МНС-глав.компл.гистосовм

+Главный комплекс гистосовместимости - это группа генов и кодируемых ими антигенов клеточной поверхности, которые играют важнейшую роль в распознавании чужеродного и развитии иммунного ответа.Молекулы I и II классов контролируют иммунный ответ. Они сочетанно распознаются поверхностными дифференцировочными CD-Ar клеток-мишеней и участвуют в реакциях клеточной цитотоксичности, осуществляемой цитотоксическими Т-лимфоцитами (ЦТЛ).

• Гены MHC I класса определяют тканевые Аг; Аг класса МНС I представлены на поверхности всех ядросодержащих клеток.

• Гены MHC II класса контролируют ответ к тимусзависимым Аг; Аг класса II экспрессируются преимущественно на мембранах иммунокомпетентных клеток, включая макрофаги, моноциты, В-лимфоциты и активированные Т-клетки.

13.Цитокины. Это биологически активные вещества пептидной природы, Они регулируют межклеточные и межсистемные взаимодействия, определяют выживаемость клеток, стимуляцию или подавление их роста, дифференциацию, функциональную активность и апоптоз, а также обеспечивают согласованность действия иммунной, эндокринной и нервной систем в нормальных условиях и в ответ на патологические воздействия. К цитокинам относятся интерфероны, колониестимулир факторы, хемокины, трансформирующие ростовые факторы; группа факторов некроза опухолей; интерлейкины. Интерлейкины м б разделены на противовоспалит цитокины, ростовые и дифференцировочные факторы лимфоцитов, отдельные регуляторные цитокины. Основ функ цитокинов явл: регуляция гемопоэза, иммунного ответа и воспалительных процессов, участие в ангиогенезе, апоптозе, хемотаксисе, эмбриогенезе. В клинической медицине цитокины важны как терапевт агенты и мишени для специфич антагонистов при различ им и воспал заболев.

17. Врожденный (неспецифич) иммунитет обуславливает однотипные реакции на любые чужеродные антигены. Главным клеточным компонентом системы неспецифического иммунитета служат фагоциты, основная функция которых - захватывать и переваривать проникающие извне агенты. Для возникновения подобной реакции чужеродный агент должен иметь поверхность, т.е. быть частицей (например, заноза).

14.Фагоцитарные клетки - это полиморфноядерные лейкоциты и клетки моноцитарно-макрофагального ряда - выполняют важн роль в защите против гноеродных бактерий и других внутриклеточных м/о. Фагоцитоз- способность определенных клеток поглощать и переваривать плотные частицы.Опсонины- антитела, относ к классу иммуноглобулинов G (IgG) и в значительной степени определяющие противобактер, противовирус и противоопухолевую сопротивляемость организма.Стадии фагоцитоза: 4 стад фагоцитоза. 1 .стадия сближения. Фагоцит сближается с объектом фагоцитоза, что может быть результатом случайного столкновения в жидкой среде. Но главным механизмом сближения, явл хемотаксис — направленное передвижение фагоцита по отношению к объекту фагоцитоза. Активное передвижение отчетливо наблюдается при наличии опорной поверхности клетки. Подобной поверхностью в естественных условиях служит ткань.2. стадия прилипания. Коснувшись объекта, фагоцит прикрепляется к нему. Лейкоциты, прилипшие в очаге воспаления к стенке сосуда, не отрываются даже при большой скорости кровотока. В механизме прилипания большую роль играет поверхностный заряд фагоцита. 3. стадия поглощения. Объект фагоцитоза может перемещаться двумя способами. В одном случае оболочка фагоцита в месте контакта с объектом втягивается и объект, прикрепленный к этому участку оболочки, втягивается в клетку, а свободные края мембраны смыкаются над объектом. 4. стадия внутриклеточного переваривания. К вакуоли, содержащей фагоцитированный объект (фагосоме), присоедин лизосомы и содерж в них неактивные ферменты, активируясь, изливаются в вакуоли. Образуется пищеварительная вакуоль. В ней устанав рН около 5, 0, что близко к оптимуму ферментов лизосом.

15.Комплемент. Это группа белковых соединений, участвующих в цепочке иммунных реакций. Комплемент может участвовать в уничтожении бактерий, подготавливая их к поглощению макрофагами. Система комплемента состоит из девяти сложных биохимических соединений. Система комплемента способствует стимуляции фагоцитоза, хемотаксиса (привлечения или отталкивания клеток), выделению фармакологически активных веществ (гистамина), усиливает бактерицидные свойства сыворотки крови, активирует цитолиз (распад клеток) и совместно с фагоцитами принимает участие в уничтожении микроорганизмов и антигенов. Каждый из компонентов комплемента играет роль в иммунном ответе.Недостаточность комплемента С 1 вызывает снижение бактерицидности плазмы крови и способствует частому развитию инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей, хронического гломерулонефрита, артрита, отита.

Комплемент С3 подготавливает антиген к фагоцитозу. При его недостаточности значительно снижается ферментативная и регуляторная активность системы комплемента, что приводит к более тяжелым последствиям, чем недостаточность комплементов С. и С2, вплоть до смертельного исхода. Его модификация откладывается на поверхности бактериальной клетки, что приводит к образованию отверстий в оболочке микроба и его лизису, т. е. растворению лизоцимом. При наследственной недостаточности компонента С5 встречаются нарушение развития ребенка, дерматиты и диарея. Специфический артрит и нарушение свертываемости крови наблюдаются при дефиците С6. Диффузные поражения соединительной ткани возникают при снижении концентрации компонентов С2 и С 7. Врожденная или приобретенная недостаточность компонентов комплемента способствует развитию различных заболеваний как в результате снижения бактерицидных свойств крови, так и вследствие накопления в крови антигенов. Кроме недостаточности, встречается также и активация компонентов комплемента.Активация С 1 приводит к отеку Квинке. Активно потребляется комплемент при термическом ожоге, когда создается дефицит комплемента, что может определить неблагоприятный исход термической травмы. Нормальные антитела выявлены в сыворотке здоровых людей, которые ранее не болели.Эти антитела возникают при наследовании или же антигены поступают с пищей, не возбуждая соответствующего заболевания. Обнаружение таких антител свидетельствует о зрелости и нормальном функционировании иммунной системы. К нормальным антителам относится, в частности, пропердин.Это высокомолекул белок, обнаруживаемый в сыворотке крови. Пропердин обеспечивает бактерицидное и вирусонейтрализирующее свойства крови (в совокупности с другими гуморальными факторами) и активизирует реакции специализированной защиты.

18.Иммунологич.толерант. Это отсутствие специфич иммунного ответа на собственные антигены организма (аутоантигены).В период внутриутробного развития фрагменты аутоантигенов могут заноситься в тимус с током крови. В тимусе происх встреча функционально незрелых тимоцитов, уже имеющих антигенраспозн рецепторы, с антигенпредста клетками, несущими на поверхности аутологичные пептиды. Для незрелого тимоцита связывание его антигенрас-познающего рецептора с аутологичным пептидом служит сигналом апо-птоза (гибели) или превращения в «анергичную» клетку, не способную в дальнейшем активироваться при контакте с данным антигеном. Приобретенная во внутриутробный период развития организма иммунол толерантностьсохраняется на протяжении всей жизни. Иммунолог толер характер: -отсутствием ответа на антиген;

-отсутствием элиминации антигена при повторном его введении;

-отсутствием антител на данный антиген. Сущ 2 вида иммун толер:

-естественная - развивается при попадании антигена во внутриутробном периоде. Теория формирования: удаление клеток, которые имеют рецепторы к собственным антигенам, или их блокада избытком антигена. Эта роль выполняется тимусом.

