что препарат стерилен;

ü если рост микробов отмечается хотя бы в одном из посевов и это подтверждается микроскопически (в мазках определяются микроорганизмы, идентичные микробам первого контроля), то выдается заключение, что препарат нестерилен;

ü если во вторичном посеве отмечается рост микробов (хотя бы в одной из проб), но в мазках определяются формы микроорганизмов, отличающиеся от первоначальных, испытание повторяют в третий раз на удвоенном количестве образцов. Если рост отсутствует во всех образцах, то препарат считают стерильным. Если отмечается рост хотя бы в одном из посевов, то препарат нестерилен.

Растворы для инъекций до стерилизации должны храниться не более 3 часов.

Изготовляемые в аптеках растворы для инъекций подвергаются микробиологическому контролю в СЭС выборочно, не реже 2 раз в квартал, а также испытанию на содержание пирогенных веществ — ежеквартально.

Если посев инъекционных растворов (до стерилизации) не делается непосредственно в аптеке, то с момента забора материала до посева должно пройти не более 3 часов.

Приготовление растворов для инъекций проводится в асептических условиях. Асептические условия приготовления лекарственных препаратов регламентируются статьей ГФ XI «Стерилизация», Инструкцией по приготовлению растворов для инъекций в шпеках, Приказом Министерства здравоохранения РФ (№309), Методическими указаниями по изготовлению стерильных раствором в аптеках.

ОМЧ инъекционных растворов до стерилизации — не более 40 сапрофитов в 1 мл (Приложение № 1 к Методическим указаниям по микробиологическому контролю в аптеках № 3182-84).

Растворы для инъекций должны готовиться из лекарственных веществ, полностью отвечающих требованиям фармакопейных статей и других нормативных документов.

Некоторые лекарственные вещества должны обладать повышенной степенью чистоты или подвергаться особой очистке, т. к. могут являться питательной средой для размножения микроорганизмов или оказаться загрязненными на технологических этапах:

гексаметилентетрамин;

глюкоза;

кальция глюконат;

кофеин-бензоат натрия;

натрия цитрат;

кальция хлорид;

магния сульфат и др.

Препараты для инъекций должны храниться в специальных штангласах с притертыми пробками в специальном шкафу. Перед заполнением штангласов новыми порциями препаратов банки и пробки тщательно очищаются и стерилизуются.

Вспомогательные вещества (стабилизаторы, солюбилизаторы, консерванты и др.) также должны соответствовать требованиям нормативной документации.

Растворители

Обычная дистиллированная вода нередко содержит значительное количество живых и мертвых микроорганизмов. Поэтому для приготовления инъекционных растворов применяется дистиллированная вода повышенной чистоты, свободная от микробов и пирогенных веществ — вода для инъекций (см. раздел «Вода» данного методического пособия).

В качестве растворителей применяются также жирные масла: персиковое, абрикосовое, миндальное, — которые обладают малой вязкостью и легко проходят через узкий канал иглы. Могут быть использованы хорошо рафинированные подсолнечное масло и масло земляного ореха (стерилизация масел рассмотрена в разделе «Асептика в фармации» данного методического пособия).

Асептически изготавливают лекарственные формы, не переносящие термической обработки — например, растворы с термолабильными веществами.

Малоустойчивыми системами являются также взвеси и эмульсии, т. к. в них при нагревании резко усиливаются процессы рекристаллизации, флокуляции взвеси и коалесценции (слияние частиц).

Эмульсии — микрогетерогенные системы, в которых и дисперсная фаза, и дисперсионная среда образованы жидкостями, взаимно не растворимыми. Это грубодисперсные системы («масло-вода»). Эмульсии типа «масло-вода» употребляются в медицинской практике как per os, так и парентерально (линименты, жидкие мази, эмульсионные мази).

В этих случаях строжайшее соблюдение асептических условий — единственный путь получения лекарственных препаратов, по своему состоянию весьма близких к понятию стерильных. Это достигается тем, что растворитель или основу для мази, инструменты, посуду стерилизуют отдельно. Термолабильные лекарственные вещества асептически взвешивают и растворяют в стерильном растворителе (иногда с добавлением консерванта) или смешивают со стерильной основой стерильными инструментами и помещают в стерильные отпускные склянки. Термостабильные компоненты лекарственных препаратов стерилизуются. Препараты готовят в асептическом блоке (см. раздел «Асептика в фармации» данного пособия, Приказ МЗ РФ № 309).

Офтальмологические (глазные) лекарственные формы

Данные лекарственные препараты занимают особое место среди лекарств в силу специфики их использования.

Глазные препараты должны быть стерильными, т. к. конъюнктиву глаза необходимо защищать от инфекции. В норме она обмывается слезной жидкостью, содержащей лизоцим, который лизирует грамположительную микрофлору, наиболее часто попадающую на слизистую. При заболеваниях глаз количество вырабатываемого лизоцима часто резко уменьшается.

Инфицирование глаз нестерильными препаратами может привести к тяжелым последствиям, вплоть до потери зрения. С учетом этого предпринимается следующее.

1. При приготовлении глазных капель в асептических условиях скрупулезно соблюдаются все мельчайшие требования асептики.

Проводят стерилизацию глазных лекарственных препаратов, если они выдерживают термическую обработку.

Надо помнить, что при использовании глазных капель при первом открытии флакона, капли могут обсеменяться микроорганизмами. Поэтому целесообразно готовить малые объемы препарата и вводить консерванты для сохранения стерильности (характеристика, механизм действия и требования, предъявляемые к консервантам, изложены в разделе «Асептика» данного методического пособия).

Выбор способа термической обработки глазных капель определяется степенью устойчивости лекарственных веществ в растворах при нагревании. В заводских условиях может использоваться стерилизация фильтрованием.

