Середовища для визначення ферменту уреази

Бульйон з сечовиною. До 100 куб. см стерильного м'ясо-пептонного або бульйону Хоттінгера (pH 7, 0) додають 1 г сечовини і 0, 2 куб. см 1, 6 % спиртового розчину індикатора крезолрот. Розливають над полум'ям по 2-3 куб. см в стерильні пробірки і стерилізують текучою парою протягом 10 хвилин.

Метод Заксе. Готується 2 реактиви: A і B.

РЕАКТИВ A: сечовина – 2 г; 96° етиловий спирт – 2 куб. см; дистильована вода – 4 куб. см.

РЕАКТИВ B: 0, 2 % розчин фенолрот – 1 куб. см; однозаміщений фосфат калію (KH PO) – 0, 1 г; двозаміщений фосфат калію (K HPO) – 0, 1 г; хлористий натрій (NaCl) – 0, 5 г; дистильована вода – 100 куб. см.

Реактив A не стерилізують і зберігають при температурі від 6 ±2 °C. Реактив B стерилізують в автоклаві текучою парою.

Середовище для відновлення нітратів у нітрити

До 100 куб. см поживного бульйону pH 7, 3-7, 5, вільному від нітритів (перевірити реактивом Грісса або Касаткіна), додають 0, 1 % вільної від нітритів калійної селітри (0, 1 г KNO), перевіривши ще раз на вміст нітритів, розливають по 5 куб. см в промиті дистильованою водою не менше як 5 разів пробірки. Стерилізують 15 хвилин при 121 ±1 °C.

Реактив Грісса. Розчин № 1 – 0, 8 % сульфанілова кислота в 5 N оцтовій кислоті. Розчин № 2 – 0, 6 % диметилальфанафтамін в 5 N оцтовій кислоті. Перед проведенням реакції змішують рівні об'єми розчинів № 1 і № 2.

Пам'ятати! Реактив придатний для користування протягом 15 хв., безколірний, при появі рожевого забарвлення не використовувати.

Реактив Касаткіна. Розчин № 1 – 0, 1 %-й розчин риванолу в дистильованій воді. Розчин № 2 – 12 %-й розчин соляної кислоти (HCl). Перед виконанням реакції змішують рівні об'єми розчинів № 1 та № 2. Реактивна суміш придатна для використання протягом 15 хвилин.

Приготування дисків для визначення нітрат-редуктази. Використовується 5 % розчин нітрату натрію (NaNO) на дистильованій воді. Нітрат натрію і дистильована вода не повинні вміщувати нітрити (перевірити реактивом Грісса). Стерильні смужки фільтрувального паперу просочуються 5 % розчином нітрату натрію у стерильній чашці Петрі і підсушуються 24 години.

7.5. Середовища для вивчення сахаролітичних властивостей

До 100 куб. см гарячої дистильованої води послідовно додають 1 г пептону, 0, 5 г NaCl, 0, 1 куб. см індикатора Андреде. Встановлюють pH – 7, 4, кип'ятять 5 хвилин, фільтрують через паперовий або полотняний фільтр, доводять до попереднього об'єму гарячою дистильованою водою. До одержаної основи додають один з перелічених вуглеводів (сахароза, глюкоза) в кількості 1-0, 5 г, крохмаль (розчинний) – 0, 5 г.

Середовища розливають у пробірки по 2-3 куб. см, стерилізують при 112 ±1 °C 20 хвилин. Готові середовища з індикатором Андреде безбарвні або мають ледь рожевуватий відтінок.