-приобретенная - можно вызвать высокими или очень низкими дозами антигена. Механизмы иммунологической толерантности: -супрессорный Т- супрессор действует на В- лимфоцит; -Т- супрессор подавляет функции Т- хелперов; -блокада антиген связывающих рецепторов; -клональная делеция.

19.Гуморал.факторы врожд.иммунитета. Первая фаза защиты человека от инфекции, называемая врожденный иммунитет, включае т: Механический барьер в виде эпителиальной поверхности, защищающей человека от проникновения микроорганизмов. Бактерии, которые прошли через этот барьер, встречаются с двумя следующими линиями защиты. Комплемент. Бактерии активируют альтернативным путем комплемент, который находится в плазме и может опсонизировать или разрушать бактерии.

Нейтрофилы. Макрофаги. Бактерии поглощаются макрофагами, имеющими на поверхности рецепторы, общие для всех бактерий (например, к липополисахариду – СД14). После связывания бактерий с рецепторами макрофагов, происходит инициирование синтеза цитокинов макрофагами, а бактерии поглощаются макрофагами и перевариваются ими.

NКклетки. Вирусинфицирован клетки разрушаются NK-лимфоцитами (естеств киллерами).

Активация комплемента альтернативным путем и захват микроорганизмов тканевыми макрофагами имеют место в ранние часы после инфицирования. Далее включаются механизмы адаптивной защиты – гуморальный и клеточно-опосредованнный иммунный ответ.

Ранний неадаптивный ответ важен по 2-м причинам.-дает возможность контро-лировать инфекцию до развития адаптивного ответа, он развивается быстро, так как не требует клональной селекции лимфоцитов и, следовательно, не требует латентного периода, как это происходит при пролиферации лимфоцитов и дифференцировке их в эффекторные клетки.- ранний ответ в дальнейшем влияет на адаптивный ответ за счет выработки цитокинов макрофагами.

Основ отличия врожденного иммунитета от адаптивного следующие:

– начинает действовать немедленно после инфицирования;

– нет иммунологической памяти;

– отсутствует специфичность.

20.Адаптивн.им.(приобрет.) Приобретённый иммунитет — способность организма обезвреживать чужеродные и потенциально опасные микроорганизмы (или молекулы токсинов), которые уже попадали в организм ранее. Представляет собой результат работы системы высокоспециализированных клеток (лимфоцитов), расположенных по всему организму. Считается, что система приобретённого иммунитета возникла у челюстноротых позвоночных. Она тесно взаимосвязана с гораздо более древней системой врождённого иммунитета, которая является основным средством защиты от патогенных микроорганизмов у большинства живых существ.Различают активный и пассивный приобретённый иммунитет. Активный может возникать после перенесения инфекционного заболевания или введения в организм вакцины. Образуется через 1-2 недели и сохраняется годами или десятками лет. Пассивно приобретённый возникает при передаче готовых антител от матери к плоду через плацентуили с грудным молоком, обеспечивая в течение нескольких месяцев невосприимчивость новорожденных к некоторым инфекционным заболеваниям. Такой иммунитет можно создать и искусственно, вводя в организм иммунные сыворотки, содержащие антитела против соответствующих микробов или токсинов (традиционно используют при укусах ядовитых змей).

21.Формир.им.ответа на Т-завис антигены. Т-зависимые лимфоциты или Т-клетки являются основными компонентами иммунной системы. Они иммуноспецифичны и способны обеспечивать иммунологическую память и функционировать в нескольких регуляторных и эффекторных моделях. Основной предпосылкой их участия в иммунном ответе служит Т-клеточное распознавание антигена. Т-клетки клонально ограничены (рестриктированы), поскольку каждая из них содержит уникальный рецептор, способный взаимодействовать с определенным антигеном. У 95% Т-лимфоцитов Т-клеточный рецептор (TcR)состоит из α - и β -полипептидных цепей, с константными участками, расположенными ближе к поверхности клетки, и вариабельными, удаленными от поверхности клетки, которые соединяются с уникальным антигеном. Благодаря различию в структуре дистальных отделов а- и β -цепей, т. е. полиморфизму в семействе TcR, возможно развитие различных клонов Т-клеток (М.Дэвис, 1988). Механизмы генерации этого разнообразия аналогичны описанным выше для иммуноглобулинов, с той разницей, что перетасовка генетических компонентов, кодирующих различные элементы TcR, вовлекает хромосомы 7 и 14. Целая молекула цепи рецептора имеет трансмембранный участок и цитоплазматический хвост. Последний используется для передачи сигнала внутрь клетки. В целом эта структура очень похожа на структуру связанного с клеткой Ig и, TcR, также как и молекулы 1-го и 2-го класса ГКГС, являются членами суперсемейства Ig-генов.Недавно, была идентифицирована часть Т-клеток,. которые вместо α β -цепей в TcR имеют γ δ -цепи. Эти Т-клетки похожи на обычные α β -Τ -клетки, но отличаются мультипликацией небольшого участка второго экзона вариабельного гена антигенного рецептора. Они составляют не более 5% Т-лимфоцитов, но концентрируются в слизистых ЖКТ и урогенитальных органов, а также эпидермисе. Истинная их роль еще не выяснена. Они могут принадлежать к более ранним стадиям внутритимусного созревания или специализироваться на обеспечении иммунных ответов в лимфоидных элементах покровов тела.

22.Формир.им.ответа на т-независ АГ. АГ этой гр., в основном, относ-ся к полисах. и хар-тся многократным повторением структурно идентичных эпитопов. Подобное однообраз. Привод. к многоточечн. взаимод-ю с В-клеткой, и, как следствие, к их активации без помощи Т-клеток, что и обеспеч. полноцен. Развитие B-клеток до зрел. плазмоцитов, продуцирующих АТ.Кроме того, в структуре нек-ых тимуснезависимых АГ имеются последовательности с поликлональной митогенной акт-ю (напр., бактериальн. липополисах), что также внос. свой вклад в развит. В-кл. в обход помощи со стороны Т-кл. Подобное св-во позвол. предполож. наличие в струк. Т-независимых АГ митогенных участков.Мног. компоненты микробов, такие как бактериал. полисахариды, липополисахариды, высокополимерн. белки, могут включ. В-кл. без доп. помощи со стороны хелперных T-клеток. Эта категория АГ получ. название тимуснезавис АГ (англ. " TI antigens"..Тимуснезависимые АГ (TI-АГ) подраздел-ся на два класса, кот. активируют В-кл. разн. способом: TI-1 АГы и TI-2 антигены

23.АГ эр-тов. На пов-ти эри-тов имеется более 100 АГ, относящ-ся к 14 системам. Наиб. важн явл изогемагглютиногены системы АВО групп крови. По наличию А и В АГ и соответствующих им естественных антител (a- альфа, b- бетта) различают 4 группы у человека: 0 (I) – нет АГ, есть a и b -антитела, А (II) – присутствуют только А АГ и b-АТ, В (III) – есть В АГ и a-АТ, АВ (IV) - есть оба АГ, нет АТ.Людям, имеющ АТ против АГ А и В, нельзя переливать кровь тех, эр-ты кот. несут соответствующ. АГ.Реципиентам I гр. кр. (АТ альфа и бета) нельзя перелив. эр-циты любой из остальн. групп, т.к. наступит агглютинация и лизис этих эритроцитов.

У 85% людей на эр-цитах есть резус-АГ (Rh+), обнаружен. впервые у обезьян макака-резус. Такой АГ отсутств. у 15% людей. При наличии у резус-отрицат. женщ плода, на эр-тах котор. есть этот АГ (за счет генов отца), происходит иммунизация матери, и ее АТ могут разрушать эр-ты плода, особенно при повторной беременности.

