Задания для выполнения лабораторной работы. Цель занятия: изучить значение микрофлоры воды, освоить методы определения загрязненности воды, научиться оценивать санитарно-гигиеническое состояние

МИКРОФЛОРА ВОДЫ.

Цель занятия: изучить значение микрофлоры воды, освоить методы определения загрязненности воды, научиться оценивать санитарно-гигиеническое состояние исследуемого воздуха.

План занятия

1. Качественный состав микрофлоры воды.

2. Оценка воды - как среды обитания микроорганизмов.

3. Санитарно-бактериологические показатели чистоты воды.

1. Методы определения бактериальной загрязненности воды: а) метод мембранной фильтрации; б) титрационный метод; в) метод прямого обнаружения.

4. Значение микрофлоры воды в эпидемиологии инфекционных заболеваний.

5. Допустимые нормы показателей санитарно-гигиенического состояния водопроводной воды.

Задания для выполнения лабораторной работы.

1. Провести санитарно-бактериологическое исследование водопроводной воды:

Забор воды для бактериологического исследования.

Забор воды для бактериологического анализа производят в стерильные бутыли из стекла или одноразовую посуду емкостью не менее 500 мл с резиновыми или силиконовыми (но не ватно-марлевыми), плотно закрывающимися, пробками и защитными колпачками из алюминиевой фольги или плотной бумаги. Водопроводный кран, без резиновых шлангов и предварительного обжига, открывают, спускают воду и без изменения напора собирают не менее 500 мл воды. Емкости с пробами должны быть заполнены так, чтобы между водой и пробкой оставалось пространство (для предотвращения смачивания пробки при транспортировке). Пробы в емкостях закрывают проб­ками и стерильными колпачками, маркируют, прикрепляя этикетки или нанося надпись несмываемой краской, составляют акт о взятии проб воды, с указанием места и времени, даты отбора проб, харак­теристики водоисточника (температура воды, климатические условия окружающей среды), фамилию лица, взявшего пробу. Пробы питьевой воды должны быть помещены в контейнер-холодильник при температуре 4-10°С. Бактериологическое исследование должно производиться не позднее 6 часов с момента отбора проб, если пробы нельзя охладить, то прове­дение исследования должно состояться не позднее, чем через 2 часа после забора.

Для взятия проб воды из глубины (открытых водоемов, колодцев, бассейнов и т. д.) используют специальные приборы: батометр, приборы Исаченко, Рутнера и др. Батометр представляет собой металлический каркас длиной 0, 5-1 м (рис.). Каркас изготавливается из металла, не подвергающегося коррозии, и может компактно складываться, так как состоит из отдельных колец. Дно каркаса свинцовое и служит грузилом. Внутрь устанавливают стерильную бутыль, закрытую стерильной резиновой или корковой пробкой с кольцом, к которому привязана веревка. При погружении в воду на необходимую глубину, потягивая за веревку, пробку открывают, сосуд заполняется водой, о чем свидетельствует прекращение появления пузырьков воздуха на поверхности воды. Веревку опускают, бутыль автоматически закрывается. После извлечения батометра притертую пробку заменяют стерильной ватной (которая должна быть завернута в бумагу и находиться в комплекте с батометром). Для взятия проб с большой глубины (более 30 м) можно использовать приборы Исаченко, Рутнера, Романенко-Младова. При отсутствии батометров пробу воды можно отбирать с помощью бутыли, в пробку которой монтируют две стеклянные трубки, соединенные резиновым шлангом. Одна трубка длинная и доходит до дна бутыли, другая - короткая. К резиновому шлангу привязывают веревку. Бутыль на тросе опускают в водоем и на заданной глубине, дернув за веревку, снимают резиновую перемычку со стеклянных трубок, вода начинает поступать в длинную трубку, а через короткую выходит воздух. После отбора пробы, бутыль достают из водоема, тут же закрывают ватными пробками отверстия стеклянных трубок и отправляют на исследование. Родниковую воду берут непосредственно из струи или из середины текущего родника, на расстоянии 10-15 см от поверхности и дна. Артезианскую и колодезную воду забирают на глубине 10-15 см от поверхности воды. Из проруби пробы отбирают на глубине 10-15 см от нижнего края 40 льда. Из открытых водоемов, как правило, берут серию проб на разном удалении от берега на различной глубине с учетом места водозабора и движения воды. Лед, используемый на пищевых предприятиях и в хранилищах, также подвергается санитарно-микробиологическому исследованию. Для анализа берут кусок льда не менее 2 кг, в лаборатории его обмывают стерильной водой и стерильными инструментами из глубины вырубают несколько кусочков так, чтобы общая масса была около 500 г. Лед помещают в стерильную посуду и оставляют при комнатной температуре, после растаивания исследуют как воду. Пробы сточных вод также забирают в стерильные бутыли. Однако объем каждой пробы может колебаться от 500 до 10 мл в зависимости от места взятия (при проверке отдельных этапов очистки, после обработки, перед сбросом в водоем) и от задач анализа.