Глазные мази: основа должна быть стерильной, иначе мазь может стать причиной инфицирования конъюнктивы и слезных протоков.

В качестве основы чаще всего используют вазелин сорта «для глазных мазей», сплав вазелина с ланолином или метилцеллюлозои и другими высокомолекулярными соединениями.

Стерильность надо не контролировать, а обеспечивать!

Условия обеспечения стерильности

Персонал — санитарно-микробиологическая грамотность и ее соблюдение.

Помещение — асептика, ее обеспечение и поддержание.

Оборудование — технологическое соответствие нормативам.

Минимальная исходная микробная контаминация субстанций до стерилизации.

Валидация процесса — критические точки.

Контроль оборудования и процесса.

(!!!) Практическая работа

Задание 1

Для санитарно-бактериологического исследования из аптеки взят на исследование инъекционный раствор глюкозы до стерилизации, спустя час после приготовления.

Проведены следующие виды исследований: ОМЧ, контроль наличия в растворе глюкозы золотистого стафилококка, энтеробактерий, псевдомонад и грибов.

В таблице представлены результаты проведенных исследований.

Сделайте выводы о санитарно-бактериологическом качестве данной партии инъекционного раствора глюкозы до стерилизации.

1. Что такое ОМЧ инъекционного раствора?

2. Что такое сапрофиты и как они могут попасть в раствор в процессе приготовления?

3. Почему среди допустимых 30 сапрофитов не должно быть грамотрицательных микроорганизмов?

4. Что такое пирогенность инъекционного раствора и с чем она может быть связана?

5. Почему требования апирогенности относятся только к инфузионным и инъекционным (парентеральным) препаратам?

6. Откуда кишечная палочка могла попасть в инъекционный раствор?

Задание 2

В аптеке регулярно готовится стерильный раствор глюкозы для новорожденных детей в родильном доме (питание между кормлением грудью).

Для планового санитарно-бактериологического контроля взято 3 флакона (каждый емкостью 200 мл) после стерилизации.

Режим стерилизации — автоклавирование при 120 " С 12 минут.

Контроль стерильности проводился согласно требованиям ВФС 42-1844-88. Выполнены следующие виды исследований:

— из каждого объема проведен посев в тиогликолевую среду в соотношении 1: 10 для выявления бактер. флоры (t=37 " С);

— из каждого объема проведен высев на жидкую среду Сабуро в соотношении 1: 10 для выявления грибов (t=20—25°С).

Все посевы выдержаны 14 суток.

Результаты учитывались по визуально определяемому помутнению сред.

Видимое помутнение произошло только в тиогликолевой среде на 12-е сутки инкубации. Среда Сабуро оказалась стерильной. Из колбы с помутневшей тиогликолевой средой сделан мазок и высев на чашку с МПА для выявления культуральных особенностей микроорганизма и при необходимости — последующей идентификации по «пестрому ряду».

Свойства выделенного микроорганизма:

Проведите идентификацию микроба на основании представленных в таблице свойств и дайте заключение по стерильности исследуемого препарата.

1. Какая вода используется для приготовления лекарственных стерильных форм (кроме инъекционных и инфузионных)?

2. Почему к лекарственным стерильным формам для энтерального применения не применяются требования апирогенности?

3. Почему данный микроорганизм не погиб при стерилизации?

4. Каким путем данный микроорганизм мог попасть в лекарственную форму?

Задание 3

На бактериологическое исследование взят многокомпонентный инфузионный раствор до стерилизации, приготовленный в больничной аптеке.

Проведены следующие виды исследований: определение ОМЧ, контроль наличия в растворе золотистого стафило­кокка, энтеробактерии, псевдомонад и грибов. Результаты проведенных исследований представлены в таблице (стр. 80).

Идентифицируйте выделенные микроорганизмы на основании представленных в таблице свойств.

Сделайте выводы о санитарно-бактериологическом качестве данной партии инфузионного раствора до стерилизации. 1. Что такое ОМЧ инфузионного раствора?

2. Что такое сапрофиты и как они могут попасть в раствор В процессе приготовления?

3. Почему среди допустимых 30 сапрофитов не должно быть грамотрицательных микроорганизмов?

4. Что такое пирогенность инфузионного раствора и с чем она может быть связана?

5. Почему требования апирогенности относятся только к инфузионным и инъекционным (парентеральным) препаратам?

Задание 4

Для испытания на стерильность в бактериологическую лабораторию поступила партия иммунных препаратов в ампулах (заводская расфасовка) — гипериммунная антисинегнойная плазма.

Так как данный вид иммунных препаратов обладает выраженным антибактериальным действием, перед посевом каждый образец разведен стерильным физиологическим раствором в соотношении 1: 50. Полученные разведения профильтровали через мембранные фильтры и смывы с фильтров засеяли в 3 комплекта сред, каждый из которых состоял из тиогликолевой среды и среды Сабуро. Среды инкубировали в термостате в течение 14 суток при 37 °С (тиогликолевая среда) и 20-25 °С (среда Сабуро).

На 11-е сутки в среде Сабуро визуально отмечен рост. При высеве на плотную среду Сабуро и на МПА обнаружены колонии плесневых грибов.

Проанализируйте ситуацию и дайте заключение по пригодности

1. Как стерилизуются иммунные препараты и почему?

2. Каким образом могли попасть в препарат плесневые грибы?

3. Почему к иммунной плазме предъявляются требования стерильности?

Микробиологическая чистота основного сырья (субстанций) и вспомогательных материалов

(изменения к ГФ XI, 1995 г. при отсутствии других требований в частных фармакопейных статьях)