24.АГ лейкоццитов. На лейкоцитах (лимфоцитах) крови выявлена целая система лейкоцитарных АГ, она получила название HLA (Human Leycocyte Antigens), которая контр-ся генами (ГКГС). HLA-АГ обусловливают несовместимость тканей при пересадках м/у индивидуумами. Наборы HLA-антигенов у каждого человека индивидуальны и только у однояйц. близнецов они одинак. HLA участв. в распознав. АГ и определяют предрасполож к заболеваниям.Гены, контролирующ синтез этих АГ, локализованы в 6 хромосоме. Они заним. обширн. генетический район и делятся на 5 классов. Важнейшее значение в иммунорегуляции имеют гены I и II классов гистосовместимости. Локусы генов I класса локализуются в периферическом плече хромосомы, II класса – ближе к центромере.Молекулы HLA I класса являются гетеродимерами, так как состоят их двух различных цепей (рис.). Одна из них – тяжелая, с молекулярной массой 43 kDa, вторая – легкая, с молекулярной массой 11 kDa, нековалентно связанная с первой. Она представляет собой b2-микроглобулин. Тяжелая цепь имеет три домена (a1, a2, a3), выступающих на поверхности клетки, гидрофобный участок, фиксирующий цепь на мембране, и концевой участок в цитоплазме. HLA –АГ I класса имеется на всех ядросодержащих клетках: лимфоцитах, в меньшей степени – на клетках печени, легких, почек, очень редко на клетках мозга и скелетных мышц. Гены, контролирующие антигены I класса, представлены тремя локусами: HLA-A, HLA-B, HLA-C. В каждом локусе существует несколько аллелей, ответственных за синтез соответствующего антигена (эпитопа) и обозначаемых цифрами. Аллели локусаHLA-A кодируют синтез 21 антигенов, HLA-B - 25, HLA-C – 11 антигенов. С развитием иммуногенетики количество вновь открываемых аллелей постоянно увеличивается. Антигены I класса занимают примерно 1% клеточной поверхности. Они регулируют и ограничивают взаимодействие между Т-киллерами и клетками-мишенями. Отсюда их основная биологическая роль заключается в том, что АГ I класса являются маркерами «своего». Клетки, несущие эти АГ, не атакуются собственными Т-киллерами в связи с тем, что в эмбриогенезе аутореактивные Т-киллеры, распознающие антигены I класса на собственных структурах, уничтожаются или супрессируются.Молекулы II класса системы HLA состоят из двух полипептидных цепей: a (молекулярная масса 34 kDa) и b (молекулярная масса 28 kDa) (рис.). Обе цепи имеют по два домена (a1, a2 и b1, b2), закрепленные в клеточной мембране дополнительным участком. HLA-АГ II класса экспрессированы на В-лимфоцитах, макрофагах, активированных клетках после стимуляции их g-интерфероном. Гены, контролирующие антигены II класса, представлены тремя локусами: HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP. В локусе DR имеется 12 аллелей, в локусе DQ – 9, в локусе DP – 6 аллелей. HLA-АГ II класса участвуют в распознавании чужеродных антигенов, в межклеточных взаимодействиях В-лимфоцитов и макрофагов с Т-хелперами.Антигены системы HLA наследуются по кодоминантному типу, т.е. экспрессируются оба антигена двух хромосом. У индивидуума может быть до 12 аллелей (по 2 из каждого локуса). Набор аллелей на хромосоме (гаплотип) наследуется целиком и существует только 4 возможных комбинации 2-х отцовских и 2-х материнских гаплотипов.

25.Т-хелперы. Регулир. Р-ции как врожден, так и приобретен. Им-та, и позволяют определять тип ответа, который организм окажет на конкретный чужеродный материал. Эти клетки не проявляют цитотоксичности и не участвуют в уничтожении инфицированных клеток или непосредственно возбудителей. Вместо этого, они управляют иммунным ответом, направляя другие клетки на выполнение этих задач.T-хелперы экспрессируют T-клеточные рецепторы (ТКР), которые распознают антигены, связанные с молекулами II класса главного комплекса гистосовместимости. Комплекс молекулы главного комплекса гистосовместимости с антигеном также распознается корецептором клеток-хелперов CD4, который привлекает внутриклеточные молекулы T-клетки (например, Lck), ответственные за активацию T-клетки. T-хелперы обладают меньшим чувствительностью к комплексу молекулы главного комплекса гистосовместимости и антигена, чем T-киллеры, то есть для активации T-хелпера требуется связывание гораздо большего количества его рецепторов (около 200—300) с комплексом молекулы гистосовместимости и антигена, в то время как T-киллеры могут быть активированы после связывания с одним таким комплексом. Активация T-хелпера также требует более продолжительного контакта с антиген-презентирующей клеткой. Активация неактивного T-хелпера приводит к высвобождению им цитокинов, которые оказывают влияние на активность многих видов клеток. Цитокиновые сигналы, создаваемые T-хелперами, усиливают бактерицидную функцию макрофагов и активность T-киллеров. Кроме того, активация T-хелперов вызывает изменения в экспрессии молекул на поверхности T-клетки, в частности лиганда CD40 (также известного под обознач CD154), что создает дополнительные стимулирующие сигналы, обычно требуемые для активации вырабат антитела B-клеток.

32.Механизмы распознования антигена.
Чтобы развился иммунный ответ, внешние антигены сначала должны распознаться иммунной системой. Механизмы распознавания недостаточно изучены, они зависят от характера (типа) антигена, пути проникновения его в организм и т.д. Оптимальный иммунный ответ на наибольшее количество антигенов возникает только после взаимодействия антигена с макрофагами, T- и B-лимфоцитами. Макрофаг при этом играет роль клетки, У обрабатывающейФ антиген. Дендритические ретикулярные клетки в лимфоидных фолликулах и интердигитирующие ретикулярные клетки в паракортикальной зоне лимфатических узлов, как предполагается, также являются специализированными макрофагами, приспособленными для УобработкиФ антигенов для B- и T-клеток соответственно (см. ниже).
«Обработка» заключается в том, что поглощенный макрофагом антиген вновь выводится на его поверхность в комплексе с молекулой MHC (Major Histocompatibility Complex Ц главного комплекса гистосовместимости).
Рецепторы для антигенов на T-клетках распознают комбинацию Уантиген-молекула МНСФ на макрофаге, что приводит к активации Т-клетки и высвобождению различных лимфокинов. T-хелперы распознают антиген в комплексе с молекулой MHC II класса, а T-супрессоры Ц с молекулой MHC I класса. Типичная форма активации В-клетки (T-клеточнозависимая) включает в себя взаимодействие ее и с макрофагами, и с T-клетками. B-клетки распознают некоторые поливалентные антигены непосредственно (T-клеточнонезависимые антигены).

В случае длительного инфекц процесса к инфекц агенту образ антитела и комплекс “агент антитело” (им комплекс) явл активатором системы комплемента по классическому пути.В норме в крови циркулир фрагмент белка С1 - С1qrs, который под влиянием им комплекса становит активным (С1qrs). Этот фрагмент катализирует расщепление С4 на С4а и С4b. Фрагмент С4b соедин с белком С2, образовав комплекс С4b2 становится субстратом для С1qrs, от него отщепл фрагмент C2b, а образов комплекс C4b2a катализ распад С3 на фрагменты.

