Лабораторная диагностика дисбактериоза

Дисбактериоз (дисбиоценоз) - изменение количественного соотношения и состава нормальной микрофлоры организма, главным образом его кишечника, при котором происходит уменьшение количества или исчезновение обычно составляющих ее микроорганизмов и появление в большом количестве редко встречающихся или несвойственных ей микробов.

Показания для бактериологической диагностики дисбактериоза кишечника: длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не удается выделить патогенные энтеробактерии; затяжной период реконвалесценции после перенесенной кишечной инфекции; дисфункции ЖКТ на фоне или после проведенной антибиотикотерапии или у лиц, постоянно контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует проводить при болезнях злокачественного роста, у страдающих диспептическими расстройствами, лиц подготавливаемых к операциям на органах брюшной полости, недоношенных или травмированных новорожденных, а также при наличии бактериемий и гнойных процессов, трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты, холециститы и др.).

Посевы изучают на наличие патогенных микроорганизмов и на нарушение соотношения различных видов микробов. Результаты исследования следует считать объективными при анализе роста изолированных колоний в том числе, если можно изучить морфологию и подсчитать количество колоний на чашку Петри. После идентификации проводят пересчет содержания микроорганизмов каждого вида на 1 г исследуемого материала. При обнаружении патогенной микрофлоры необходимо изучить ее чувствительность к антибактериальным препаратам и бактериофагам.

Отбор и доставка материала на дисбактериоз
Материалом для исследования является кал не позже 2 часов после дефекации.
Для получения достоверного результата стул должен быть обязательно утренним, самостоятельным, не на фоне лечения. У грудных детей забирать материал не с памперсов и пеленок.
Одну столовую ложку фекалий помещают в прокипяченную стеклянную баночку.

Лабораторная диагностика дисбактериоза кишечника
Метод исследования - бактериологический: мерный посев исследуемого материала с целью определения количества микроорганизмов наиболее значимых групп.
Этапы исследования:

· приготовление серийных разведений суспензии испражнений;

· посев на питательные среды из разведений;

· учет результатов посева и ориентировочная идентификация микроорганизмов;

· оценка результатов.

ПРИНЦИПЫ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Для определения количества микроорганизмов используют различные методы:

1. прямой подсчет под микроскопом в счетных камерах (этот метод применяется крайне редко);

2. количественный посев на плотные среды с последующим подсчетом выросших колоний;

3. титрационный посев на жидкие питательные среды;

4. специальные методы, учитывающие особенности исследуемого материала.

Количество санитарно-показательных микроорганизмов в исследуемом материале выражают в виде титра или индекса.

Определение микробного числа воды

Водопроводную воду засевают в объеме 1см3 (1 мл). Пробу вносят в стерильную чашку Петри, заливают 10-12 мл расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара, перемешивают с водой. Посев инкубируют при 37°С в течение 1-2 сут. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глубине среды колоний и вычисляют микробное число воды - количество микроорганизмов в 1 мл.

Титрационный метод
Для исследования водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл в глюкозопептонную среду. Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. О брожении судят по наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб производят посевы на среду Эндо.
Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде.
Коли-титр воды измеряется минимальным количеством воды (мл), в котором обнаруживаются БГКП, коли-индекс - количеством БГКП, содержащихся в 1 л исследуемой воды.

Определение микробного числа воздуха

Количественные микробиологические методы исследования воздуха основаны на принципах осаждения (седиментации), аспирации или фильтрации.
Седиминтационный метод. Две чашки Петри с питательным агаром оставляют открытыми в течение 60 мин, после чего посевы инкубируют в термостате при 37°С. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обеих чашках: при наличии менее 250 колоний воздух считается чистым; 250-500 колоний - загрязненным в средней степени, при количестве колоний более 500 - загрязненным.
Аспирационный метод - более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов (прибор Кротова и пробоотборник ПАБ-1).
Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просачивается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.
После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа.