Реакция преципитации

В реакции преципитации происходит выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена, которым может быть белок, комплексы белков с углеводами и липидами, бактериальные экстракты различные лизаты или фильтраты бульонных культур микробов и специфического антитела в присутствии электролитов. Образующееся в результате этой реакции мутное кольцо или осадок называют преципитатом, Антитела, участвующие в реакции преципитации, называются преципитинами. От реакции агглютинации эта реакция отличается размером частиц антигена, которые приближаются к размерам молекул.

Реакцию преципитации обычно применяют для определения антигена при диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менингит и др.), определения видовой принадлежности крови, спермы, при установлении фальсификации продуктов. Для реакции необходимы:

1. Антитела (преципитины) - иммунная сыворотка с высоким титром антител (не ниже 1: 100 000). Титр преципитируюшей сыворотки устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она даёт реакцию. Сыворотку обычно применяют не разведённой или в разведении 1: 5-1: 10.

2. Антиген - растворённые вещества белковой или липоидносахаридной природы (полные антигены или гаптены).

3. Изотонический раствор.

Основные методы проведения реакции преципитации это реакция кольцеприципитации и реакция преципитации в агаре (геле).

Реакция кольцеприципитации

В преципитационную пробирку с помощью пастеровской пипетки вносят 0, 2 - 0, 3 мл. (5-6 капель) сыворотки (сыворотка не должна попадать на стенки пробирки). На сыворотку' осторожно наслаивают антиген в таком же объёме, наливая его тонкой пастеровской пипеткой; до стенке пробирки. Пробирку при этом держат в наклонном положении. При правильном наслаивании между сывороткой и антигеном должна получиться четкая граница. При положительном результате реакции на границе антигена и антитела образуется мутное < кольцо> - преципитат. Реакцию сопровождают рядом контролей.

Учёт результатов производят через 5-30 минут, в некоторых случаях через час, как всегда начиная с контролей. < Кольцо> во второй пробирке свидетельствует о способности иммунной сыворотки вступать в специфическую реакцию с соответствующим антигеном. В 3 - 5 - и пробирках < колец> не должно быть - там нет соответствующих друг другу антител и антигенов. Наличие < кольца> в первой пробирке свидетельствует об образовании специфического иммунного комплекса (антиген + антитело), что позволяет идентифицировать искомый антиген. Если в качестве антигенов в реакции кольцепреципитации используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов и тканей, реакция носит название реакции термопреципитации (реакция Асколи).

Широкое распространение получили реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы -двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и другие.

Для постановки реакции двойной иммунодиффузии по Оухтерлони растопленный агаровый гель выливают тонким слоем на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают в нём лунки размером 2-3 мм. В лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые, диффундируя в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белой полосы.

При постановки реакции радиальной иммунодиффузии иммунную сыворотку вносят в агаровый гель. В лунки геля помещают раствор антигена, который, диффундируя в гель, образует кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют, в частности, для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплимента.

Иммуноэлектрофорез сочетает метод электрофореза и реакцию преципитации; смесь антигенов разделяют в геле с помощью электрофореза, затем параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации. Разновидностью преципитации является реакция флоккуляции - появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитация) при реакции токсин -антитоксин или анатоксин - антитоксин; применяется для определения; активности анатоксина или антитоксической сыворотки.

Контрольные вопросы.

1. В чем основное различие между реакцией агглютинации и преципитации?

2. Почему нельзя применять мутные ингредиенты в реакции преципитации?