26.Т-киллеры. представляют собой подгруппу T-клеток, функцией которых является разрушение собственных клеток организма, инфицированных вирусами или другими патогенными внутриклеточными микроорганизмами, либо клетки, которые повреждены или неверно функционируют (например, опухолевые клетки). Как и B-клетки, каждая конкретная линия T-клеток распознает только один антиген. T-киллеры активируются при соединении своим T-клеточным рецептором (ТКР) со специфическим антигеном в комплексе с рецептором главного комплекса гистосовместимости I класса другой клетки. Распознавание этого комплекса рецептора гистосовместимости с антигеном осуществляется при участии расположенного на поверхности T-клетки вспомогательного рецептора CD8. В лабораторных условиях T-клетки обычно выявляют именно по экспрессии CD8. После активации T-клетка перемещается по организму в поисках клеток, на которых белок I класса главного комплекса гистосовместимости содержит последовательность нужного антигена. При контакте активированного T-киллера с такими клетками он выделяет токсины, образующие отверстия в цитоплазматической мембранеклеток-мишеней, в результате ионы, вода и токсин свободно перемещаются в клетку-мишень и из неё: клетка-мишень погибает.Разрушение собственных клеток T-киллерами важно, в частности, для предотвращения размножения вирусов. Активация T-киллеров жестко управляется и обычно требует очень сильного сигнала активации от комплекса белка гистосовместимости с антигеном, либо дополнительной активации факторами T-хелперов.

Для предупреждения развития реакций отторжения необходимо: -типирование тканей по MHC, AB0, Rh; -исключить " специфическую презентацию" - предыдущее попадание антигена трансплантата в организм хозяина; -проводить иммуносупрессивную терапию до приживания трансплантата.

28.Естественные киллеры. Это большие гранулярные лимфоциты, обладающие цитотоксичностью против опухолевыхклеток и клеток, зараженных вирусами. NK являются цитотоксичными; в их цитоплазме находятся маленькие гранулы, содержащие перфорин ипротеазы. Перфорин выделяется непосредственно возле инфицированной клетки и образует поры в её клеточной мембране, через которые заходят протеазы и другие молекулы, приводя к апоптозу или осмотическому лизису клетки. Выбор между апоптозом и лизисом имеет большое значение, поскольку при лизисе зараженной вирусом клетки произойдет освобождение вирионов, а апоптоз приведет к разрушению вирусов вместе с клеткой. Способность NK распознавать «своё» и «чужое» на клетках определяется поверхностными рецепторами. Положительное распознавание происходит когда на клетках-мишенях отсутствует экспрессия молекул MHC, и взаимодействие НК-клеток с инфицированными клетками происходит с участием их собственных (НК-клеток) особых рецепторов, в частности CD2 и CD69, или антител, с которыми они связываются через рецептор для Fc (CD16). Связывание НК с антителами, образовавшими иммунные комплексы с антигенами на поверхности клеток-мишеней, интерпретируется как проявление киллерной клеточной активности, или антителозависимой клеточной цитотоксичности. К примеру вирусы герпеса пытаются избежать распознавание T-киллерами, подавляя экспрессию молекул MHC класса I на поверхности инфицированных клеток; однако в этом случае вирус распознают НК-клетки..

29.Апоптоз клеток. Апоптоз-программирован.гибель клеток в ответ на тот или иной сигнал извне или вследст.реализации внутриклет.программы гибели с образ.апоптозных телец, сод.хроматинфрагменты ДНК, повреж.митохондрии, цитоплазму, окр.оболочками.

30.Антитела. Это специальные белки, продуцируемые В-лимфоцитами, имею­щие характерную общую структуру (в основе тетрамер — симметричный комплекс из двух легких и двух тяжелых полипептидных цепей) и физи­ко-химические свойства, что отражает их второе групповое название — иммуноглобулины. Самым характерным общим свойством антител и их природным предназначением является огромное популяционное разнооб­разие (10⁹—10¹⁶) связывающих свойств в отношении возможных лигандов (антигенов). Fc-фрагменты молекул иммуноглобулинов, которых у чело­века 9 разных вариантов (изотипов), предназначены для взаимосвязи комплексов антиген—антитело с другими белками сыворотки крови и клетками организма.

31.Антигенпредставляющие клетки. Антигенпредставляющие клетки — специализированные клетки, которые поглощают и преобразуют аликвоту антигена до того, как он будет рас­познан лимфоцитами. Для Т-лимфоцитов антиген представляют дендрит­ные клетки, В-лимфоциты и макрофаги. Эти клетки поглощают антиген, расщепляют его до пептидов размером 9—11 или 11—18 аминокислотных остатков (если антиген белок), внутриклеточно формируют комплексы этих пептидов с молекулами MHC-I или II и экспрессируют эти комплек­сы на клеточную мембрану. Одновременно антигенпредставляющие клет­ки экспрессируют специальные корецепторные молекулы и синтезируют активационные цитокины, что строго необходимо для индукции лимфо­цита, распознавшего целевой антиген в направлении развития иммунного ответа. В-лимфоциты способны распознавать (связывать) свободные на-тивные антигены. Но для В-лимфоцитов есть специальные антигенпред­ставляющие клетки — фолликулярные дендритные, которые способны продолжительное время нести на своей поверхности антиген, связанный в комплекс с антителом, который в свою очередь связан с Fc-рецептором мембраны FDC.

1.Иммуноэлектрофорез (ИЭФ) — метод исследования антигенного состава биологических материалов, сочетающий электрофорез и иммунодиффузию. Метод состоит из 2-х реакций: -электрофорез.Разделение белков на фракции под воздействием электрического поля; - реакция иммунной дифузии(РИД). Иммуноэлектрофорез применяется в основном для исследования сывороточных белков. Суть метода заключается в следующем: - в лунку, вырезанную в тонком слое геля, помещают исследуемую сыворотку; - проводят электрофоретическое разделение белков сыворотки; - в геле вырезают бороздку, параллельную направлению миграции белков при электрофорезе, и заполняют ее смесью антител к сывороточным белкам; - разделенные при электрофорезе белки (антигены) и антитела диффундируют навстречу друг другу. В местах связывания антител с антигенами образуются дуги преципитации. Плазма крови: белки, методы деления. Можно определить качественный состав белков или наоборот отсутствие. Используют для анализа любой биологической жидкости, при диагностики иммунодефицитных состояний, для определения белка в моче в клиниках. Необходим как метод последующего наблюдения за очисткой белковых препаратов. Для определения титра. Используют 1 -2% агар Дифко, который заливают обезжиренное стекло. Гель готовят на буфере (фосфатный или др.) Электрофорез проводят в течении 1, 5 – 2ч напр. 60Вт при комн.темп.Результат виден в виде дуг. Методы. 1.Встречный иммуноэлектрофорез: качественная реакция и полукольный метод.2. Диагностический тест.Количественные методы: 1). Ракетный иммуноэлектрофорез (количественный метод) Определение концентрации С мг/мл. (расчит.равнобедр.треугольник дельта S= 1\2 a*h, h=C мг/мл) 2). Перекрестный иммуноэлектрофорез. На стекле в геле делают длинную вырезку, гель удаляют и в полосу заливают антисыв.(ас) Каждый белок движется в др. сторону, соединяясь с антисыв., образуя фореграмму. Определяют белок и его концентрацию. Ас 50 – 80 мкл во влажн. кам. Окрашивание проходит в 3 этапа. 1) отмывание в физ.р-ре 3 дня каждый день меняя раствор.2)высушивание. На гель помещают полоску фильтр.бумаги в местах лунок делают отверстие и помещ. под вентилятор. 3)Окрашивание. Стекло помещают на 10 мин. амидочерный 10-В или бриллиантовый голубой, (или кумаси).

2.Методы ммуноэлектрофореза (ИЭФ) — метод исследования антигенного состава биологических материалов, сочетающий электрофорез и иммунодиффузию.Методы. 1.Встречный иммуноэлектрофорез: качественная реакция и полукольный метод.2. Диагностический тест.Количественные методы: 1). Ракетный иммуноэлектрофорез (количественный метод) Определение концентрации С мг/мл. (расчит.равнобедр.треугольник дельта S= 1\2 a*h, h=C мг/мл) 2). Перекрестный иммуноэлектрофорез. На стекле в геле делают длинную вырезку, гель удаляют и в полосу заливают антисыв.(ас) Каждый белок движется в др. сторону, соединяясь с антисыв., образуя фореграмму. Определяют белок и его концентрацию. Ас 50 – 80 мкл во влажн. кам. Окрашивание проходит в 3 этапа. 1) отмывание в физ.р-ре 3 дня каждый день меняя раствор.2)высушивание. На гель помещают полоску фильтр.бумаги в местах лунок делают отверстие и помещ. под вентилятор. 3)Окрашивание. Стекло помещают на 10 мин. амидочерный 10-В или бриллиантовый голубой, (или кумаси).

