Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Тема: Биохимия печени.
|
|
ЦЕЛЬ: 1.Обобщить материал по биохимии печени в обмене углеводов, липидов, аминокислот, белков.
2.Изучить обмен гемоглобина.
3.Ознакомиться с методом количественного определения билирубина.
ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ.
1. Биологическая роль печени в обмене углеводов, липидов, аминокислот, белков.
2. Важнейшие механизмы обезвреживания веществ в печени: микросомальное окисление, реакции конъюгации / глюкуронидная, сульфатная, аминокислотная/. Примеры обезвреживания ксенобиотиков, продуктов гниения белков. Значение метаболизма лекарственных веществ. Представление о химическом канцерогенезе.
3. Распад гема. Образование билирубина и билирубинглюкуронида. Пути выведения билирубина и других желчных пигментов. Значение определения желчных пигментов для диагностики болезней печени, желчных путей и крови. Понятие о желтухе новорожденных.
4. А. Рассмотреть схему реакций окисления веществ в микросомах:
О2 RH
НАДФН+Н+
цитохром Р-450
НАДФ+
Н2О
RОН
Б. Обратить внимание на то, что цитохром Р-450 катализирует реакции гидроксилирования, в которых органический субстрат RН гидроксилируется до RОН за счет одного из атомов кислорода О2, тогда как второй атом кислорода восстанавливается до Н2О, в результате присоединения восстановительных эквивалентов от НАДН или НАДФН. Таким образом гидроксилируются стероиды в процессе образования гормонов надпочечников, ряд лекарственных препаратов и других чужеродных веществ. В результате гидроксилирования уменьшается токсичность и повышается растворимость чужеродных соединений, что способствует выведению их из организма.
5. Рассмотреть таблицу “Виды желтух”, обратив внимание на
биохимические показатели продуктов обмена билирубина в крови, моче и кале.
Таблица “Виды желтух”
| Название желтух | Причины возникновения | Биохимические показатели продуктов обмена билирубина | ||
| Кровь | Моча | Кал | ||
| 1. Гемоли-тическая | Разрушение эритроцитов | Увеличение непрямого билирубина | Увеличение уробилина | Увеличение уробилина, стеркобилина |
| 2. Паренхи-матозная (печеночно-клеточная) | Повреждение клеток печени вирусами, токсическими гепатотропными соединениями | Увеличение содержания прямого и непрямого билирубина | Появление прямого билирубина снижение уробилина в моче | Уменьшение выделение стеркобилина |
| 3.Обтура-ционная (механическая) | Механические нарушения оттока желчи в кишечник | Увеличение содержания прямого били рубина | Увеличение прямого билирубина | Отсутствие желчных пигментов |
Лабораторная работа.
Работа № 1. Количественное определение билирубина сыворотки крови по методу Иендрашика.
В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт), по способу определения «непрямой» и растворимый (диглюкуронид), по способу определения «прямой». Вместе обе формы составляют общий билирубин.
Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших количествах – 8, 5 – 20, 5 мкмоль/л, причем 75% из них составляет билирубин, связанный с белками (нерастворимый).
При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия.
Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид реагирует с диазосмесью непосредственно. Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива. Диазосмесь готовят (в количестве, достаточном для всей учебной группы), смешивая 10 мл 0, 5%-ного р-ра сульфаниловой кислоты и 0, 3 мл 0, 5%-ного р-ра нитрита натрия.
ХОД РАБОТЫ. Готовят две пробирки (контрольную и опытную).
Составляют реакционную смесь по схеме:
| Проба | Сыворотка крови, мл | Кофеиновый раствор, мл | Дистилли-рованая вода, мл | Диазо-смесь, мл |
| Опытная Контрольная | - | 3, 5 3, 5 | - | 0, 5 0, 5 |
Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перемешивают, ставят на 20 мин в темноту, затем колориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром (длина волны 500-560 нм) против контроля.
Если в пробах развивается слабая окраска, то перед колориметрированием в обе пробирки добавляют по 3 капли 30%-ного р-ра NаОН. При этом цвет р-ра переходит в зеленый, а при большей концентрации билирубина в синий, часто наблюдается исчезновение мути. Пробы колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром. Расчет проводят по калибровочному графику.
ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ. Основная:
1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. – 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002, с. 506-508, 551-566.
2. Биохимия: Учебник/Под ред. Е.С. Северина. –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003, (Серия XXI век), с. 616-655.
3. Николаев А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2001, с. 411-426.
4. Лекционный материал.
Дополнительная:
1. Бородин Е.А. ‘‘Биохимический диагноз’’, часть 1, Благовещенск, 1991.
2. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. ‘‘Биохимия для врача’’, Екатеринбург, 1994.
3. Клиническая биохимия /Под ред. В.А. Ткачука –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. -360 с. –(Серия XXI век)
4. Клиническая биохимия /Пер. с англ. –М. –СПб.: «Издательство Бином» - «Невский Диалект» 1999. -368 с., ил.
5. Марри Р. и соавтор. ‘‘Биохимия человека’’ М.: Мир, 1993, т. 1.