Рис.. Батометр.

Рис.. Батометр Молчанова. Рис..Автоматический портативный батометр

Загрязненность воды определяется по общей микробной обсемененности и обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов – индикаторов наличия выделений человека и животных. Для изучения общей обсемененности исследуемой воды определяют общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (МАФАМ), способных в результате инкубации при 37°С в течение 24 часов образовывать, видимые невооруженным глазом или при увеличении в два раза, колонии на питательной среде. Исследуют общее число МАФАМ в 1 мл воды.

Определение общего числа микроорганизмов в воде, образующих колонии на питательной среде.

Метод определяет в воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном aгape при температуре 37°С в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

При исследовании водопроводной воды берут не менее 2-х объемов по 1 мл;

вода водоемов: чистая – 1, 0; 0, 1 мл;

загрязненная – 0, 01; 0, 001 мл.

Для посева объемов 0, 1 мл и меньше, исследуемую воду разводят стерильной дистиллированной водой, готовя 10-кратные разведения. По 1 мл каждого разведения засевают на пита­тельную среду.

1 день. На дно стерильных чашек Петри наливают по 1 мл исследуемой воды (из каждой пробы не менее двух объемов), в эти же чашки выливают 8-12 мл МПА, расплавленного и остуженного до 45-49°С, интенсивно перемешивают питательную среду с во­дой, оставляют чашки на горизонтальной поверхности до застывания агара, после чего помещают в термостат на 24 часа при 37°С.

2 день. Подсчитывают все выросшие колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Учитывают чашки на которых выросло не более 300 изолированных колоний и производят расчет. Количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды.

Если на одной из 2 чашек подсчет невозможен, результат выдают на основании учета колоний на одной чашке. Если на двух чашках имеет место рост расплывчатых колоний, не распространяющийся на всю поверхность чашки, или выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают «число КОЕ/ мл – ориентировочно».

Если подсчет колоний на чашках невозможен, то в протоколе отмечают «сплошной рост». Общее количество МАФАМ воды в 1 мл не должно превышать 100.

2. По демонстрационным препаратам изучить результаты опыта по проведению санитарно-бактериологического исследования воды.

Вопросы для обсуждения.

1. Микроорганизмы – представители нормальной микрофлоры воды. 2. Оценка воды как среды обитания микроорганизмов. 3. Значение микрофлоры воды в эпидемиологии инфекционных заболеваний. 4.Характеристика БГКП (бактерий группы кишечной палочки) и виды микроорганизмов, входящих в эту группу. 5. Показатели, свидетельствующие о свежем фекальном загрязнении воды. 6. Санитарно-бактериологические показатели загрязненности воды. 7. Характеристика методов определения загрязненности воды (титрационный метод, метод мембранной фильтрации, метод прямого определения). 8. Методы использующиеся для определения БГКП в воде.