3.Модели в иммунологии. In vivo-лаб.жив. in vitro- на культ.кл. In vivo +в усл.организма; -орг.закрыт от нас. in vitro + создаем условия, многократно повторяем. В результате этого взаимодействия получается комплекс «антиген-антитело». Методы введения: 1)в/в. Вводят мышам в боковую хвостовую. Кроликам ушную краевую линию. Происходит активация, гуморальный отвкт, пик АТ на 4 сутки.2)В/б. В районе т/б сустава иглой проткнув кожу, мышцы не задевая моч.пузыря.Стимуляция гуморального им. Пик АТ на 5 сутки. 3)Внутриселезеночный. Микрохирургический метод. Вводят в селезенку или АГ адсорбир.на кусочке микроциллюлозы. Активация гуморального ответа, пик АТ на 3 сутки. 4)В/м. Инъекцию АГ проводят в мышцу бедра задней лапки или ягодичной мышцы кролику. Индукция клеточного им. 5)П/к. вводят в холку мышам.Кроликам в районе ягодицы, холки и непосредственно в лимфоузел. Формируется клеточный и гуморальный ответ. 6) в/кПроводят очень тонкой иглой производят укол в подошву задней лапки. Локальная реакция для тестирования, гиперчувствительность замедленного типа и как тест реакция трансплантант против хозяина. 7)накожно. АГ наносят стекл. палочкой со спинной и брюшной стороны. Для вакц.оспинной вакцины.

4.Иммунологический мониторинг – динамическое слежение за состоянием иммунной системы выбранных групп обслед.особей в определенном интервале времени в данном интервале времени. Разработка нормальной биологической вариации различных параметров иммунной системы. Состояние иммунной системы имеет важнейшее значение в обеспечении гомеостаза организма, защите от всего генетически чужеродного. Состояние иммунной системы имеет важнейшее значение в обеспечении гомеостаза организма, защите от всего генетически чужеродного. Существующие методы оценки иммунного статуса постоянно совершенствуются, однако есть ряд общих правил, которых необходимо придерживаться при оценке иммунограмм: - комплексный анализ, а не оценка одного показателя; - анализ в комплексе с клиническими и анамнестическими данными; - оценка резких сдвигов показателей (не менее 20% от нормы); - анализ в динамике.

5. Взятие биолог матер. В обязательном порядке производится взятие объектов трупа и его частей кусочки органов и тканей трупа (его частей) вырезают острым ножом, пользоваться ножницами во избежание размятая тканей не рекомендуется. Нельзя скоблить поверхность кусочков, особенно слизистую и серозную оболочки. Рыхлые легко распадающиеся ткани и массы (например, содержимое полости матки) берут на нож, не пользуясь пинцетом, и погружают в фиксирующую жидкость в марлевом мешочке.Кусочки вырезают толщиной 0, 5-1, 0 см, длина и ширина может быть различной с таким расчетом, чтобы получаемый срез поместился под стандартное покровное стекло. Кусочки сразу же помещают в фиксирующую жидкость. Маркируют этикеткой. Подпись на этикетках делают черным графитовым карандашом. Для этикеток используют материал, устойчивый к действию фиксирующей жидкости (клеенка, фотобумага и др.); вырезанные кусочки помещают в 10-15% раствор формалина. объем фиксирующей жидкости должен превышать объем кусочков не менее чем в 10 раз. При этом следят, чтобы кусочки в растворе не слипались и не прилегали ко дну банки. Для этого на дно банки кладут слой ваты и раствор периодически взбалтывают. Сливать кровь в пробирку с антикоагулянтом без иглы и медленно чтобы избежать гемолиза. После взятия крови пробирку с образцом медленно перевернуть. Чтобы избежать сгустков, обязательно перемешать кровь в пробирке переворачиванием, не менее 8 раз.Хранение и транспортировка образцов крови производится при температуре 20-250С в течение 2-х суток. Антикоагулянт - гепарин 20-25 Ед/мл крови.

6.Получ.клет.суспен. Приготовление клеточных суспензий выполняют на холоде в стерильных условиях. 1)извлечение органов иммунной системы и освобождение их от остатков соединительной и мышечной ткани 2) Органы гомогенезируют, т.е измельчают в охлажденной среде 199 3)Полученную взвесь клеток пропускают через ряд фильтров 4)Клетки осаждают путем центрифугирования в теч.5 мин. 5)Удаляют надосадок и снова добавляют среду 199 6) Взвесь разводят в 100 раз 3% уксусной кислоты 7)Подсчитывают число клеток в камере Горяева в 25 больших квадратах. Результат выражается кл. млн/мл

7. Колич.оценка лимф. Соотношение лимфоцитов различных органов иммунной системы в норме у мышек. Тимус.До 80 млн тимоцитов (Т – лимфоциты) Костный мозг. 20 млн В – лимфоцитов. Лимфоузел. До 50 млн лимфоцитов, 65% Т – лимфоцитов и 35% В- лимфоцитов. Селезенка 120 – 130 млн лимфоцитов в соотношении 55% В – лимфоцитов и 35% Т-лимфоцитов

8. Опред.жизнеспособ.им.клеток в клет.взвеси. Приготовление клеточных суспензий выполняют на холоде в стерильных условиях. 1)извлечение органов иммунной системы и освобождение их от остатков соединительной и мышечной ткани 2) Органы гомогенезируют, т.е измельчают в охлажденной среде 199 3)Полученную взвесь клеток пропускают через ряд фильтров 4)Клетки осаждают путем центрифугирования в теч.5 мин. 5)Удаляют надосадок и снова добавляют среду 199 6) Взвесь разводят в 100 раз 3% уксусной кислоты 7)Подсчитывают число клеток в камере Горяева в 25 больших квадратах. Результат выражается кл. млн/мл. Число жизнеспособных клеток во взвеси называют эксклюзии, краситель трипановый 0, 1% синий. Второй краситель иозин 0, 1%. Соединяют все части красителей. 0, 5%мл крас. + 0, 1%мл клеточной смеси. В камере горяева подсчитывают 100 клеток. Живые не красятся, мертвые окрасятся, т.к. у них разрушена мембрана и окрасятся в синевато – фиолетовый цвет. Взвесь клеток считают жизнеспособной если мертвых не более 10-15%.

12. Метод выдел.общего кол-ва Т и Влимф. Для выдел лимф из крови используют вещ-ва с определ плотностью 1, 069 – 1, 078. Это фикол-пак; финол – верографин; гисто-пак. При смешивании крови и этого вещества происходит выдел лимфоцитов. Берут кровь с антикоагулянтом, наслаив и центрифуг при 1000об.40мин выд.лимф. Получается 4 фракции: кровь, реактив, кольцо лимфоцитов, плазма. Берут пастерку с грушей и переносят в другую пробирку.Необходимо отмыть. Отмыв забуференным физ.р-ом и ставят мин 10 центрифугировать 1000 оборотов. Отмыв происх 2 раза. Должно остаться 1мл суспензии.Если меньше то разб физ.ром.Пробирки предв.обрабатыв. силиконом.

