Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Определение глюкозы в крови
|
|
Л абораторная работа
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.
Принцип метода
При окислении Д-глюкозы кислородом воздуха под действием фермента глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски полученного раствора пропорциональна концентрации глюкозы в пробе.
ХОД РАБОТЫ
| Опытная проба | Калибровочная проба | Холостая проба | |
| Рабочий раствор, мл Сыворотка крови Калибратор, мл Вода дистил. | 2, 0 0, 04 - - | 2, 0 - 0, 04 - | 2, 0 - - 0, 04 |
Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют 15 минут при 370С или в течение 25 минут при 18-250С. Через5-10 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхнуть. После окончания инкубации измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кювете с толщиной поглощаемого слоя 5 мм при длине волны 490-540 нм.
Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:
Ео
С = -------------- х 10, где Ео – оптическая плотность опытной пробы;
Ек Ек – оптическая плотность калибровочной пробы;
10-концентрация глюкозы в калибраторе.
Результат:
Вывод:
1. Количественное определение глюкозы в моче с помощью диагностической тест-полоски «Глюкофан», «Глюкотест»
Принцип теста: определение основано на специфической энзимотической реакции с использованием ферментов глюкозооксидазы и пероксидазы. Окисление глюкозы кислородом катализируется ферментом глюкозооксидазой. При этом образуется глюкозолактон и пероксид водорода, который в последующей реакции, катализируемой ферментом пероксидазой, окисляет хромогенную систему с образованием интенсивно окрашенных продуктов.
Ход работы:
Тест – полоску погружают в исследуемую мочу и немедленно вынимают. Через 20-30 секунд сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой
Результат:
Вывод:
Метод однократной сахарной нагрузки. Сахарные кривые на занятии разбираются по результатам анализа: у больного, при построении сахарных кривых, наблюдалась следующая динамика уровня сахара (ммоль/л):
| N | исходный уровень | 30 минут | 60 минут | 90 минут | 120 минут | Коэффициенты Рафальского и Бодуэна | При каком заболевании характерно |
| 4, 6 | 5, 5 | 6, 0 | 5, 7 | 4, 6 | Алиментарная гирегликемия | ||
| 4, 5 | 9, 0 | 7, 7 | 6, 3 | 4, 5 | Гепатит | ||
| 4, 7 | 7, 9 | 11, 3 | 10, 1 | 9, 8 | Латентный сахарный диабет | ||
| 6, 0 | 9, 0 | 12, 4 | 12, 7 | 12, 4 | Сахарный диабет | ||
| 5, 2 | 8, 0 | 11, 0 | 8, 0 | 5, 2 | Гипертиреоз | ||
| 3, 2 | 3, 8 | 4, 2 | 3, 8 | 3, 2 | Гликогеноз | ||
| 2, 9 | 3, 3 | 4, 0 | 2, 7 | 2, 7 | Инсулома |
Построить сахарные кривые и дать оценку в каждом случае.