Факторы, определяющие отклонения

1. внешние – по отношению к хромофору – условия

полярность растворителя, рН р-ра

2. хим взаимодействия между различными хромофорными группами в растворе

коэф экстинции? понижается в ряду: своб. Нуклеотид----однонит. НК ----двунитевая НК

3. несовершенство конструкции прибора

4. процесс взаимодействия света с растворами при многих длинах волн.

Может раскладываться на составные части из за каких-нибуть поляризационных свойств вещества

Калибровочные графики

Зависимость плотности от концентрации. Мерим несколько проб с точно известной концентрацией, чертим график, ставим точки известных значений. Из начала координат проводим прямую, так чтобы все значения были по правую и левую стороны примерно на одном расстоянии (среднее значение)

Потом на этой прямой отмечаем наше значение и ищем его координату по шкале концентрации. Метод нахождения (среднего значения от среднего значения)

Tg угла наклона прямой – коэф ε данного в-ва

38. Аппаратура для изучения спектров поглощения в видимом и в ультрафиолетовом свете: одно- и двухлучевые спектрофотометры.

Фотоэлектроколориметры – только для видимого света

Спектрофотометры – УФ область

Элементы:

Лампа – вольфрамовая или водородная

Светофильтр (монохроматор)

Камера для кюветы

Детектор света

Преобразователи и индикаторы

Проба освещается белым светом

проба освещается монохромированым светом

одно- и двулучевой спектрометр

в однолучевом приборе луч проходит только через одну кювету сравнения, поэтому там нужно сдвигать кюветы во время анализа

световой поток падает на фотоэлемент в котором возникает фототок, регистрирующийся измерительным прибором

в двулучевом приборе от источника излучения после монохроматора луч делится на два потока. Оба потока регистрируются на один фотоэлемент и пишутся в качестве суммарного потока

39. Область применения видимой и УФ-спектроскопии в биологии и экологии: качественный и количественный анализ вещества. Исследование структурных и динамических свойств молекулярных систем.