![]() Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками
1. Специальное оснащение: - стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О aß (I), А ß (II), В а(III) и АВ о(IV), титр не менее 1: 32; - 2 серии; - изотонический 0, 9% раствор хлорида натрия; - белые фарфоровые или любые другие белые планшеты со смачиваемой поверхностью; - пипетки, маркированные для каждой группы сыворотки; - стеклянные, пластмассовые палочки или другой материал для перемешивания капель крови и сыворотки каждой группы в отдельности; - песочные часы на 5 мин. (таймер с сигналом); - цветные марки с указанием группы крови; штативы для пробирок; - пробирки 10x100 мм; - специальные штативы для стандартных сывороток или реагентов. 2. Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток. - Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре +15 -+25°С. - На пластине для определения группы крови с левой стороны надписывают Оаß (анти-А+В), в середине - Аß (анти-В) и справа - Ва (анти-А), на верхнем крае - фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. - Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0, 1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп 2-х серий для исключения ложного результата. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: Оаß (анти-А+В), Аß (анти-В) и Ва (анти-А). - Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0, 01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10: 1. - Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой - После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. - Наблюдение за ходом реакции проводится в течение 5 минут. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует вести, до 5 минут, ввиду возможности более поздней агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. - На 3-ей минуте в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0, 05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5-ти минут. Оценка результата: реакция в каждой капле может быть положительной (наличие пескообразной или лепестковой агглютинации эритроцитов) или отрицательной (отсутствие агглютинации). Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови (Схема 1).
Схема 1
Равномерным красным окрашиванием обозначено отсутствие агглютинации, розовое окрашивание с включениями (агглютинатами) - агглютинация. Как видно из приведенной схемы, результат оценивается в зависимости от реакции исследуемых эритроцитов со стандартными сыворотками группы Оaß (анти-А+В), Аß (анти-В), Вa (анти-А). В тех случаях, когда положительный результат (агглютинация) получен с сывороткой всех трех групп, для исключения неспецифической агглютинации производится контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВо (IV), не содержащей групповых агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой контрольной пробе позволяет учесть положительный результат с сыворотками групп Оaß (анти-А+В), Аß (анти-В), Вa (анти-А) как истинный, т.е. принадлежность исследуемой крови к группе АВ (IV). При наличии панагглютинации, т.е. агглютинации со всеми сыворотками и, соответственно, невозможности определить групповую принадлежность по системе АВО, кровь больного подлежит обязательному направлению на СПК или в ОПК для исследования специалистом-изосерологом. Опеределение группы крови моноклональными реагентами анти-А и анти-В: Определение группы крови системы АВО моноклональными реагентами анти-А, анти-В, анти-АВ. Реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными гемагглютинирующими сыворотками. Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышечных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные цоликлоны представляют разведенную асцитическую жидкость мышей – носителей гибридомы, содержащую IgM против антигенов А и В. Цоликлоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВО-сыворотки. При использовании цоликлонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ. Порядок проведения исследования. - На планшет или пластину индивидуальными пипетками нанести реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ по одной большой капле (0, 1 мл) под соответствующими надписями. - Рядом с каплями реагентов нанести по одной маленькой капле исследуемой крови (0, 01-0, 03 мл). - Смешать кровь с реагентом (в лунке планшета - тщательно вымытым сухим шариком, покачивая планшет; на пластине - чистой индивидуальной сухой палочкой). - Наблюдение за ходом реакции с реагентами следует вести при легком покачивании пластины или планшета в течение 5 минут. Агглютинация эритроцитов обычно наступает в первые 3-5 сек,, однако наблюдение следует продолжить ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. - Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. - Учет результатов реакции агглютинации при определении групп крови моноклональными реагентами представлен в схема 2: Схема 2
(+) - наличие агглютинации, (-) - отсутствие агглютинации
При положительном результате реакции агглютинации со всеми реагентами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов, для чего следует смешать на плоскости 1 каплю изотонического раствора хлорида натрия с 1 каплей исследуемых эритроцитов. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия. Окончательный результат определения групповой и резус-принадлежности выносится на лицевую сторону медицинской карты с указанием даты и за подписью лечащего врача.
|