Учтите и оцените результаты посева отделяемого из носа на ЖСА с целью диагностики бактерионосительства S. aureus (см. предыдущее занятие).

2. Проведите бактериологическое исследование по обнаружению и выделению предполагаемого возбудителя из содержимого флегмоны нижней конечности с целью установления этиологии заболевания, для чего:

1 этап. Промикроскопируйте препарат из исследуемого материала, окрашенный по Граму. Результаты исследования внесите в протокол и сформулируйте вывод.

В биоматериале стрептококки – это грамположительные кокки, которые располагаются одиночно, парами, короткими цепочками и небольшими группами среди интактных и разрушенных лейкоцитов. Сходная картина наблюдается при стафилококковых инфекциях. Поэтому полученный результат позволяет сделать вывод о выявлении грамположтельных кокков и продолжить исследование. Для чего исследуемый материал засевают на чашки с КА и ЖСА для получения изолированных колоний. Чашки инкубируют при 37°С в течение 24 ч.

2 этап. Оцените результаты посева исследуемого материала того же больного на ЖСА и КА, дайте характеристику выросшим колониям.

При наличии в патологическом материале стафилококков рост будет наблюдаться одновременно на ЖСА и КА (оценку роста на ЖСА см. занятие №12). При наличии стрептококков рост будет только на КА. Стрептококки образуют мелкие, слегка выпуклые колонии с зернистой структурой, окруженные зоной полного гемолиза (b-гемолиз), зоной зеленящего гемолиза (a-гемолиз) или гемолиз может отсутствовать (g-рост). Зона гемолиза хорошо видна в проходящем свете. Для получения чистой культуры 2-3 характерные колонии пересевают на скошенный сывороточный агар и сахарный бульон.

3 этап. Изучите характер роста культуры на сахарном бульоне, приготовьте фиксированный препарат, окрасьте по Граму и промикроскопируйте. Дайте заключение.

В сахарном бульоне стрептококки дают придонно-пристеночный рост, а среда остается прозрачной или становится слегка мутной. Стрептококки группы А чаще не вызывают помутнение, а в мазке из бульона обнаруживают длинные цепочки полиморфных овальных или/и округлых грамположительных кокков. Для энтерококков характерно помутнение бульона, а в мазке энтерококки располагаются попарно и небольшими скоплениями (но не гроздьями).

Учтите результаты латекс-агглютинации исследуемой культуры с групповыми сыворотками (А, В, С, F) - демонстрация.

Для сероидентификации культур стрептококков в настоящее время широко используется латекс-агглютинация, основанная на взаимодействии антигена культуры с моноклональными антителами, адсорбированными на инертных латексных частицах. Это приводит к быстрому образованию видимых агрегатов. Учет результатов проводят в течение нескольких мин при косом освещении на темном фоне.

Изучение биохимических свойств полученной культуры с целью её идентификации проводят с помощью тест-системы Api 20 STREP.

Для определения чувствительности к антимикробным химиопрепаратам используют тест-систему ATB STREP.

4 этап. Учтите результаты биохимической идентификации (тест-система Api 20 STREP) и определите чувствительность к антимикробным химиопрепаратам (тест-система ATB STREP).

На основании полученных результатов определите видовую принадлежность культуры (таблица выдается на занятии) и оцените результаты антибиотикограммы (таблица выдается на занятии). Полученные результаты занесите в протокол и сделайте вывод; заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

3. Промикроскопируйте готовый препарат, приготовленный из осадка СМЖ больного с клиническим диагнозом «менингит» и учтите результаты ПЦР с той же СМЖ. Дайте заключение, заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

Одним из возбудителей гнойных менингитов являются пневмококки. Для их выявления СМЖ центрифугируют и исследуют осадок, из которого готовят мазки, окрашенные по Граму. Пневмококки – это грамположительные диплококки ланцетовидной формы, обращенные уплощенной стороной друг к другу и окруженные общей капсулой. Включение в спектр методов микробиологической диагностики молекулярно-генетического метода с использованием ПЦР позволяет повысить специфичность и информативность комплексного исследования. Маркером пневмококков является ген cpsA, присутствующий у всех капсульных пневмококков.

