Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Электрофорез
|
|
21. Электрофорез. Наиболее существенные открытия в развитии методов электрофореза. Теория электрофореза. Скорость и электрофоретическая подвижность. Типы электрофореза.
э-форез - движение заряженых частиц в растворителе под действием электромагнитного поля.
применяется:
разделение молекул по массе, заряду, конфигурации
определение молекулярной массы, с использованием шкалы
выявление изменений в составе белков и нк
| Фарадей сформулировал фундаментальные законы, описывающие электрические явления в растворах | |
| Кольрауш открыл принципы изотахоэлектрофореза | |
| О.Ю.Рейс определил закономерности движения заряженных частиц коллоидных растворов в электрическом поле | |
| Вильямс и Вотермен сформулировали основные принципы изоэлектрофокуссирования | |
| Тизелиус использовал электрофорез для разделения белков в растворе | |
| А.Гордон описал использование агара в качестве носителя при электрофорезе | |
| Смитис для разделения белков с помощью электрофореза использовал крахмальный гель | |
| Сэнгер завершил анализ аминокислотной последовательности бычьего инсулина | |
| Ингрэм получил первые пептидные карты (фингерпринты), показав, что различия гемоглобина больных серповидноклеточной анемией и нормального гемоглобина обучсловлены одной аминокислотной заменой | |
| Пэймонд ввел в лабораторную практику полиакриламидный гель | |
| Орнстайн и Дэвис разработали теорию электрофореза в полиакриламидном геле и получили более эффективные буферные системы, что позволило проводить разделение биомолекул с высокой степенью разрешения | |
| Мэйзел для усовершенствования разделения белков полиакриламидном геле предложил использовть додецилсульфат натрия (ДСН) | |
| О’Фаррел разработал систему двумкрного гель- электрофореза для анализа белковых смесей, которая представляет собой сочетание ДСН-электрофореза белков в полиакриламидном геле и изоэлектрического фокусирования | |
| Шварц и Кантор разработали метод электрофореза в пульсирующем электрическом поле (пульс-электрофорез), используемый для разделения очень больших молекул ДНК |
Теория э-фореза
молекула, имеющая заряженные частицы, способна двигаться в электромагнитном поле.
белки бывают + или -, зависти от рН и изоэлектрической точки белка; нк всегда -
белки с разной изоэлектрической точкой в одинаковой рН будут двигаться с разной скоростью. метод позволяет разделять вва, различающиеся в рН до 0, 02 ед
вокруг частицы в поле образуется двойной электрический слой, из за силы трения. (как бы диполь. +частица и -шлейф). у незаряженой частицы такого нет.
1. скорость частицы в заряженом поле напряженностью Е
f - коэф. электр. трения
2. электрофоретическая подвижность μ (скорость движения частицы при напряжении поля в 1В/см)
(см2*см(-1)* В(-1))
при постоянной вязкости среды и постоянном напряжении подвижность ионов пропорциональна отношению заряда к радиусу частицы
на движение влияют
- параметры поля (напряжение, сила тока, сопротивление)
- характеристики буфера (рН, ионная состояние, температура)
- характеристики поддержания среды (структура и физхим свойства, адсорбция, электроосмос?)
типы электрофореза:
1) по агрегатному состоянию среды: фронтальный (ж), зональный (на тв носителе)
2) по способу нанесения образца: с подвижной границей (в свободной среде?), зональный (на носителе), в свободном потоке (непрерывный)
3) по принципу фракционирования:
- по вел. заряда в постоянной рН
- изоэлектрофокусирование (по изоэлектрической точке)
- изотахофорез (по электрофоретической подвижности)
- э-форез на носителе (по мол. массе)
22. Фронтальный и зональный электрофорез: сравнительные особенности.