9. Оценка Т-клеточного звена иммунитета включает: а) Определение общего количества Т-лимфоцитов (CD 3) в крови.CD 3 выполняют в организме эффекторную и регуляторную функции.Эффекторная функция заключается в уничтожении чужеродных клеток.Регуляторная функция (система Т-хелперы - Т-супрессоры) состоит в контроле за интенсивностью развития иммунной реакции.Развитие любого воспалительного процесса сопровождается снижением содержания Т-лимфоцитов. Это наблюдается при воспалениях самой самой разнообразной этиологии: инфекциях, неспецифических воспалительных процессах, после операции, травмы, ожогов, инфаркта, злокачественных опухолей.Повышение Т-лимфоцитов в течение воспалительного процесса - благоприятный признак.Высокий уровень этих клеток при резко выраженных клинических проявлениях такого процесса - неблагоприятный признак, указывающий на вялое течение с тенденцией к хронизации.б) Определение количества Т-лимфоцитов - хелперов (CD 4) в крови. Увеличение количества хелперов свидетельствует о гиперактивности иммунитета, снижение - об иммунологической недостаточности.Ведущее значение в оценке иммунной системы принадлежит соотношению Т-хелперов и Т-супрессоров в периферической крови.Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) CD4/CD8, равный 1, 5-2 - это норма. Индекс равный более 2 говорит о гиперактивности, менее 1, 0 - о иммунодефиците.в) Количество Т-лимфоцитов - супрессоров (CD 8)в крови.CD 8 - клетки-индукторы, которые тормозят иммунный ответ, ыработку антител. Увеличение количества CD 8 говорит о недостаточности иммунитета, снижение - о гиперактивности.

13. Метод выделения общего кол-ва Т-иВ-лимф. а)Т-л – СД2=СД58(эритроциты барана) Соединяются с эритроцитами только Т лимф(разеткообразование) Метод длится 2 суток и не все Тлимф имеют СД2 у с/х жив. б) Методика с применением антииммуноглобулинных сыв. В-л(ВСR)им.М, им.G.Подбирают антиимм.глоб.сыв. => АГ-АТ комплекс. Рецептор В-л – это АГ. Чашку Петри(мал.) обрабатывают антииммуноглобул.сывороткой, т.к. имеет рыхлую поверхность молекулы застревают. И если помещают кольцо лимфоцитов.В лимф.прикрепляются к стенке Тлимф.остаются в растворе, затем сливаются в пробирку под контролем микроскопа. Убир. В лимф. под давлением. в) Отмывание Т и В лимф. Получают объем 1 млТ лимф.и 1мл В лимф.

10. ОценкаB-клеточного звена иммунитета включает определение общего количества B-лимфоцитов (CD 20) в крови. CD 20 отвечают за синтез антител - это клетки гуморального иммунитета. Относительное количество B-лимфоцитов наиболее часто повышается во второй половине воспалительного процесса. Особенно это выражено при вирусных инфекциях.Иммуноглобулины – это гуморальные факторы специфического иммунитета синтезируются плазматическими клетками (В- лимфацитами). Классы: 1) им-лин М.Находится в виде пентомера. Первый контактирует с АТ. Отвечает за первичный им –т. 2) Им-лин G. Мономер.Нейтрализует токсины, вирусы и др.микроорганизмы.Активирует фагоцитоз.Отвечает за вторичный иммуноответ.Единственный может проходить через плаценту у некоторых млекопитающих. 3)им-лин А. Представитель местного им-та.В основном защищ.слизистую и кожу(кишечник) 4) Им-ин Е.Концентрируется в сыв.крови очень мало. Резко возрастает в крови при аллергии и паразитах.5) им-лин Д. В рецепторном аппарате для распознавания АГ В-лимф. Метод: МЕТОДОМ PАДИАЛЬНОЙ ИММУНОДИФФУЗИИ (синоним «определение по Манчини»). Исследуемую сыворотку помещают в лунки агарового геля, который содержит АТ к иммуноглобулинам одного из классов IgG, IgA или IgM в известной концентрации. Иммуноглобулины, диффундирующие из лунок в агар, при взаимодействии с соответствующими АТ образуют кольца преципитации, размер которых прямо пропорционален содержанию иммуноглобулина.

11. Реакция Манчини (или радиальная иммунодифузия). Взаимодействие АГ-АТ.Реакция проходит на буферном агаре Дифко.Тест на опред.АТ указ.в любом биологическом материале.Основана на способности дифундировать в агар и образовывать со смешанной с агара специфические антисывороточные кольца преципитации, площадь которых прямоколлерирует с конц.АГ в иссл.крови. Смг/мл. Через 24ч имгл –ин А не разводят сывороткой. Через 24ч имгл-ин G разводят в 20 раз, через 48ч имгл-ин М разводят в 10 раз. 2мкл сыв. + 38 мкл буф.=G; 2мкл сыв. +18мкл.сыв. = М

14. Методы оценки функц.актив. Реакция бласттрансформации лимфоцитов. Если активно начинают размножаться., то похожи на бласты с большим ядром. ФГА(фитогемаглютинин) получают из семян красной фасоли, провоц. актив. Влимф. Ход реакции: 1) выделение и разделение лимфоцитов 2) клетки культивируют в круглых донных планшетах. Инкубируют их вместе с митогенами. В качестве контроля вместо митогена используют среду 199.За 6 ч до конца реакции в каждую лунку добавляют изотоп Н-3-Т имидин. С использованием радиосчетчика. Резко выр.импульсы в мин подсчитывают и в контроле и в ф. Выражается опыта к контролю.

15. Метод опред.лимф разл.субпопул. Лимфотоксический (цитотоксический) тест.Способность мышиных МКА(моноклональных) АТ класса Мg к соответ. маркером. А также оказывает цитотоксическое воздействие на соотв. субпопуляции лимфоцитов, выделяют с помощью красителя иозина. В лимф.: -В СД5; - В СД20(СД19). Тлимф: Т СД4; - Т СД8. АГ-АТ + комплемент(цитотоксическое действие)Другие клетки будут бесцветными. Ход реакции: 1) выделяют лимфоциты в градиенте плотности 2)Разделяют Т и В лимфоциты 3) В планшет в каждую лунку вносят сусп.лимфоцитов; АТ выст. 40 мин, добавляют комлемент – сыв.морской свинки. Вносят 2% иозин. Считают 200лимфоцитов (окрашенные, красные) живые не окрашиваются.

17.Диагностич.антигены. Эритроцитарные диагностикумы. Представляют собой лиофильно высушенные препараты, полученные на основе эритроцитов барана, к которым химическим путем, присоединены антитела, выделенные из сывороток крови морских свинок, гипериммунизированных типоспецифическим инактивированным антигеном возбудителя соответствующей болезни.

22.Бактериц.активн. Отражает функциональную активность, действие в отношении м/о. И зависит от комплемента и отчасти лизоцима. Проводится в стерильных условиях, куда помещается тест культуру. E.Coli пат.штамм, который. Тест культуру помещают в бульон и помещают иссл.сыв.крови.Измеряют длину волны на спектрометре.Помещают в термостат на 3часа, затем снова на спектрометр. Измерение бактерицидной волны: БАСК% = 100 – дельта D опыт./ дельта D контр. * 100, где Д1 –длина волны после термостатирования, дельта Д2 – после дельта Д=Д2 – Д1

26. Лаб.модел.системы. 1)in vivo-лаб.животные. Достоинства: в условиях организма, недостатки: организм закрыт от нас. В основном используют мышей. Они имеют быстрый цикл развития 19-21 день беременность.Рождаются 10-12 детенышей, через 2-3 мес станоятся половозрелые.Так же используются кролики, крысы 2) in vitro-на культуре клеок. Достоинства: создаем условия; многократное использование.

