Двухмерный форез

В угол ПАА пластинки наносится образец, содержащий смесь молекул и проводится разделение по значению изоэлектрических точек

Затем пластинку поворачивают на 90 градусов и проводят разделение по молекулярной массе.

Данная разновидность фореза применяется для исследования протеома, тк метод позволяет разделить от сотен тысяч белков одновременно

Протеом – совокупность всех белков организма в конкретный период времени

28. Электрофорез нуклеиновых кислот. Характеристики нуклеиновых кислот, обусловливающие особенности их электрофореза. Электрофорез в денатурирующих гелях. Капиллярный электрофорез.

НК всегда минус, поэтому разделение идет всегда только по размеру

В таком форезе должен быть широкий диапазон молекулярных масс – НК от 10 млн до 100 млн Да

Поведение НК в геле сильно зависит от вторичной структуры молекулы

Фракционирование однонитевых фрагментов ДНК и РНК возможно только при сохранении денатурирующих условий во время электрофореза, (температура, мочевина, NaOH), чтобы предотвратить комплементарное соединение др с др или самих на себя

Э-форез в денатурирующих гелях

Мочевина – для фореза коротких фрагментов

Щелочь – не позволяет свертываться как попало и запутываться

ЭДТА - ингибирует ДНКазу, не позволяет осаждаться

Капиллярный электрофорез

Метод основан на разделении сложной смеси в тонких капиллярах под действием эл поля.

используется для разделения ионов по заряду. В капилляре электролит

бывает:

Зонный – разделение на различные по подвижности и заряду зоны

Ионный – для определения э.ф. подвижности неогранических ионов

Капиллярная электрокинетическая хроматография – разделение нейтральных частиц

вследствии ион-парных взаимодействий, комплексообразования и биоспецифических сил

бывает мицеллярная, ионообменная, лигандообменная

детектирование:

- изменение поглощения излучения в ультрафиолетовой области или в области видимого света.

Капиллярная трубка может быть расширена в месте детектирования, такую разновидность называют пузырьковой ячейкой. В другом варианте увеличение пути проходящего света достигается за счёт добавления дополнительного капилляра. Оба этих метода снижают эффективность разделения.

- Детектирование путем флуоресценции может быть использовано при капиллярном электрофорезе образцов, имеющих естественную флуоресценцию, или химические модификации, которые вводят флуоресцентные метки.

Метод используется:

- в экологическом контроле

- пищевой промышленности

- фармакологии

- криминалистике