На двухцепочечную молекулу ДНК, с указанием участка распознавания

и места разреза; Б - фрагменты ДНК с тупыми концами

После разрезания ферментом Sma I

Примером действия рестриктазы второго приведённого случая является EcoRI, которая узнаёт фрагмент ДНК из шести нуклеотидов ГААТТЦ и режет эту последовательность ДНК ассиметрично, «ступенькой», между нуклеотидами Г и А. (рис. 8.6).

В результате место разреза в одной цепи смещено по отношению к другой на 4 пары оснований. При таком разрезе образуются два выступающих конца. Эти концы притягиваются друг к другу, желая восстановить свои старые связи и скрепиться, как им и положено, водородными мостиками. Если с той же EcoRIполучить фрагменты ДНК из различныхорганизмов, то все они будут иметь одинаковые, подходящие друг к другу «липкие концы». Он лигирует, т.е. «сшивает» между собой сахарофосфатные основы двух фрагментов с образованием полной структуры двойной спирали ДНК.

Таким образом, рестриктазы (рестрикционные нуклеазы) – это ферменты, способные узнавать специфические последовательности (4-6 нуклеотидов) ДНК и разрезать их в строго определенных местах. Когда два разных образца обрабатывают одной и той же рестриктазой, а затем смешивают эти образцы, то благодаря комплементарному спариванию фрагментов разных образцов могут образовываться новые комбинации генов – рекомбинантные ДНК

Рис. 8.6. А - схема действия фермента рестриктазы EcoRI

На двухцепочечную молекулу ДНК, с указанием участка распознавания

и места разреза; Б - фрагменты ДНК с липкими концами