18.Иммунологический анализ. Основной принцип всех иммунологических методов – это реакция между АТ-АГ.Решает 2 осн.задачи: 1)Выявление АГ применяя известн АТ 2)Определение АТ с помощью известных АГ. РИФ – реакция иммунофлюорисценции.АГ + АТ меченные флюорохромом. Дают контакт 30 минут при 37 С, затем производят тщательный отмыв в физрастворе. Метод обнаружения – флюоресцентное свечение под микроскопом. ИФА – иммуно-ферментный анализ.АГ + АТ с ферментом. Контакт, отмыв, затем добавляют субстрат, который при контакте с АТ-ферментным комплексом дает цветную реакцию. РСК – реакция связывания комплемента.АГ + АТ + комплемент. Контакт. Затем добавляют гем-систему (гемолизин + эритроциты барана). Контакт. Если гемолиза не происходит, значит АГ и АТ связали комплемент. Задержка гемолиза – реакция положительная. Если произошел гемолиз, значит комплемент связан гем-системой – реакция отрицательная. РДП - реакция диффузной преципитиции.АГ + АТ (диффузия в агаровом геле). Метод обнаружения – образование контура преципитации. РНГА – реакция непрямой гемаглютинации. Эритроциты нагружают АГ и при образовании комплекса АГ-АТ происходит агглютинация эритроцитов. РТГА – реакция торможения гамаглютинации. РТГАд – реакция торможения гемадсорбции. РН – реакция нейтрализации.Вирус + АТ. Контакт. Ввод в чувствительную к вирусу систему. Метод обнаружения – нейтрализация инфекционной активности вируса. РСК В основе ее лежит способность комплемента, многофункционального белкового фактора сыворотки теплокровных животных, связываться комплексом антиген-антитело; несвязавшийся комплемент достаточно легко определяется по лизису бараньих эритроцитов, предварительно сенсибилизированных специфическими гемолизинами. При подборе соответствующих концентраций комплемента он будет выявляться только в том случае, когда взаимодействия антигена и антител в испытуемой (или опытной) системе не происходит. На ранних этапах изучения гепатита В она использовалась как метод обнаружения поверхностного антигена вируса гепатита В и антител к нему. В реакции связывания комплемента удавалось титровать антитела к вирусу гепатита А, когда в качестве антигена бралась взвесь вирусных частиц, полученная в результате сложной многоступенчатой экстракции из печени зараженных обезьян. После появления твердофазных иммунологических тестов интерес к использованию реакции связывания комплемента был полностью утрачен.(РНГА; син. реакция пассивной гемагглютинации) метод обнаружения и идентификации антигенов или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы соответ специфич антитела или антигены.

19. Фагоцитар. Акт-ть выраж-ся %-ным отнош-м активн, участвовавш. в фагоцитозе лейкоцитов к общ. числу подсчитан. нейтрофильных лейкоцитов. Сущность: создание способа, позволяющ. Исключ. возможность получ-я ложнозавыш. и ложнозанижен. рез-тов определения за счет созд-я усл-й д/сохр-я in vitro функциональн. св-в нейтрофилов кажд. Конкретн. организма. Ход работы: Для определения фагоцитарной активности лейкоцитов берется кровь (из ушных сосудов или при общих анализах из яремной вены) в количестве 0, 1 мл, вносится в стерильную пробирку с 0, 05 мл 2%-ного раствора лимоннокислого натрия (или гепарина) и осторожно смешивается. После этого в каждую пробирку со стабилизированной кровью вносится убитая при 70°С в течение 30 мин суточная двухмиллиардная культура определенного тест-микроба. В зависимости от цели исследования для постановки опыта могут быть использованы различные виды микроорганизмов. Наиболее часто при изучении состояния естественной резистентности используется культура золотистого или белого стафилококка того или иного штамма (209, 997 и др.).Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают и ставят на 30 мин в водяную баню или термостат при температуре 37┘ 38°С. Через каждые 10 мин пробирки встряхивают, затем из крови готовят тонкие мазки. Их фиксируют метиловым спиртом и окрашивают методом Романовского-Гимза. При микроскопии мазка подсчитывают число фагоцитировавших лейкоцитов (чаще нейтрофилов, но можно также и других клеток - лимфоцитов, эозинофилов, моноцитов) из общего числа подсчитанных. Для получения достоверных результатов количество последних должно быть не менее 100.

32. Порядок проведения иммунологического обследования и лечения. Наличие иммунной дисфункции — это свидетельство наличия у пациента серьезных системных нарушений. Поэтому рез объективной диагностики (клинико-лабораторной и аппаратной), являющейся первым и необходимым этапом лечебного процесса, должны дать ответы на два основных вопроса: какие иммунные реакции пациента и в какой степени нарушены в рез чего они нарушены Факторы, связанные с особенностью организма животного: 1)Возраст2)Генотип(ген.резистентности, влияющий на им.ответ на опред.патоген) 3)Рацион 4)Материнский им.(Форма пассивного иммунитета играет основную роль в защите от инфекции.Кол-во имуноглоб.в молозиве) 5)Наличие врожденных и преобретенных аномалий. Факторы окружающей среды: 1)Плотность попудляции и усл.содержания животных 2)Стресс 3). Сезонность 4) Эколог обстановка. Факторы, связс инфекц агентом: 1) Дозы возбудителя 2)Пути проникновения в организм3)Вирулентность

23. РИД по Оухтерлони(двойной диффузии) — метод идентификации антигенов или антител на основании образования преципитата в результате миграции обоих навстречу друг другу в слое агара. Двойная иммунодиффузионная система представляет собой простую, широко применяющуюся в иммунологии, микробиологии и аллергологии реакционную систему, состоящую из 1% агарозной гелевой пластинки с центральной лункой и радиально расположенными на расстоянии 6-10 мм от нее лунками. В центральную лунку вносят, как правило, антисыворотку, а в периферические — антигены в оптимальной концентрации.Они диффундируют одновременно и радиально, в том числе и навстречу друг другу (двойная диффузия) в течение 18-24 часов. При наличии антигенной специфичности в определенной периферической лунке формируется полоса преципитации между нею и центральной лункой. Таким образом, с помощью известной антисыворотки можно идентифицировать неизвестный антиген или наоборот.

24. Иммунный статус – это комплексная оценка функц.активности системы им. Жив., находящихся под генетическим контролем и зависящ.от возраста, вида, породы, жив., зоны его обитания типа кормления и физиологического состояния.Уровни оценки иммунного статуса. Тесты 1-ого уровня: 1)гемотологические исследования 2)Определение фагоцитарной активности клеток крови 3)Определение содержания лизоцима комплементов, белков острой фазы, бактерицидная активность клеток крови. 4) Определение абсолютного и процентного содержания Т иВлимф.переферической крови. 5) Определение функциональной активности лимфоцитов 6) Определение субпопуляции(количественное определение имглобул.различных классов) 7) Количественное определение иммуноглоб.различных классов в сыв.крови. Тесты 2-ого уровня: 1)определение миграционной активности 2)Определение экспрессии молекул адгезии на поверхн.мембр.нейтрофилов(СD11 и СD12) 3) Определение продукции цитокинов 4) кожные тесты с рядом микробных антигенов 5) Опред. МНС(главный комплекс гистосовместимости)