4. Ознакомьтесь и опишите в протоколе бакпрепараты: стрептококковый бактериофаг, вакцины: «Пневмо 23», 7-валентная конъюгированная вакцина «Превенар», указав, что они содержат, для чего и как применяются.

5.4. Итоговый контроль знаний:

§ ответы на вопросы по теме занятия

1. Назовите специфические заболевания стрептококковой этиологии.

2. Назовите типовое проявление заболеваний стрептококковой этиологии.

3. Назовите возможные не нагноительные осложнения при развитии стрептококковых инфекций и каков механизм их развития.

4. Чем объясняется возможность эндогенного заражения при стрептококковых инфекциях.

5. Суперантигены стрептококков, их роль в патогенезе развития заболеваний.

6. Обоснуйте возможность использования микроскопического метода диагностики пневмококковых инфекций.

7. Обоснуйте возможность использования биологического метода диагностики пневмококковых инфекций

8. Назовите при какой стрептококковой инфекции в настоящее время возможно проведение специфической профилактики и какие препараты можно использовать для этой цели, что они содержит.

9. Компонентный состав вакцин для специфической профилактики пневмококковых инфекций; принцип отбора компонентов, возможные причины изменения состава. Обосновать.

10. Обоснуйте тактику применения конъюгированных и неконъюгированных вакцин для специфической профилактики пневмококковых вакцин.

11. Роль S. agalactiae в неонатальной патологии.

§ решение ситуационных задач

ЗАДАЧА № 1. В препарате из мокроты обследуемого, окрашенном по Граму, обнаружены полимофноядерные лейкоциты в количестве 25-30 в поле зрения, эпителиальные клетки 5-10 в поле зрения и грамположительные диплококки ланцетовидной формы, окруженные капсулой.

1. О каком микроорганизме идет речь?
2. Возможно ли на основании полученного результата дать заключение об этиологической роли данных микроорганизмов? Обосновать.
3. Какие исследования необходимо провести для окончательной диагностики?

ЗАДАЧА № 2. У больного через 2 недели после перенесенной ангины появились боли в области сердца.

1. О каком осложнении может идти речь?
2. Какой вид стрептококков является этиологическим фактором данного осложнения?
3. Какие исследования необходимо провести для уточнения диагноза?

ЗАДАЧА № 3. При осмотре больного, поступившего в инфекционное отделение, доктор обнаружил на шее, верхней части спины и груди мелкоточечнуюсыпь красного цвета, язык ярко-красного (малинового) цвета, резкий контраст между ярко-красными «пылающими» щеками и бледным носогубным треугольником. Больной жалуется на боль в горле при глотании. Доктор поставил предварительный диагноз «скарлатина».

1. Какой микроорганизм вызывает скарлатину?
2. Факторы вирулентности возбудителя, определяющие особенности патогенеза и клиники развития заболевания?
3. Какие осложнения могут развиться при скарлатине?

ЗАДАЧА № 4. При исследовании раневого отделяемого, взятого у больного с клиническим диагнозом «флегмона предплечья», выделена культура Enterococcus durans в количестве 5× 10⁸ КОЕ/мл.

1. Оцените полученный результат.
2. Обоснуйте возможность участия данного микроорганизма в развитии гнойно-воспалительного заболевания.
3. Зачем необходимо определять количество микроорганизмов?

ЗАДАЧА № 5. Юноша, 14 лет, обратился к дерматологу с жалобами на гнойные поражения лица, проявляющиеся в виде небольших пузырей, которые, высыхая, образуют тонкие корочки. После их удаления остаются розовые пятна. Врач поставил диагноз «импетиго»? Для уточнения диагноза содержимое пузырьков было направлено в бактериологическую лабораторию.

1. Назовите предполагаемого возбудителя, укажите его таксономическое положение (семейство, род, вид).

2. Какие методы необходимо провести для подтверждения диагноза?

3. Методика определения принадлежности выделенной культуры к определенной серогруппе и серовару?