20.Показат., характ.фагоцит.актив. Завершенный фагоцитоз - показатель, определяемый количеством клеток с завершенным фагоцитозом на 100 фагоцитированных сегментоядерных нейтрофилов. Процесс фагоцитоза складывается из ряда последовательных фаз, финалом которых является разрушение микробов в фагоцитах. Однако установить завершенность фагоцитарного процесса трудно в связи с отсутствием достоверных методов оценки физиологического состояния микробов, поглощенных лейкоцитами.Завершенность фагоцитоза определяется по отсутствию роста микробов внутри лейкоцитов и наличию признаков их разрушения. Техника анализа следующая. В мерную центрифужную пробирку с 5┘ 10 мг щавелевокислого натрия вносят 0, 5┘ 1 мл исследуемой крови. После тщательного перемешивания в пробирку добавляют равное количество двухмиллиардной взвеси микробов (стафилококка, кишечной палочки и др.). После перемешивания смесь помещают в термостат при 37°С на 30 мин. Затем несколько капель исследуемой лейкоцитарно-микробной взвеси вносят в чашку Петри с застывшим хорошо подсушенным 2%-ным мясо-пептонным агаром и распределяют, как при обычном приготовлении мазков крови.Засеянные чашки помещают в термоста при 37°С для выращивания микробов и наступления третьей фазы фагоцитарной реакции, т.е. захватывания микробов фагоцитами. Время экспозиции чашек в термостате может варьировать в зависимости от задач опыта и видов микробов. После окончания установленного срока инкубации приступают к изготовлению мазков-отпечатков. Для этого хорошо очищенные и обезжиренные предметные стекла подогревают на пламени горелки и, положив на поверхность агара, слегка прижимают к мазку крови, находящемуся на поверхности агаровой среды. Приготовленные таким образом мазки-отпечатки высушивают, фиксируют 3 мин метиловым спиртом и окрашивают способом Романовского-Гимза.При микроскопировании препаратов, приготовленных из лейкоцитарно-микробной взвеси, инкубированной в термостате, отчетливо видны различия между жизнеспособными и нежизнеспособными клетками. Первые характеризуются гигантскими размерами, вторые сохраняют исходную величину.В случаях, когда процесс фагоцитоза носит завершенный характер, внутри лейкоцитов отмечаются фрагменты разрушенных клеток, имеющих разнообразную форму, и отдельные микробные тела значительно меньших размеров, чем в лейкоцитах с незавершенным фагоцитозом.

21.Опред.лизоцима. Лизоцим (мурамидаза) —важный фактор гуморального иммунитета. Синтезируют моноциты и макрофаги. Почки отвечают за удаление лизоцима из организма. Расщипляют нуклеотиды, стенки бактерий. Состоит из 130 аминокислот. В больших концентрациях содержится в секретах (слюне, слезах, молозиве). Играет существенную роль в неспецифической противоинфекционной резистентности.Метод основан на способности лизоцима растворять взвешанный в агаре ацетоновый порошок из клеточных оболочек Micrococcus Lysodeikticus и степень литической активности определяется путем зон лизиса вокруг лунки в агаре в кот.вносятся иссл.биоматериал. Ход реакции: Готовят 1% агар Дифко на фосфатном буфере и ставят на водяную баню до полнго растворения. Агар остужают до 58-60º. При этой температуре агар смешивают с тест-культурой в виде суспензии. После смешивания смесь помещают в чашку петри. Толщина агара 4-5мл.В нем вырезают по трафарету на раст. 2 см др.от др. Агар из лунок удаляют.Сыворотку крови разводят в планшетах буфером в 5раз (20мкл сыв.и 80мкл)Если исследуют молозиво, то в 10раз, молоков 2 раза.Разведенные сыв.вносят в лунки по 50мкл. Чашки затем помещают во влажную камеру.Результаты получают через 48 ч.После зон лизиса измеряют диаметр, измер. С мкг/мл и строют колибровочную прямую.

25. Лаборатория клин.иммунолог. Цели и задачи работы лаборатории.Основная цель – это оценка им.статуса как биологического критерия адаптационных возможностей организма животного.Задачи: диагностика иммунодифицитного состояния; диагностика им.патологического состояния при различных заболиваниях; оценка им.статуса жив.при различных клинических состояниях; разработка норм.биологической вариации разл.параметров им.системы., т.е.определение им.мониторинга(динамическое слежение за состоянием им.системы выбран.групп обслед.особей в определенном интервале времени в данном интервале времени); совершенствование качества вакцин, схем вакцинации и специфич.им.терапии. Оценка клин.лаб.показывает: 1) Определение гуморальных и клеточных факторов врожденного и адаптир.им. 2)Проведение иммунологического анализа.

27. Трансгенных животных получают в результате искусственного введения - трансгеноза - чужеродного генетического материала, представляющего из себя фрагмент гена или иную последовательность ДНК, в оплодотворенную яйцеклетку или в ранние зародыши млекопитающих. Подобные модели являются идеальными экспериментальными системами для исследования молекулярно- генетических основ онтогенеза, для изучения функции чужеродного гена, оценки его биологического действия на организм, а также для производства различных манипуляций со специфическими клеточными клонами in vivo. Гнотобиоты - (от греч. gnotos - известный, определенный и bion, род. п. biontos - живущее) (гнотобионты), безмикробные животные и животные, выращенные в условиях полной стерильности. Использование гнотобиотов (морских свинок, мышей, кроликов и др.) в различных областях экспериментальной биологии и медицины привело к формированию в 60-х гг. 20 в. самостоятельного направления - гнотобиологии. Чистая линия — группа организмов, имеющих некоторые признаки, которые полностью передаются потомству в силу генетической однородности всех особей. В случае гена, имеющего несколько аллелей, все организмы, относящиеся к одной чистой линии, являются гомозиготными по одному и тому же аллелю данного гена. В настоящее время чистые линии животных (а первую очередь крыс и мышей) и растений играют важнейшую роль в проведении биологических и медицинских исследований.

28. Моноклональные антитела — антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы. Моноклональные антитела могут быть выработаны на почти любое вещество (в основном белки и полисахариды), которое антитело будет специфически связывать. Моноклональные АТ. Используют как диагностические тесты для инфекционных и онкологических заболеваний, а также лекарственные вещества. лимфоциты иммунизированного животного, например, мыши, гибридизуются с культивируемыми в среде опухолевыми клетками, в данном примере — мышиными миелоблас-тами; в процессе пассажей гибридом удается проводить отбор клонов, синтезирующих антитела с интересующей исследователя специфичностью. Главным преимуществом моноклональных антител является именно стандартная и воспроизводимая в пассажах специфичность в отношении конкретного эпитотипа, поскольку каждый из отобранных клонов содержит генный набор одного иммунного лимфоцита, тогда как обычные сыворотки от иммунизированных животных представляют собой смесь сходных, но не идентичных антител, продуцируемых множеством лимфоцитов. Моноклональные антитела нашли широкое применение в вирусологической практике и экспериментальной вирусологии. С их помощью стало возможным повысить чувствительность и воспроизводимость диагностических тестов. В то же время требуется известная осмотрительность при использовании моноклональных антител для обнаружения и идентификации вирусов.

33. Методы получ сыворотки и плазмы крови. Классический. После получения крови сосуд с кровью ставят в термостат на 30 мин на 37º, затем кровь обводят пастеркой или спицей. Затем ставят в холодильник на 18-20 часов при 4º С

Получение плазмы крови для биохимического исследования. Работа с плазмой предпочтительнее, так как меньше вероятность наступления гемолиза, влияющего на некоторые биохимические показатели. На дно центрифужной пробирки капают несколько капель гепарина и затем в пробирку из вены набирают 6 мл крови. Содержимое пробирки аккуратно перемешивают и центрифугируют 3 мин при 3 тыс. об/мин. Аккуратно пипеткой высасывают плазму и переносят ее в чистую пробирку.

34. Знач.рез.иммун.исслед.в эпизоотол. Противоинфекционный иммунитет. Восприимчивость, резистентность, иммунологическая реактивность как формы биотической конфронтации паразит-хозяин. Защитные системы организма - конституциональная, фагоцитарная, иммунная. Эффекторы противоинфекционного иммунитета - системы, механизмы, реакции.

30.ПЦР – определение МНС 2-ого класса(АГ(эр.барана)-АТ(антисыв.к эр.бар.)+комплемент)Полимера́ зная цепна́ я реа́ кция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, выделения новых генов.Применение ПЦР. ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах. Криминалистика. ПЦР используют для сравнения так называемых «генетических